第一章 菌种的制作 2013.7.20.20点试验记录 操作人：时秀月 记录人：龙光瑞 于辉县市银龙专用粉食品公司,菌种的制作是食用菌栽培的前提和重要环节，菌种的优劣直接关系到食用菌的产量和质量，甚至关系到生产的成败。,菌种是指经人工培养并可供进一步繁殖或栽培使用的食用菌菌丝体，常常包括供菌丝体生长的基质在内，共同组成繁殖材料。 食用菌的菌种类型主要分固体菌种和液体菌种两类。我国目前食用菌栽培中所用的菌种绝大部分为固体菌种，液体菌种尚未大面积应用。,食用菌的菌种分三级，即母种、原种和栽培种。 母种是具有结实性的菌丝体纯培养物，也称一级种或试管种。 原种是由母种转接到木屑、棉籽皮、麦草、谷粒等为主的培养基上扩大培养而成的菌丝体纯培养物，也称二级种。 栽培种是由原种转接、扩大到相同或相似的培养基上培养而成的菌丝体纯培养物，直接应用于生产，也称三级种。,母种、原种和栽培种,第一节 母种的制作,通常分离或购买的母种数量有限，难以满足生产需要，因此，必须进行扩大繁殖。,第一节 母种的制作,一、培养基的制备 （一）常用的母种培养基配方（用量/1000 ml） 马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA） 马铃薯（去皮）200 g， 葡萄糖 20 g， 琼脂 18-20 g，pH值自然。,第一节 母种的制作,（二）母种培养基的配制 去皮马铃薯200克，切成1cm见方的小块或2 mm厚的薄片，加水约1000 ml煮沸，再用文火煮2030 min，并适当搅拌，用四层或八层预湿的纱布过滤，取滤液并加水至1000 ml。 向滤液中加入琼脂和葡萄糖，小火加热，搅拌至琼脂完全溶化。 分装试管。18 mm180 mm或20 mm200 mm的玻璃试管，分装量掌握在试管长度的1/4-1/5，原则上是摆放成斜面后，斜面的长度为试管长度的1/2-2/3。 塞棉塞。,第一节 母种的制作,母种培养基灭菌时，需用1.051.1 kg/cm2的压强，温度为121，灭菌（保持121）30 min。,温度与压强之间的关系,母种培养基制作流程 1. 分装试管 2. 塞棉塞 3. 打捆 4. 灭菌 5. 摆斜面,第一节 母种的制作,二、母种的转接 母种转接，也称转管、母种的继代培养。 由于分离或引进的原始母种数量有限，不能满足生产所需，因此，需进行扩大培养，通常原始母种允许扩大转接次。 母种的转管次数不宜过多，否则会降低菌种的生活力，影响栽培效果。不具备条件和技术的部门不应扩接母种。,超净工作台,超净工作台的紫外灯,接种室 紫外灯 2. 日光灯 3. 工作台 4. 凳子 5. 瓶架 6. 窗户 7. 拉门 8. 衣帽钩,接种箱（单位：cm）,第一节 母种的制作,母种的转接,第一节 母种的制作,（三）培养 菌种培养关键是控制好环境的温度、湿度、空气和光线等条件，其中以温度最为重要。 空气相对湿度保持在60%左右，培养室的湿度过低时，可适当喷水，湿度过高时，应加强通风排湿，或向地面洒生石灰吸潮，以防杂菌滋生污染棉塞或培养基；同时避光并保持空气新鲜，从而使菌丝生长健壮。,第一节 母种的制作,2-3d后，检查菌丝的生长及杂菌污染情况，若在远离接种块的培养基表面出现独立的小菌落或奶油状小点，即为污染，应立即淘汰； 一般母种经7-10d 可长满培养基，然后用于进一步扩繁或置4冰箱中冷藏备用。