复习提问：,1、基因工程是指按照人们的愿望，进行严格的设计，并通过 和 等技术，赋予生物以新的遗传特性，从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。由于基因工程是在 进行设计和施工的，因此又叫做DNA重组技术。,2、基因工程中的限制酶：来源、作用和结果。 3、基因工程中的针线：种类、来源、作用。 4、基因工程中的运载体：种类、特点。,体外DNA重组,转基因,DNA分子水平上,DNA连接酶,DNA聚合酶,基因工程的基本操作程序,1、目的基因的获取 2、基因表达载体的构建 3、将目的基因导入受体细胞 4、目的基因的检测与鉴定,第一步：目的基因的获取,1、目的基因主要是指编码蛋白质的结构基因,2、方法：,1)、人工合成,2)、从基因文库中获取,3)、利用PCR技术扩增,(基因比较小，序列已知),聚合酶链式反应,基因文库？,将含有某种生物不同基因的许多DNA片断，导入到受体菌的群体中，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库,从基因文库中获取目的基因,从基因文库中获取目的基因依据：,1、基因的核苷酸序列 2、基因的功能 3、基因在染色体上的位置 4、基因的转录产物mRNA 5、基因的表达(翻译)产物蛋白质,受体菌的整个群体包含了这种生物的全部基因,基因组文库的构建模式图,基因组文库与部分基因文库的关系,cDNA文库的构建模式图,杂交双链 (单链RNA/单链DNA),单链DNA,双链DNA (cDNA),与载体连接后导入受体菌贮存，组成cDNA文库,原核细胞的基因结构,非编码区,非编码区,编码区,启动子,终止子,真核细胞的基因结构,非编码序列,mRNA,多肽链,初始mRNA,成熟mRNA,多肽链,出核孔,原核、真核基因表达比较,启动子 .VS. 起始密码 /终止子 .VS. /终止密码,存在分子：,作用：,DNA(基因),启动/终止转录,mRNA,起始/终止翻译,mRNA中存在启动子/终止子的序列吗？ 存在外显子/内含子吗,？,概念： PCR全称为_，是一项在生物_复制_的核酸合成技术,条件：,原理：_,聚合酶链式反应,体外,特定DNA片段,DNA复制,已知基因的核苷酸序列,四种脱氧核苷酸,1对引物,DNA聚合酶(Taq酶),利用PCR技术扩增目的基因,能量,变性,复性,延伸,1. 变性（90-95）双链DNA模板在热作用下，_断裂，形成_,氢键,单链DNA,2.复性 (55-65)温度降低， 与DNA模板结合，形成局部_。,双链,引物,3.延伸（70-75） 在 的作用下，连接 ，合 成与模板互补的DNA 链。,脱氧核苷酸,Taq酶,(二)利用PCR技术扩增目的基因,PCR技术与DNA复制的比较,解旋酶催化,高温变性解旋,细胞内 主要在细胞核内,细胞外 主要在PCR扩增仪内,解旋酶、普通的DNA聚合酶等,耐热的DNA聚合酶（Taq酶）,细胞内温和条件,需控制温度， 在较高温度下进行,需要（一对）,不需要,模板、原料均相同、均需能量。,第二步：基因表达载体的构建（核心）,2、基因表达载体的组成？,使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代,使目的基因能够表达和发挥作用,启动子,目的基因,终止子,标记基因,1、基因表达载体构建的目的？（P162）,抗生素抗性基因,用相同的限制核酸内切酶分别切割目的基因和载体DNA（如质粒），目的基因和载体DNA的两端形成相同的黏性末端，在DNA连接酶的作用下，将目的基因和载体DNA连接在一起，形成重组DNA分子。,它们有什么作用？,a、目的基因,b、启动子,c、终止子,d、标记基因,位于基因的首端,是mRNA结合位点,位于基因的末端,终止转录,检测目的基因是否导入受体细胞,抗生素抗性基因,