药学论文-鸡血藤总黄酮对血虚小鼠抗贫血作用及机理研究【摘要】 目的观察鸡血藤总黄酮(STF)对化学因素所致的血虚小鼠外周血象及血清白细胞介素-3（IL-3），促红细胞生成素（EPO）水平的影响。方法采用盐酸苯肼（APH）、环磷酰胺（CTX）复合造模，建立血虚小鼠模型， 检测外周血象 RBC，HGB，HCT 及血清 IL-3，EPO 水平。结果与正常对照相比，模型小鼠的外周血象 RBC，HGB，HCT，血清中的 IL-3 降低，而 EPO 升高(P0.01) ，鸡血藤总黄酮各剂量组的外周血象 RBC，HGB，HCT，IL-3 水平高于模型对照组（P0.05）、EPO 水平显着低于模型对照组(P 0.01)。结论鸡血藤总黄酮具有抗贫血作用，其作用机理可能与促进机体分泌 IL-3、调节 EPO 水平，促进红系造血有关。 【关键词】 鸡血藤总黄酮； 血虚； 白细胞介素-3； 促红细胞生成素Abstract：ObjectiveTo observe the effects of Suberect spatholobus total flavonoids (STF) on the peripheral blood hemogram and serum levels of IL-3 and EPO in hemophthisis mice .MethodsThe methods of s.c. PHH and i.p. CTX were used to induce the model of hematopenia in mice. The peripheral blood hemogram and the serum levels of IL-3 and EPO were measured.ResultsSTF could obviously increase the numbers of HGB,RBC,HCT and the level of IL-3 of hemophthisis mice and degrade the level of EPO.ConclusionAll results suggested that STF can enrich blood STF and recover the haematogenesis function of hemophthisis mice by increasing the level of IL-3 and regulating the EPO level.Key words：Suberect spatholobus； Total flavonoids； Hemophthisis； IL-3； EPO鸡血藤是一种活血化瘀的壮药， 主要分布在广西、广东。其性温，味苦、甘，归肝、肾经。有补血、活血、通络的功效，用于治疗月经不调、血虚萎黄、麻木瘫痪、风湿痹痛等。本草纲目拾遗记载鸡血藤“活血”，饮片新参记载“鸡血藤去瘀血，生新血，流利经脉”。民间常用鸡血藤治疗各种原因引起贫血，具有较好的疗效。为探讨鸡血藤治疗贫血的有效部位和抗贫血作用机理，我们用 ELISA 法测定小鼠血清 IL-3 及 EPO 水平。现报道如下。1 材料1.1 动物昆明种小鼠（SPF 级），1822g，广西壮族自治区食品药品检验所提供（生产许可证号：SCXK 桂 2003-0001）。1.2 药品鸡血藤总黄酮（STF），广西中医学院中药化学教研室提供，含量为 60%；盐酸苯肼（APH）（上海元越化工有限公司）批号：20051030；阿胶（山东东阿阿胶股份有限公司）批号：2004030；环磷酰胺（CTX）（上海华联制药有限公司）批号：050914。1.3 试剂 Mouse IL-3 试剂盒（上海船夫生物公司）批号：20060512，Mouse EPO 试剂盒（上海船夫生物公司）批号：20060725。1.4 仪器血球计数仪（sysmex KX-21 型），吉尔森微量取样器（法国Pipetman 公司），酶标仪（奥地利 Sunrise 公司）。