实验室检测常用方法及特点,一、称量法 二、色谱法 三、光谱法 四、样品预处理 五、校准曲线的要求,称量法,实验室一般的分析称量方法有以下几种： 1、直接称量法 2、增量法 3、减量法 4、指定法,1、直接称量法,称量物体，如烧杯、表面皿、坩埚等，一般采用直接称量法。即用砝码直接与被称物平衡，此时砝码的重量就是被称物的重量。所称固体试样如果没有吸湿性并在空气中是稳定的，可用直接称量法。 方法如下：用一条干净的纸条拿取被称物放入天平的称量盘，然后去掉纸条，在砝码盘上加砝码。此时，砝码所标示的重量就等于被称物的重量。,2、增量法,此法一般用来称量规定重量的试样。方法如下： 将盛物容器放于天平的称量盘，在砝码盘上加适当的砝码使之平衡，得到盛物容器重0，然后在砝码盘上添加与所称试样同重的砝码，用牛角勺取试样加于盛物容器中，直至达到平衡。此时，砝码总重，则称取的样品重为 。,3、减量法,此法一般用来连续称取几个试样，其量允许在一定范围内波动，也用于称取易吸湿、易氧化或易与二氧化碳反应的试样。此法称取固体试样的方法为：将适量试样装入称量瓶中，称得称量瓶及试样重量为1，然后将称量瓶，从天平盘上取出，举放于容器上方，瓶口向下稍倾，捏住称量瓶盖，轻敲瓶口上部，使试样慢慢落入容器中，当倾出的试样已接近所需要的重量时，慢慢地将称量瓶竖起，再用称量瓶盖轻敲瓶口下部，使瓶口的试样集中到一起，盖好瓶盖，放回到天平盘上称量，得2，两次称量之差就是试样的重量。如此继续进行，可称取多份试样。如果一次倒入容器的药品太多，必须弃去重称，切勿放回称量瓶。如果倒入的试样不够可再加一次，但次数宜少。 第一份： 试样重12（） 第二份： 试样重23（）,4、指定法,对于性质比较稳定的试样，有时为了便于计算，则可称取指定质量的样品。用指定法称量时，在天平盘的两边各放一块表面皿(它们的质量尽量接近)，调节天平的平衡点在中间刻度左右，然后在左边天平盘内加上固定质量的砝码，在右边天平盘内加上试样(这样取放试样比较方便)，直至天平的平衡点达到原来的数值，这时，试样的质量即为指定的质量。,电子天平使用方法,1检查并调整天平至水平位置。 2事先检查电源电压是否匹配(必要时配置稳压器)，按仪器要求通电预热至所需时间。 3预热足够时间后打开天平开关，天平则自动进行灵敏度及零点调节。待稳定标志显示后，可进行正式称量。 4称量时将洁净称量瓶或称量纸置于称盘上，关上侧门，轻按一下去皮键，天平将自动校对零点，然后逐渐加入待称物质，直到所需重量为止。 5被称物质的重量是显示屏左下角出现“”标志时，显示屏所显示的实际数值。 6称量结束应及时除去称量瓶(纸)，关上侧门，切断电源，并做好使用情况登记。,色谱法（GC1690气相色谱仪）,一、气相色谱法的特点 二、气相色谱法的原理 三、相关操作的注意事项,二、气相色谱法的原理,色谱定量分析的依据是被测物的量与它在色谱图上的峰面积（或峰高）成正比。 职业病危害因素检测检验定量分析一般采用标准曲线法。标准曲线法，亦称外标法。首先用纯物质配置一系列不同浓度的标准试样，在一定的色谱条件下准确定量进样，测量峰面积（或峰高），绘制标准曲线。外标法不使用校正因子，准确性较高，操作条件变化对结果准确性影响较大，对进样量的准确性控制要求较高，适用于大批量试样的快速分析。,三、相关操作的注意事项,、开机到检测（约45分钟） 先打氮氢空一体机发生器电源，大约15分钟后，待各压力表压力稳定在0.4MP左右，同时查看毛细气路控制器“柱前压”，如果压力表有0.1MP压力，可打开仪器开关电源。并且按“起始” 键。,、设置温度 柱箱温度COL：按柱箱键+初温键+数字（50）+置入键； 进样器INJ：按进样键+数字（250）+置入键； 氢火焰检测器DET：按换挡键+热导键+数字(250)+置入键 热解吸仪温度AOLII：按换挡键+进样键+数字(300)+置入键 初温50度-初时间5分钟-升速5度/分钟终温250度终时15分钟,、查看设置温度 柱箱温度；按柱温键+初温键+置入键 进样器温度：按进样键+置入键 FID检测器温度；按换挡键+热导键+置入键 热解吸仪温度AOLII：按换挡键+进样键+置入键。 