,母 种,第一节 母种的制作,（四）优质母种的一般标准 菌种纯正，无杂菌污染。 菌丝洁白浓密，气生菌丝量多。 菌丝不老化变色，培养基不萎缩失 水。 菌龄要适宜，一般室温保藏不超过 15d，4下冷藏不超过3个月。,第一节 母种的制作,菌种分离：采用无菌操作，将某种食用菌从混杂的微生物群体中分离出来进行纯培养，从而获得纯菌丝体的方法，称为菌种分离，分离所得的纯菌丝体即为原始母种。 依据分离材料的不同，菌种分离的方法可分为三类，即孢子分离法、组织分离法和基内菌丝分离法。,第一节 母种的制作,组织分离 组织分离是指在双核菌丝的组织体上切取一块组织，使其在培养基上萌发而获得纯菌丝体的方法，属于无性繁殖。 组织分离法可分为子实体组织分离、菌核组织分离和菌索组织分离。,第一节 母种的制作,组织分离的特点 简单易行 组织分离取材广泛，操作简便，分离成功率高。分离得到的菌种经出菇试验后可用于生产。,第一节 母种的制作,子实体组织分离的方法 (1) 种菇的选择 (2) 接种场地的消毒 同母种的转接。注意不要熏蒸和用紫外线照射种菇。 (3) 种菇的表面消毒 一般用75%酒精棉球擦拭即可。,取大型伞菌子实体菌柄与菌盖交界处 或菌柄上部的菌肉，分离效果最好。,金针菇是横切菌盖上薄的菌肉或取未开伞的幼嫩子实体的菌褶片,灵芝组织分离所取的部位是菌盖边缘的白色生长圈,木耳等胶质菌类的菌肉薄，子实体经无菌水反复冲洗后，撕开子实体或用刀片将两层耳片切开，挑取一小块菌肉组织即可。,第一节 母种的制作,四、孢子分离 孢子是食用菌的有性繁殖单位，能自动从成熟的子实体上弹射出来。 孢子分离法是指在无菌条件下，使食用菌产生的孢子在适宜的培养基上萌发，长成菌丝体而获得纯菌种的方法。,第一节 母种的制作,孢子分离法的优点 （1）有性孢子具有双亲的遗传特性，变异性大，是选育新菌株和杂交育种的好材料，可供选择优良菌株的机会较多。 （2）孢子的生命力强，所得菌种生活力旺盛。因此，又常被用作菌种复壮的手段。 分离到的菌株要通过出菇试验才能确定其是否好的菌种。,第一节 母种的制作,孢子分离分为单孢分离法和多孢分离法两种。 对于异宗结合的食用菌，大都采用多孢分离法来获得结实性菌种； 单孢分离法主要应用于菌株的筛选和杂交育种等工作。,第一节 母种的制作,（二）孢子分离的方法 孢子的采集 （整菇插种法）,钟罩法采集伞菌类孢子,第一节 母种的制作,三角瓶钩悬法,菌褶贴附法采集孢子 1. 菌褶或耳片 2. 试管 3. 培养基,印模法采集孢子 菌褶或耳片 2. 试管 3. 培养基,第一节 母种的制作,多孢分离法 多孢分离法是将多个孢子接种在同一培养基上，使其萌发，自由交配而获得纯菌种的方法。,第一节 母种的制作,单孢分离法 单孢分离法是在采集到大量孢子的基础上，经过稀释或使用单孢分离器等方法，使孢子之间互相分开，各个孢子单独萌发出菌丝而获得纯菌种的方法，常用于杂交育种和其它研究。,第二节 原种的制作,原种由母种扩大繁殖而成，主要用于制作栽培种，也可直接用于接种栽培袋。,原种的制作,原种培养基常以谷粒、棉子壳、锯木屑、蔗渣和粪草等天然营养物质作为主料，以麸皮、玉米粉、蔗糖及石膏等作为辅料，培养基配方种类很多，有通用的，也有专用的,不同种类的食用菌应选择自身适宜的原种培养基配方。,第二节 原种的制作,原种的制备过程一般包括配料、装瓶 (袋) 、灭菌、接种、培养等工艺流程。 一、谷粒原种 谷粒原种是指以小麦、大麦、燕麦、高粱、谷子等为主要原料制备的菌种，其中以小麦最为常用。 