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实验五 实验六,酵母菌的形态观察及死活细胞鉴定 微生物显微镜直接计数法,一、目的要求,1.学习自制水浸片法观察酵母菌的方法 2.观察酵母菌形态和出芽生殖方式 3.学习并掌握区分酵母菌死活细胞的染色方法 4.了解血球计数板的构造、计数原理和计数方法,掌握显微镜下直接计数的技能,二、实验原理,1.酵母菌可以用单纯的水制成水浸片观察, 也可以用染色液制成水浸片观察。 2.美兰是一种无毒性染液,有两种形态 还原型:无色 氧化性:蓝色 活细胞因新陈代谢而有强还原力使美兰从氧 化型变为还原型;死细胞无此能力,而被美 兰染成蓝色。以此可以区分死活细胞。 3.测定微生物细胞数量的方法很多,通常采用 的有显微直接计数法和平板计数法。,血球计数板是一块特制的厚型载玻片,载玻片上有4条槽构成3个平台.中间的平台较宽,其中间又被一短横槽分隔成两半,每个半边上面各有一个计数区。,血球计数板,计数区的刻度有两种: 一种是2516:计数区分为16个大方格(大方格用三线隔开),而每个大方格又分成25个小方格; 另一种是1625:一个计数区分成25个大方格(大方格之间用双线分开),而每个大方格又分成16个小方格。,每毫升菌液中的菌数 = 25(16)101000B A:5个中方格中的酵母菌数 B:稀释倍数,A,5,三、实验材料,1.菌种:啤酒酵母 2.染色液:0.1%吕氏碱性美蓝 3.器材:载玻片,显微镜、血球计数板、盖玻片 、吸水纸、计数器、滴管、擦镜纸。,(一).酵母菌个体形态观察 用美兰浸片法观察啤酒酵母个体形态及死活细胞区别,四、内容及方法,1、在载玻片上各滴加一滴染色液和酵母菌培养液,盖上盖玻片,(勿使产生气泡,且不要再移动盖玻片) 2、将制好的水浸片放置2分钟后镜检。先用低倍镜观察,然后换用高倍镜观察酿酒酵母的形态和出芽情况,同时可以根据是否染上颜色来区别死、活细胞。 3、染色半小时后,再观察一下死细胞数是否增加。 4、染色一小时后,再观察一下死细胞数是否增加。,(二)、显微镜直接计数法,1.镜检计数室,熟悉计数器的使用方法 2.对稀释5倍的啤酒酵母悬液进行计数 3.注意: (1)血球计数板必须洗干净,勿刷 (2)注意勿损坏计数器,计数原则: 1、 稀释浓度要合适,每个小方格5-10个 酵母菌 2、压线的酵母菌,一般计上和右 3、对于出芽的菌体,如果芽体超过母体的 一半,算2个菌,五、实验结果,1.酵母个体形态,芽体(绘图) 2.计算死活细胞的比率,说明吕氏碱性美蓝染液浓度和作用时间对死活细胞数的影响 3.计数结果,酵母个体形态,六、思考题,1.在显微镜下,酵母菌有哪些突出的特征区别于一般的细菌? 2.某单位要求知道一种干酵母粉中的活菌存活率,请设计1-2种可行的检测方法。,
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