一、抗原抗体的检测,（一）检测原理,抗原与相应抗体可发生特异性结合，并在外界条件影响下出现肉眼可见或借助仪器可检测的各种现象，如凝集或沉淀。借此可用已知抗体（或抗原）检测未知抗原（或抗体），因所采用的抗体常存在于血清中，故称为血清学反应。,Ag,Ag,Ag,Ag,Ag,Ag,Ag,Ag,(二) 抗原抗体反应的特点,1、特异性,2、Ag-Ab结合的带现象与可见性,3、可逆性,V区,抗原决定基,postzone,prozone,前带现象,后带现象,4、反应的阶段性,（三）影响抗原抗体反应的因素,抗原抗体结合过程可分为两个阶段：一是特异性结合阶段，二是可见反应阶段。,1、电解质,2、温度,3、酸碱度,第二反应阶段易受三方面影响。,中性或弱碱性,370C,PH6-8,正常人体内环境,（四）抗原抗体反应的基本检测方法,1、凝集反应,细菌、红细胞等颗粒性抗原与相应抗体结合后形成凝集团块，此类反应称为凝集反应。,+,红细胞,抗红细胞抗体（IgM）,凝集,根据抗原的性质、出现结果的现象、参与反应的成分的不同，抗原抗体的反应可分为凝集反应、沉淀反应、免疫标记技术等。,（1）直接凝集,红细胞,抗红细胞抗体（IgG）,+,凝集,用于：ABO血型测定 细菌鉴定（肥达试验）,（2）间接凝集,激素抗体,激素分子,不凝集,+,激素抗体,激素包被的乳胶颗粒,+,凝集,常用载体：绵羊红细胞、聚苯乙烯乳胶等。 用于：钩端螺旋体病、血吸虫病、类风湿关节 炎的辅助诊断。,间接血凝,（3）间接凝集抑制试验,用于：早孕的检测,+,+,激素分子,不凝集,（4）协同凝集实验,2、沉淀反应,可溶性抗原与相应抗体在有适量电解质存在下，出现肉眼可见的沉淀现象，称为沉淀反应。,该反应多用半固体琼脂凝胶作为介质进行琼脂扩散或免疫扩散，即可溶性抗原 与抗体在凝胶中扩散，在比 例合适处相遇形成可见的白 色沉淀现象。,（1）单向免疫扩散,Ab,待测血清（Ag）,不同浓度的标准血清,d,c,d,火箭电泳,（2）双向免疫扩散,Ag,Ab,将抗原与抗体分别加入琼脂凝胶的小孔中，抗原抗体会自由地向四周扩散，在它们相遇的位置形成一条沉淀线。是一种定性检测法。,Ag1,Ag1,Ab1,Ag1,Ag2,Ab1、2,Ag1,Ab1、2,（3）免疫电泳,（4）免疫比浊,待测Ag,Ab槽,已知Ag,+,-,Ag2,Ag3,Ag1,Ag,根据不同量抗原抗体反应所形成的浊度不同判断样品中未抗原的含量。,3.补体结合试验,Complement Fixation,Ag mixed with test serum to be assayed for Ab,Standard amount of complement is added,Erythrocytes coated with Abs is added,Amount of erythrocyte lysis is determined,Ag,Ag,Methodology,3 、免疫标记技术,免疫标记技术是用荧光素、酶、放射性核素、胶体金或化学发光等标记抗体或抗原，利用标记技术的高度敏感性进行抗原抗体检测。,可见,优点: 灵敏度高、快速、可定性、定量、定位。,分类：根据标记物的不同免疫标记技术可分为免疫荧光技术、免疫酶技术、放射免疫技术、胶体金和化学发光技术。,胶体金,标记技术检测抗原,免疫标记技术检测抗体,思考题,抗原与抗体反应的特点是什么？ 抗原与抗体反应有哪些基本类型？,设计实验方案：,市场有一生物制剂有免疫增强作用，请设计实验方案从淋巴细胞数目及活性、淋巴细胞功能（淋巴细胞转化、淋巴细胞分泌细胞因子）等角度证实（分组提交）。,