BRAN+LUEBBE 方法 No. G-264-01 Rev.0 (MT24) 烟草及烟草制品中总植物碱的测定Coresta / ISO 方法测量范围：0-200 至 0-1600 mg/L(以烟碱计)原 理 ： 本方法应用于烟草及烟草制品中。用水萃取烟草样品，萃取液中的总植物碱(以烟碱计)与对氨基苯磺酸和氯化氰反应生成棕色产物用比色计在 460nm 比色测定。其中氯化氰是由氯化钾和氯胺 T 在线反应产生（见附录 1） 。此方法的多功能测试模块可同时用于测定氯、氨和硝酸盐。硬 件：12 英吋透析器、37加热池（7.7ml） 。 泵管：9 试剂+2 空气+1 进样器冲洗使 用 标 准 水 和 AA3 比 色 计 的 特 性 数 据（0-1600mg/L ）：样品速率 50/hr样品：清洗比 3:1试剂吸收 0.04-0.08灵敏度(吸光度 1600mg/L) 0.5变异系数：半峰高重复 10 次 1.4%合并标准偏差（50 个随机样品，5 级校准） 4.1mg/L相关系数（线性，5 点） 0.9998注：以上性能数据需使用 Bran+Luebbe 公司的零部件和消耗品。参考文献：1. CORESTA 建议方法 No.35。2. ISO 方法 No.15153 。原料表: 除非特殊说明 ，所有试剂应为分析纯或同等纯度。水应为蒸馏水或同等纯度的水。安全分类1. Brij-35*, 30%溶液（Bran+Luebbe 备件号 T21-0110-06） -2. 柠檬酸，C 6H8O7H2O -3. 氯胺 T，C 7H7ClNNaO2S3H2O 有害4. 硫酸亚铁，FeSO 47H2O 有害5. 酒石酸氢烟碱，C 10H14N2(C4H6O6) 2H2O 毒6. 氰化钾，KCN 剧毒7. 碳酸钠，Na 2CO3 刺激性8. 氯化钠，NaCl -9. 磷酸氢二钠，Na 2HPO4 -10. 硼砂，Na 2B4O710H2O -11. 对氨基苯磺酸，C 6H7NO3S -试 剂 配 制:缓冲溶液 A氯化钠 2.35g硼砂 7.6g蒸馏水 至 1000mlBrij-35， 30% 1ml将 2.35g 氯化钠和 7.6g 硼砂溶于约 400ml 蒸馏水中，转移至 1000ml 容量瓶中用蒸馏水定容。混合均匀。再加入 1mL 30% Brij-35 溶液。混合均匀。溶液保持清澈透明即可使用。缓冲溶液 B磷酸氢二钠 26g柠檬酸 10.4g对氨基苯磺酸 7g蒸馏水 至 1000mlBrij-35， 30% 1ml将 26g 磷酸氢二钠、10.4g 柠檬酸和 7g 对氨基苯磺酸溶于约 500ml 蒸馏水中，转移至 1000ml容量瓶中用蒸馏水定容。加入 1ml 30% Brij-35 溶液。若溶液混浊须过滤。溶液保持清澈透明即可使用。氯胺 T 溶液氯胺 T 8.65g蒸馏水 至 500ml将 8.65g 氯胺 T 溶于约 200ml 蒸馏水中，转移至 500ml 容量瓶中用蒸馏水定容。混合均匀。使用前须用 whatman 40 号(或同等)滤纸过滤。溶液储存于冰箱中。保质期 5 天。氰化物解毒液 A柠檬酸 1g硫酸亚铁 10g蒸馏水 至 1000ml将 1g 柠檬酸和 10g 硫酸亚铁溶于 400ml 蒸馏水中，转移至 1000ml 容量瓶中用蒸馏水定容。混合均匀。氰化物解毒液 B碳酸钠 10g蒸馏水 至 1000ml将 10g 碳酸钠溶于 600ml 蒸馏水中，转移至 1000ml 容量瓶中用蒸馏水定容。混合均匀。氰化钾溶液警告：氰化钾有剧毒。见安全防护措施。氰化钾 2g蒸馏水 至 500mL在通风橱中，称量 2g 氰化钾置于一 1000ml 烧杯中，加入 500ml 蒸馏水并搅拌至固体溶解（磁力搅拌） 。储存于棕色瓶中。萃取液，5%冰醋酸 50ml蒸馏水 至 1000ml将 50mL 冰醋酸溶于约 600mL 蒸馏水中，转移至 1000ml 容量瓶中用蒸馏水定容。混合均匀。取样器清洗液采用萃取液作为取样器清洗液。系统清洗液Brij-35， 30% 1ml蒸馏水 至 1000ml将 1mL 30% Brij-35 溶液加入一升蒸馏水中混合均匀。标准溶液按照 CORESTA 建议方法 No.39 检验酒石酸氢烟碱的纯度，本方法也可用已知纯度的烟碱或烟碱盐来校准。实际使用过程中的酒石酸氢烟碱用量须按校准结果进行换算。如果用 5%的醋酸作萃取液，则配制标准溶液时也应使用 5%的醋酸，取样器清洗液也与此相同。 标准稀释液采用 5%醋酸溶液或 0.04mol/L 的硫酸溶液。样品萃取液、取样器清洗液和标准稀释液必须相同。