1脑欣口服液对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤能量代谢影响的实验研究作者：罗世杰 苏保宁 尹杰 张卉 林源【摘要】目的 探讨脑欣口服液对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤能量代谢的影响。 方法 将 7 日龄 SD 大鼠 50 只随机分为假手术组、缺氧缺血性脑病（HIE）模型组和脑欣口服液大剂量组、中剂量组、小剂量组，每组各 10 只。HIE 造模后，脑欣口服液大、中、小剂量组每只大鼠每次均灌胃 0.75mL（分别含生药0.625、0.5、0.375g） ，每日 2 次，均给药 10 日;模型组和假手术组均灌服等量的 0.9%氯化钠注射液，均给药 10 日。测定各组新生大鼠脑组织中钠、钾-三磷酸腺苷酶（Na、K+ -ATP 酶） 、钙-三磷酸腺苷酶（Ca2+ -ATP 酶）及镁-三磷酸腺苷酶（Mg2+ -ATP 酶）活性。 结果 模型组与假手术组比较，Na、K+ -ATP 酶、Ca2+ -ATP 酶、Mg2+ -ATP 酶活性差异均有显著性意义（P0.05） ，证明造模成功。模型组与脑欣口服液大剂量组比较，Na、K+ -ATP 酶、Ca2+ -ATP 酶、Mg2+ -ATP 酶活性差异均有显著性意义（P0.05）;与脑欣口服液中剂量组比较，Na、K+ -ATP 酶及 Ca2+ -ATP 酶差异均有显著性意义（P0.05）;与脑欣口服液小剂量组比较，Ca2+ -ATP 酶差异有显著性意义（P0.05） 。 结论 脑欣口服液抑制新生大鼠缺氧缺血性脑细胞凋亡的机理与 Na、K+ -ATP 酶、Ca2+ -ATP 酶及 Mg2+ -ATP 酶升高有关。【关键词】 脑欣口服液;缺氧，脑;脑缺血;三磷酸腺苷酶;实验研究Study of the effects of Naoxin oral liquid on energy metabolism of rat brain injury induced by ischemia and hypoxia【Abstract】 objective To explore the effects of Naoxin oral liquid on energy metabolism of rat brain injury induced by ischemia and hypoxia.Methods 50SD rats of7day were divided into sham operation group，HIE model group，large dose of Chinese medicine group，medium dose of Chinese medicine group，and small dose of Chinese medicine group with10rats in each group，Naoxin oral liquid was fed by the same volume of normal salina，from the large，medium and small dose groups after model was duplicated.Na，K+ -ATP enzyme，Ca2+ -ATP and Mg2+ -ATP in each group were measured.Results There were significant difference of three indexes between sham operation group and HIE model group（P0.05）.There were significant difference of three indexes between sham operation group and every treatment group（P0.05）.Conclu-sion The mechanism of inhibiting apoptosis of new-born rats brain cell from ischemia and hypoxia by Naoxin oral liquid iswell related to the increase of Na、K+ -ATP enzyme，Ca2+ -ATP enzyme and 2Mg2+ -ATP enzyme.【Key words】 Naoxin oral liquid;Hypoxia and ischemia encephalopathy（HIE）;Experimental study;Adenosine triphosphatase以往的研究已证实脑欣口服液可以抑制新生大鼠缺氧缺血性脑细胞凋亡1 。