谷粒菌种具有菌丝生长快、生活力强、播种速度快等优点，但由于其营养丰富，容易污染杂菌，而且还要注意防止鼠害。,第二节 原种的制作,（一）常用谷粒原种培养基配方 1麦粒培养基 小麦（或大麦、燕麦） 98% 石膏粉（或碳酸钙） 2% 适用于大多数食用菌原种的生产，尤其适宜于双孢蘑菇。,第二节 原种的制作,（二）培养基的制作 容器 （菌种瓶或聚丙烯塑料袋） 制作过程 选定配方 谷粒预处理 谷粒清水洗净，浸泡12 h左右（稻谷需用水浸泡23 h） 加水，煮开小火再煮2030 min，使谷粒充分煮透，胀而不破，掰开后无白心即可，用水冷却后晾干表面水分。 拌料 加入石膏粉或碳酸钙并混匀 分装 均匀装料，松紧适度，约装瓶身的1/23/4。 封口 如用棉塞，还需用牛皮纸包扎瓶口。,原种 灭菌 1.41.5 kg/cm2压强下 (127) 灭菌2h,高 压 蒸 汽 卧 式 灭 菌 锅,母 种 扩 接 为 原 种,第二节 原种的制作,（五）培养 培养室的大小和床架数量应根据生产规模来定。 注意：适温培养，对多数食用菌而言，可保 持2325 定期检查杂菌。,第二节 原种的制作,二、木屑原种和棉籽皮原种 阔叶树木屑（或棉籽皮）78%，米糠（或麸皮）20%，蔗糖1%，碳酸钙（或石膏粉）1%，含水量60%。 适宜于木腐菌菌丝的生长，为木腐菌通用培养基。,第二节 原种的制作,木屑和棉籽皮原种的制作过程 先将蔗糖溶于水，其它原料混合干拌，再把水溶液倒入，搅拌均匀。,第二节 原种的制作,装瓶下松上实；装至瓶肩处；用锥形木棒在瓶或袋的中央打一个洞。 打洞有三个方面的作用，一是能提高灭菌效果；二是解决瓶（袋）下部的通气问题，有利于菌丝沿孔洞向下蔓延，能加速菌丝生长；三是作接种穴用，能固定住菌种块。 4. 灭菌和接种同麦粒原种 5. 培养 适温下约3040 d长满瓶（袋），菌丝长满后，再继续培养35 d。,第二节 原种的制作,优质原种的标准： 1菌种纯正，无杂菌污染。 2菌丝洁白，不变色，不吐黄水。 3菌丝粗壮，生长势强。 4菌丝生活力强，转接到新培养基上后，吃料快。 5培养基湿润，与瓶壁紧贴而不干缩。 6菌龄要适宜，一般室温下保藏不超过15 d，不能有原基和幼菇出现,第三节 栽培种的制作,栽培种是把原种转接到相同或相似的培养基上扩大培养而成的，直接应用于生产栽培。 使用量较大，不易长期保存，因此制种的时间和数量必须根据生产季节和生产规模计划进行。 栽培种的容器和制作过程与原种的相似或相同，生产量大时需要大型灭菌锅。,大型灭菌锅,第三节 栽培种的制作,二、接种 一般每瓶原种可扩接栽培种50-60瓶或20-40袋。 三、培养 栽培种培养方法与原种的相同。各级菌种培养期间都应定期检查，及时拣出污染或生长不良的瓶（袋）。,原种扩接为栽培种,第四节 液体菌种,液体菌种是指采用液体培养基培养而得到的纯双核菌丝体。菌丝体在培养基中呈絮状或球状。 液体菌种可以作为原种或栽培种直接接种栽培袋，简化了生产工艺。 液体菌种生产周期短、菌龄整齐、菌丝繁殖快，生长过程中还可以根据菌丝体的需要中途补充养分及调节酸碱度； 液体菌种便于进行机械化接种，在工业化、机械化程度高的部门具有明显优势。 生产液体菌种需要专门的设备和较高的技术。,在菌种的制作这一章里，我们介绍了食用菌母种、原种和栽培种的制作技术，讲解了组织分离和孢子分离技术，对液体菌种只做了简单的介绍，同学们有所了解就行了。,