、查看实际温度 柱箱温度：按显示键和柱箱键； 进样器温度：按显示键+进样键； FID（氢火焰检测器）温度：按显示键+换挡键+热导键（检测DET） 热解吸仪温度AOLII：按显示键+按换挡键+进样键。,、点火 当氢火焰检测器（DET）温度达到150度以上时点火。 点火：把空气压力从0.1MP调到0.04MP，用火枪点火，如点着火后（看是否有水蒸汽有的话说明点着了）再把空气调到0.1MP。 、色谱数据工作站 打开电脑及数据工作站（在线工作站, 通道1）。 点击“查看基线”确保能顺利采集基线并保持平稳 编辑实验数据参数和实验图谱存放置等信息。,、进样 待基线走平稳后将HD-D热解吸仪气流控制开关关闭，用微量注射器吸取样品，进样。吸取样品时应确保注射器内无多余的气泡； 待样品热解吸1060S，将切换阀切换至“解吸”处。按GC-1690主机“起始”按钮。同时按键盘“F5”或鼠标点击“采集数据”。观察GC-1690主机显示屏上的信息，待解吸完毕后将切换阀切换至“反吹”状态，并将热解吸仪气流控制开关打开。进样完毕，等待出峰。,、保存图谱 保存图谱：待所有峰都检测出来后，按GC-1690气相色谱仪“停止”按钮；N2000工作站继续采集数据110min，在电脑上用鼠标点击“停止采集”。实验图谱会自动保存于设定的文件夹内。到此，一个进样实验完成。 若再次进样，等待柱箱温度下降至柱箱初温510min后，再次按上述流程进样。,、关机 关机前先关闭N2000色谱数据工作站和电脑；将GC-1690气相色谱仪的柱箱、检测器、热解吸仪、辅助2的温度参数设定为99，等待温度全部降低至99以下。关闭燃气控制器的空气流量，使氢气火焰检测器火焰熄灭，火焰熄灭后讲空气流量调回正常，最后关闭气相色谱仪； 继续通气15分钟，最后关闭氮氢空一体机。,10、气相色谱柱温的选择 考虑到每种固定液都有一定的温度范围。柱温不能高于固定液的最高使用温度，否则固定液因挥发而流失。应从分离的角度出发，权衡利弊，柱温的选择原则为：在对最难分离的物质对保持较好分离度的前提下，尽可能采用较高柱温，但以保留时间适宜、峰形不拖尾为度。,11、维护保养 第一次使用的气相色谱柱需经过“老化”方可投入样品检测。“老化”参数按以下设置(柱箱初温：50；柱箱升速：0.5/min；柱箱终温：270；保持时间：300min。“老化”完后查看基线情况，基线走稳即可，基线若不稳，继续“老化”。气相色谱柱使用一段时间会出现基线不稳情况，直接影响实验准确度。此时只需重复“老化”程序即可。 BRT-300G氮氢一体机使用一段时间后，需更换氢氧化钾溶液。更换方法：称取130g氢氧化钾，溶于500mL冷却蒸馏水。注入液罐并补充蒸馏水至液位刻度。 定期检查BRT-300G氮氢一体机内部空气过滤系统，检查硅胶状况。若硅胶变色，则取出置于烘箱120恒温干燥3小时，可重新使用。定期维护电脑硬盘数据，将实验所得数据图谱分类保存。长期保存。,光谱法,根据我们实验室常用的光谱法有以下三种： 紫外-可见分光光度法 原子吸收分光光度法 原子荧光分光光度法,紫外-可见分光光度法,一、基本原理 二、分析条件的选择 三、分析方法及注意事项,一、基本原理,紫外-可见分光光度法根据被测物质在紫外-可见光的特定波长处或一定波长范围内对光的吸收特性而对该物质进行定性、定量分析的方法称紫外-可见分光光度法。 将不同波长的单色光依次通过一定浓度的同一溶液，分别测定吸收度，然后以吸收度为纵坐标，波长为横坐标画图可得到一条吸收曲线即吸收光谱。曲线显示了物质对不同波长光的吸收情况，曲线上吸收值最大处所对应的波长称最在吸收波长，用表示，最大吸收波长在定量分析中常用来作测定波长。