药学论文-紫外分光光度法测定翻白草中总黄酮的含量【摘要】 目的探讨翻百草中总黄酮含量的测定方法.方法以硝酸铝、亚硝酸钠及氢氧化钠为显色剂,利用紫外分光光度计测定翻白草中总黄酮的含量.结果最佳检测波长为 510nm，芦丁质量浓度在 2050mg/L 范围内时，吸收度与质量浓度呈良好的线性关系，回归方程为 y=7.7457x+0.0009(r=0.9996)，平均回收率为 99.52%，RSD 为 1.23%.结论采用紫外分光光度法测定翻白草中总黄酮的含量简便易行，结果稳定可靠. 【关键词】 黄酮类 分光光度法 紫外线 植物 药用ABSTRACT:OBJECTIVETo study assay method of total flavanone content in Potentilla discolor bunge.METHODSWith AlCl3NaNO2NaOH as chromogenic agent, total flavanone content of Potentilla discolor bunge is determined by ultraviolet spectrophotometry.RESULTSThe optimal detective wavelength was 510nm, and absorbability and mass concentration was satisfactory linear relationship at the mass concentration of rutin was in 2050mg/L. The regression equation was y=7.7457x0.0009(r=0.9996), and the average recovery rate was 99.52% and RSD was 1.23%.CONCLUSIONUsing ultraviolet spectrophotometry to detect total flavanone content in Potentilla discolor bunge is simple, accurate, and sensitive.Key words:flavones;spectrophotometry, altravionlet;plants, medicinal翻白草（Potentilla discolor bunge）为蔷薇科植物的干燥全草，含鞣质，植株各部分均含黄酮类化合物1，具有降低血脂、抗菌、止泻和增强免疫功能的作用2.本研究采用紫外分光光度法对翻白草中总黄酮的含量进行了测定，旨在为翻白草药材及制剂的质量控制提供科学依据.1 材料 翻白草全草采集于吉林省龙井市铜佛寺镇，经延边大学药学院生药学教研室吕惠子副教授鉴定为正品翻白草；芦丁对照品购自中国药品生物制品检定所.电子天平及 753 型紫外分光光度计均为上海精密科学仪器有限公司产品；REE52C 型水浴锅为北京市医疗设备总厂产品；旋转薄膜蒸发器为上海亚荣生化仪器厂产品；202 型电热鼓风恒温干燥箱为江苏恒丰仪器厂产品.试剂均为 AR级.2 方法与结果2.1 对照品溶液的制备 精确称取在 105条件下干燥至恒定质量的芦丁标准品 10.0mg，置于 100mL 容量瓶中，加入 700mL/L 乙醇适量，微热溶解，放冷后再加入 700mL/L 乙醇稀释至刻度，摇匀，得质量浓度为 0.10g/L 的芦丁对照品溶液，低温保存，备用.2.2 供试品溶液的制备 精确称取翻白草 100g，用 700mL/L 乙醇回流提取，回收溶剂得浸膏.将浸膏用适量水溶解，乙醚脱脂，置于冰箱中冷却，有绿色沉淀产生，将过滤得到的滤液浓缩，干燥得到棕黄色粉末.准确称取已于105条件下烘干至恒定质量的黄酮样品 20.0mg，用 700mL/L 乙醇定容至 100mL.2.3 测定波长的选择 精确量取对照品溶液和供试品溶液各 5mL，分别置于 25mL 容量瓶中，加入 50g/L 亚硝酸钠溶液 1.0mL，摇匀，放置 6min，加入100g/L 硝酸铝溶液 1.0mL，摇匀，放置 6min，加入 40g/L 氢氧化钠溶液10.0mL，再加入水至刻度，摇匀，放置 15min，在波长为 200700nm 范围内扫描，结果 2 种溶液均在 510nm 处有最大吸收，其它成分对测定无干扰.2.4 标准曲线的绘制 分别精确吸取芦丁标准液0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL 置于 25mL 容量瓶中，加入 50g/L 亚硝酸钠溶液 1.0mL，摇匀，放置 6min，加入 100g/L 硝酸铝溶液 1.0mL，摇匀，放置6min，加入 40g/L 氢氧化钠溶液 10.0mL，加入 700mL/L 乙醇至刻度，摇匀，放置 15min，进样，于波长为 510nm 处测定吸收值（用不含芦丁的空白管对照调零）.得回归方程：y=7.7457x+0.0009（r=0.9996），结果表明，测定芦丁质量浓度在 2050mg/L 范围内呈良好的线性关系.2.5 精确度实验 取对照品溶液于 510nm 波长处测定吸收值 5 次.结果示平均吸收值为 0.252，RSD 为 0.54%（n=6），表明该方法精确度良好.2.6 稳定性试验 取供试品溶液，于 0、10、30、60、90、120min 时测定吸收值.结果表明，总黄酮与铝离子形成的红色络合物在 1h 内稳定，RSD 为1.21%（n=6）.2.7 重现性试验 精确称取药材样品 1.0g，共 5 份，平行试验，于 510nm波长处测定吸收值，结果见 RSD 为 3.03.2.8 加样回收率实验 精确称取于 105条件下干燥至恒定质量的芦丁对照品 100mg，置于 100mL 容量瓶中，以 700mL/L 乙醇溶解，稀释至刻度，摇匀，得芦丁贮备液.取已知总黄酮含量的 5 个批次的样品各 0.5g，置于 100mL 磨口锥形瓶中，加入上述芦丁贮备液 10mL，加入 700mL/L 乙醇 30mL，摇匀，测定510nm 波长处吸收值，按回归方程进行计算处理，结果见平均加样回收率为99.52%，RSD 为 1.23%(表 1). 表 1 加样回收率实验结果2.9 样品的测定 精确称取研碎的样品 0.5g，置于 100mL 磨口锥形瓶中，按照 2.2 项下方法制备样品供试液，同法平行制备 3 份.精确吸取供试品溶液5mL，按照 2.4 项下方法进行操作，在波长为 510nm 处测定供试液的吸收值，按回归方程进行计算处理，见平均含量为 3.23mg，RSD 为 1.86%.3 讨论以芦丁为对照品，以硝酸铝、亚硝酸钠及氢氧化钠为显色剂，利用紫外分光光度计对翻白草中总黄酮的含量进行测定的方法具有简便易行及结果稳定可靠等优点，同时还可对单个黄酮成分进行分析测定.【参考文献】1 钟海军.翻白草的化学成分J.中草药，2000，31（70）：488.2 邹俊利.翻白草的研究进展J.黑龙江医药科学，2006，29（4）：104.