实验五 实验六,酵母菌的形态观察及死活细胞鉴定 微生物显微镜直接计数法,一、目的要求,1.学习自制水浸片法观察酵母菌的方法 2.观察酵母菌形态和出芽生殖方式 3.学习并掌握区分酵母菌死活细胞的染色方法 4.了解血球计数板的构造、计数原理和计数方法，掌握显微镜下直接计数的技能,二、实验原理,1.酵母菌可以用单纯的水制成水浸片观察， 也可以用染色液制成水浸片观察。 2.美兰是一种无毒性染液，有两种形态 还原型：无色 氧化性：蓝色 活细胞因新陈代谢而有强还原力使美兰从氧 化型变为还原型；死细胞无此能力，而被美 兰染成蓝色。以此可以区分死活细胞。 3.测定微生物细胞数量的方法很多，通常采用 的有显微直接计数法和平板计数法。,血球计数板是一块特制的厚型载玻片，载玻片上有4条槽构成3个平台.中间的平台较宽，其中间又被一短横槽分隔成两半，每个半边上面各有一个计数区。,血球计数板,计数区的刻度有两种： 一种是2516：计数区分为16个大方格（大方格用三线隔开），而每个大方格又分成25个小方格； 另一种是1625：一个计数区分成25个大方格（大方格之间用双线分开），而每个大方格又分成16个小方格。,每毫升菌液中的菌数 = 25（16）101000B A：5个中方格中的酵母菌数 B：稀释倍数,A,5,三、实验材料,1.菌种：啤酒酵母 2.染色液：0.1%吕氏碱性美蓝 3.器材：载玻片，显微镜、血球计数板、盖玻片 、吸水纸、计数器、滴管、擦镜纸。,（一）.酵母菌个体形态观察 用美兰浸片法观察啤酒酵母个体形态及死活细胞区别,四、内容及方法,1、在载玻片上各滴加一滴染色液和酵母菌培养液，盖上盖玻片，（勿使产生气泡，且不要再移动盖玻片） 2、将制好的水浸片放置2分钟后镜检。先用低倍镜观察，然后换用高倍镜观察酿酒酵母的形态和出芽情况，同时可以根据是否染上颜色来区别死、活细胞。 3、染色半小时后，再观察一下死细胞数是否增加。 4、染色一小时后，再观察一下死细胞数是否增加。,（二）、显微镜直接计数法,1.镜检计数室，熟悉计数器的使用方法 2.对稀释5倍的啤酒酵母悬液进行计数 3.注意： （1）血球计数板必须洗干净，勿刷 （2）注意勿损坏计数器,计数原则： 1、 稀释浓度要合适，每个小方格5-10个 酵母菌 2、压线的酵母菌，一般计上和右 3、对于出芽的菌体，如果芽体超过母体的 一半，算2个菌,五、实验结果,1.酵母个体形态，芽体（绘图） 2.计算死活细胞的比率，说明吕氏碱性美蓝染液浓度和作用时间对死活细胞数的影响 3.计数结果,酵母个体形态,六、思考题,1.在显微镜下，酵母菌有哪些突出的特征区别于一般的细菌？ 2.某单位要求知道一种干酵母粉中的活菌存活率，请设计1-2种可行的检测方法。,