,紫外-可见分光光度法是工作场所职业病化学危害因素检测中的常用方法。具有灵敏度高，测量精度好，操作简便等优点。通常，待测物质含量为1%0.00001%时，能够用分光光度法准确测定，所以它主要用于测定微量组分，几乎所有的无机离子和许多有机化合物均可以用分光光度法进行测定。若采用灵敏度高、选择性好的有机显色剂，并加入适当掩蔽剂，一般不经过分离即可直接进行分光光度法测定，其方法的相对误差为5%10%。 紫外-可见分光光度法的定量依据是朗伯-比尔定律，即在一定条件下溶液对单色吸收的强弱与吸光物质的浓度和厚度成正比关系。其数学表达式为： A=KCL 式中 A溶液吸光度； K吸光常数（摩尔吸光常数），L/(molcm)； C溶液浓度，mol/L； L液层厚度（比色皿厚度），cm。 吸光系数K在给定条件下（单色光波长、溶剂、温度等）是物质的特征常数，可作为定性依据。在吸收度与浓度之间的直线关系中，吸光系数K是斜率，是定量的依据，其数值越大则测定的灵敏度越高。,二、分析条件的选择,我们实验室的722 S 可见分光光度计其工作波长范围为3251020nm。该仪器的主要由光源、单色器、吸收池、检测器和信号显示系统五个部分构成。 1、仪器测量条件的选择 适宜的吸光度范围 入射光波长的选择 狭缝宽度的选择,2、显色反应条件的选择 对多种物质进行测定，常利用显色反应将被测组分转变为在一定波长范围有吸收的物质。常见的显色反应有配位反应、氧化还原反应等。显色反应必须满足的反应条件有： (1)反应生成物须在紫外-可见光区有较强吸光能力，即摩尔吸光系数较大。 (2)反应有较高的选择性，即被测组分生成化合特吸收曲线应与共存物质的吸收光谱有明显的差别。 (3)反应产物应足够稳定，以保证测量过程中溶液的吸光度不变。 (4)反应产物组成恒定。,3、参比溶液的选择 测定样品溶液的吸光度，需先用参比溶液调节透光度（吸光度为0）为100%， 消除其他成分及吸光池和溶剂等对光的反射和吸收带来测定误差。,三、分析方法及注意事项,目视比色法 用眼睛观察、比较溶液颜色深度以确定物质含量的方法称为目视比色法。 标准曲线法 根据朗伯-比尔定律，保持液层厚度，入射光波长和其他测量条件也不变，则在一定浓度范围内，所测得吸光度与溶液中待测物质浓度成正比。,样品检测注意事项 在进行样品检测与分析过程中，不能不考虑试剂和显色条件对检测的影响，需要注意以下几点： （1）显色剂质量，注意其使用期限、保存方式（低温、避光、干燥）、显色剂纯度的区别和要求，尽量使用有效期限和方法要求的试剂纯度。 （2）遵照实验要求，注意反应温度和时间等控制条件。 （3）注意显色的稳定时间，并在其稳定时间内进行检测。 （4）使用试剂分级和质量，按检测要求使用。 （5）对被检样品的干扰物质和干扰因素进行排除，必要时进行复检。,原子吸收分光光度法,一、基本原理 二、原子吸收光谱法的特点 三、仪器的组成 四、仪器条件的选择,一、基本原理,1、原子吸收光谱法利用原子对固有波长光的吸收进行测定。（被测元素基态原子在蒸气状态对其原子共振辐射的吸收 进行元素定量分析） 基态原子吸收其共振辐射，外层电子由基态跃迁至激发态而产生原子吸收光谱。 2、在实际工作中，对于原子吸收值的测量，是以一定光强的单色光I0通过原子蒸气，然后测出被吸收后的光强I，此一吸收过程符合朗伯-比耳定律，即 I = I0e-K N L 式中K为吸收系数，N为自由原子总数（基态原子数），L为吸收层厚度。 吸光度A可用下式表示 A = lgI0 / I = 2.303 K N L 在实际分析过程中，当实验条件一定时，N正比于待测元素的浓度。,二、原子吸收光谱法的特点,1、检出限低，灵敏度高。 2、分析精度好。 3、选择性好。 4、应用范围广，可测定70多个元素。 5、分析速度快，操作方便。 6、仪器比较简单，一般实验室可配备。,三、仪器的组成,原子吸收光谱仪由光源、原子