2 方法2.1 分组与给药取小鼠 60 只，体重 1822 g，雌雄（）兼用，随机分为 6 组：鸡血藤总黄酮高剂量组（200 mg/kg）、中剂量组（100 mg/kg）、低剂量组（50 mg/kg），阳性对照组给予阿胶（10 g/kg），空白对照组、模型组给予等容量的蒸馏水，以上各组 i.g.给药，qd8 d，给药容量为 0.2 ml/10 g。2.2 血虚小鼠造模方法1除空白对照组外，给药后第 2 天 sc 盐酸苯肼（20 mg/kg）、第 4 天 sc 盐酸苯肼（40 mg/kg），第 4，5，6，7 天 ip 环磷酰胺(100 mg/kg) ，第 8 天末次给药后 1 h，取血进行 RBC，HGB，HCT 计数。结果见表 1。2.3 ELISA 法测定小鼠血清 IL-3 及 EPO 水平小鼠摘眼球取血至 EP 管，放置室温下析出血清。3 000 r/min 离心，分离血清，备用。将板条平衡至室温，从密封袋中取出，除空白孔外，分别将标本或稀释好的不同浓度的标准品 50 l 加入相应的孔中，除空白孔外，每孔再加入已稀释好的生物素化抗体 50 l，用封板胶封住反应孔，37温育 90 min，取出后洗板 4 次，除空白孔外，各管加入稀释好的酶结合物 100 l，用封板胶封住反应孔，37温育 30 min，取出后洗板 4 次，每孔加底物 A、底物 B 各 50 l，避光，室温（2025）10 min，每孔加终止液 50 l，混匀，混匀后在 1020 min 内测量 OD450 值。查标准曲线得出 IL3，EPO 含量。观察药物对小鼠血清中IL3，EPO 含量的影响。结果见表 2。2.4 统计分析应用 SPSS10.0 分析系统，数据以s 表示，组间差异用 t检验。3 结果除阳性对照组、STF 高剂量组的 HGB 与模型组比较有极显着差异（P0.01），STF 高剂量组的 HCT 与模型组比较有极显着差异外（P0.01）外，各剂量组药物 RBC，HGB，HCT 与模型组比较有显着性差异（P0.05）。提示：各组剂量药物对血虚动物 RBC，HGB，HCT 的下降有拮抗作用，与模型组对比有显着差异。结果见表 1。阳性对照组和各剂量组对 IL3 的下降和 EPO 的上升有拮抗作用，与模型组比较有显着性差异(P0.05)。提示：各剂量组对 IL3 浓度的下降和 EPO 浓度的上升有拮抗作用，与模型组比较有显着性差异。结果见表 2。表 1 鸡血藤总黄酮对血虚小鼠血常规的影响（略）与空白对照组比较，P0.01； 与模型组比较，P0.05；P0.01；n=10表 2 鸡血藤总黄酮对血虚小鼠血清中 IL3、EPO 含量影响（略）与空白对照组比较， P0.01； 与模型组比较，P0.05；n=103 讨论IL-3(白细胞介素-3)是一种造血促进因子，从干细胞到祖细胞多个不同阶段促进造血细胞增殖分化，造血生长因子促红细胞生成素(erythmpoietin， EPO)是一种主要由肾脏分泌的具有高度糖基化的多肽细胞因子，是红细胞发育过程中最重要的调节因子2。IL-3 由活化的 T 细胞产生，作为一种造血促进因子，从多个环节部位促进造血细胞的增殖分化3。鸡血藤总黄酮对血虚小鼠 IL-3 水平有显着影响，推断鸡血藤总黄酮抗贫血作用是通过调节促进因子如 IL-3 的生成而起作用。研究表明，EPO 的水平与 HGB 成反比关系4。本实验结果显示化学因素造成小鼠的贫血，反馈性地引起血清 EPO 水平升高。给药组致使 EPO 下降，可能是治疗后贫血症状缓解，使 EPO 反馈性升高的程度减轻。【参考文献】1 金若敏， 宁 炼， 陈长勋，等.血虚模型动物制备及当归补血汤的作用研究J.中成药，2001，23(4):269.2 杨 成，夏 军.促红细胞生成素对慢性肾功能衰竭大鼠肾功能的影响J.医药导报，2003， 22 (7):437.3 丁敬远，黄振翘，孙关林，等.健脾药对免疫介导再生障碍性贫血小鼠 IL-3 ， IFN- 影响的实验研究J. 新中医，2004，36（1）：76.4 高丽萍，柴锡庆，苏安英，等.益气补肾中药抑制 5-氟尿嘧啶所致大鼠贫血的实验研究J.中国中医基础医学杂志， 2002， 8(4):46.