标准储备液，1.6g/L 烟碱酒石酸氢烟碱 1.3g标准稀释液 至 250mL将经准确称量(精确至 0.0001g)的酒石酸氢烟碱 1.3g 溶于蒸馏水，转移至 250mL 容量瓶中定容。此溶液烟碱浓度约为 1.6mg/mL。溶液储存于冰箱中。保质期 1 月。 标准工作溶液按需要准备标准工作溶液（见操作注意事项 5） 。按酒石酸氢烟碱的纯度计算标准溶液中其准确含量。溶液储存于冰箱中。保质期 2 周。操作注意事项1. 安全措施氰化钾有剧毒并有刺激性，因此处理该物质时必须遵守所有的安全措施。溶液须由指定专人配制。在整个溶液配制及接触试剂瓶的过程中均应佩戴手套和防护眼镜。为防止气体逸入实验室，试剂瓶进气口应安装碱石灰管（见图 2） 。氰化物解毒液 A 和 B 依流程图泵入并混合于一升布氏烧瓶中用磁力搅拌（见图 3） 。所有含氯化氰的废液均应流入此瓶中并在此转化为普鲁士蓝。布氏烧瓶中的混合液可倒入一储藏瓶中，将储藏瓶置于通风橱中过夜后可将其作为废物处理。2. AA3 比色计用附加设定参数 带过 1.4% 延迟时间 12 min 3. AA比色计用附加设定参数（15 mm 流动池）由于流动池路径长度不同，AA型与 AA型的某些参数有所不同，现列入下：灵敏度： 0.7-0.8试剂吸收 0.05-0.104. 标准稀释液和取样器清洗液应与样品具有相同的基体。因此，如用 5%醋酸作为烟草样品的萃取液，则标准稀释液和取样器清洗液也应使用 5%醋酸。5. 每天工作结束时，用系统清洗液冲洗系统至少 15 分钟。每周用 0.1mol/L HCl 10 分钟冲洗，然后用蒸馏水冲洗 20 分钟。烟草样品的分析1 待测烟草样品经粉碎（全部可通过 1mm 筛）及测定水分。若烟样太潮难于粉碎，可于 40以下烘干。2 将经准确称量(精确至 0.0001g)的烟样约 250mg 置于一 50ml 干燥锥形瓶中。加入25ml 蒸馏水（或 5%醋酸） ，盖上塞子，震荡 30 分钟。3 萃取液用 Whatman 40 号滤纸过滤，弃去开始流出的数毫升滤液，其余滤液收集于样品杯中。4 按正常方式将样品和标准溶液在系统中运行，若样品液浓度超出标准溶液的范围，则将样品稀释后再与标准溶液一起重新运行。计算烟样（干重）中烟碱的百分含量按下式计算：总植物碱% = c 样品中总植物碱的仪器观测值，以 mg/ml 计;v 萃取液体积(通常为 25 ml)，以 ml 计；m 样品重量，以 mg 计；M 烟样中的水分含量，以质量百分含量计。已知水分含量和样品重量，通过使用 AACE 软件的数据库和虚拟通道即可获得正确的结果。重复性和再现性1993 年用 3 个单等级烟草样品进行了有 12 个实验室参与的国际合作研究，用本方法进行分析，获得了重复性值（r ）和再现性值 (R)。在正常操作条件下正确使用本方法时，同一操作者使用同一台仪器，在一较短时间间隔内（分析 40 个样品杯的时间） ，未对仪器重新校准，由两种不同的萃取液所得到的结果的差值超出重复性值（r）的情况，平均每 20 次不超过 1 次。在正常操作条件下正确使用本方法时，两个实验室所得到的两个结果超出再现性值(R)的情况，平均每 20 次不超过 1 次。数据分析结果见表 1 和表 2。表 1：水萃取烟草类型平均 烟碱含量，% 重复性值，r 再现性值， R香料烟烤烟白肋烟1.172.903.970.050.080.120.190.410.55表 2：5% 醋酸萃取烟草类型平均 烟碱含量，% 重复性值，r 再现性值， R香料烟烤烟白肋烟1.172.903.970.070.110.130.210.670.97计算 r 和 R 时，1 个测定结果是指 1 个萃取液分析一次所得结果。附录 1CORESTA 铁别工作组在 19891990 年进行的几项共同实验研究表明，其他两种方法也可得到与本推荐方法相同的结果。在使用这两种方法之前应注意：氯化氰也可由硫氰酸钾与次氯酸钠在线反应生成。为使该反应有效进行，次氯酸钠的有效氯含量应为 1014%（m/m） ，但这样的次氯酸钠一般不易得到。溴化氰与苯胺的反应也可用于总植物碱的测定。由于溴化氰有毒，一些国家在进口和使用时已经出现过问题。易耗品：以下估计以每天 8 小时，每年 250 天使用计算。名称 图上标记 配件号 估计一年消耗橙/绿，0.10 ml/min 116-0549-04 2 包橙/白，0.23 ml/min 116-0549-06 3 包黑/黑，0.32 ml/min 116-0549-07 2 包白/白，0.60 ml/min 116-0549-09 1 包红/红，0.80 ml/min