为了进一步研究脑欣口服液抑制新生大鼠缺氧缺血性脑细胞凋亡的机理，对缺氧缺血性脑损伤大鼠造模成功后给予不同剂量的脑欣口服液，测定缺氧缺血性脑损伤新生大鼠脑组织中钠、钾-三磷酸腺苷 酶（Na、K+ -ATP 酶） 、钙-三磷酸腺苷酶（Ca2+ -ATP 酶）及镁-三磷酸腺苷酶（Mg2+ -ATP 酶）的活性，观察脑欣口服液对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤能量代谢的影响。 1 材料与方法1.1 动物、药物与仪器设备1.1.1 动物 7 日龄体重约 40g 的 SD 大鼠 50 只（购自第四军医大学实验动物中心，合格证号为 056162） ，雌雄各半，母鼠喂养。1.1.2 药物 脑欣口服液由丹参 15g，川芎 10g，黄芪 25g，当归 25g，石菖蒲 25g 等组成，共 100g 生药，由陕西中医学院药物研究所分别制成脑欣口服液大、中、小 3 种剂量的口服液。即大剂量口服液用 100g 生药制成 120mL 口服液，每 mL 含生药 0.83g;中剂量口服液用 100g 生药制成 150mL 口服液，每 mL 含生药0.67g;小剂量口服液用 100g 生药制成 200mL 口服液，每 mL 含生药 0.5g。0.9%氯化钠注射液 500mL（四川科伦药业有限公司生产，批号 A20050835M） 、75%医用酒精 250mL（陕西省宝鸡酒精厂生产，批号 20050616） 、乙醚（河南省平顶山市朝阳制药厂生产，批号 20050123） 。Na、K+ -ATP 酶试剂盒（批号 20050924） 、Ca2+ -ATP 酶试剂盒（批号20050931） 、Mg2+ -ATP 酶试剂盒（批号 20050946）均由南京建成生物工程研究所提供。1.1.3 主要仪器及设备 723 可见分光光度计（上海光谱仪器有限公司） 、HH-2 数显恒温水浴箱（国华电器有限公司） 、FA1004N 电子天平（上海精密科学仪器有限公司天平仪器厂） 、TDL80-2B 台式离心机（上海安亭科学仪器厂）;冰箱、电子调节万用电炉、玻璃匀浆器、试管、滤纸、可调式移液器、试剂瓶、烧瓶、计时器、量筒等以上仪器设备均由陕西中医学院生化实验室提供;手术刀、止血钳、眼科镊、眼科剪、组织镊、4-0 丝线、玻璃分针、鼠台、医用纱布等均由陕西中医学院附属医院提供。1.2 实验方法1.2.1 模型制备 50 只 SD 大鼠随机分为假手术组、缺氧缺血性脑病（HIE）模型组、脑欣口服液大剂量组、中剂量组、小剂量组 5 组，每组 10 只。3参照文献2方法，取实验组动物，乙醚吸入麻醉，左颈部皮肤约 4cm4cm 区域严格消毒，捏起皮肤，横向剪开，再纵向沿颈中线剪开皮肤，分离皮下组织，寻找胸锁乳突肌，钝性纵向分离，左内下方即可见到颈动脉及迷走神经，用剥离子将颈动脉找出并分离之，结扎后缝合，置于 2000mL 密闭容器中，通入含 8%氧气和 92%氮气的混合气体 2h，即制成左侧大脑半球缺氧缺血性脑病动物模型。假手术组仅游离左侧颈总动脉，不予结扎，缝合后不置混合气体密闭容器中。 各组用药结束后，将大鼠断头处死，迅速剥离大脑，去除小脑及脑干，在冰盘将大脑依矢状沟分为左右两部分。取左侧大脑组织在冰盘水中漂洗，除去血液，滤纸烧干，称重，按 19（WV）重量体积比加 0.9%氯化钠注射液，用玻璃均浆器制成 10%的脑组织匀浆，再立即以 1500r.min 离心 10min 取其上清液置于试管中待测。1.2.2 用药方法 脑欣口服液大、中、小剂量组分别给大、中、小剂量的脑欣口服液每次 20mL.kg，每只鼠每次均灌胃 0.75mL（分别含生药0.625、0.5、0.375g） ，每日均 2 次，均给药 10 日;模型组和假手术组均灌服等量 0.9%氯化钠注射液 10 日。1.3 观察指标 能量代谢指标:脑匀浆 Na、K+ -ATP 酶、Ca2+ -ATP 酶、Mg2+ -ATP 酶活性用 723 可见分光光度计（上海光谱仪器有限公司生产） ，按试剂盒内说明书以定磷法测定。1.4 统计学处理 实验数据以均数标准差（xs）表示，用 Microsoft excel 整理分析，组间均数比较用 t 检验。P0.05 表示有统计学意义。 2 结 果5 组小鼠 Na、K+ -ATP 酶、Ca2+ -ATP 酶、Mg2+ -ATP 测定结果见表 1。表 1 5 组小鼠 Na、K+ -ATP 酶、Ca2+ -ATP 酶、Mg2+ -ATP 酶测定结果 略3 讨 论新生儿缺氧缺血性脑病（hypoxic-ischemic encephalopa-thy，HIE）属于中医的胎惊、胎痫、惊风、囱填、昏迷等病证范畴，是引起新生儿死亡和儿童神经系统伤残的重要原因。围生期窒息，使脑部缺氧缺血，导致气血不足，瘀血阻络，风痰上扰清窍而发病。脑欣口服液方中丹参活血祛瘀，川芎活血行气，黄芪补气升阳，当归补血活血，石菖蒲芳香化湿、开窍宁神。全方活血补血，益气开窍。现代药理研究证明，丹参能显著降低患儿的脑血流阻力指数，提高脑血流速度，改善脑血流自动调节机制，减少因局部血管痉挛及血管炎症所致的继发性脑缺血，从而减轻脑损伤3 。丹参能明显抑制细胞超载，并能减少脑细胞兴奋性氨基酸释放，使神经元损伤减轻4，5 。丹参能促进已发生障碍的微循环血流速度加快，毛细血管交叉网点数目增多，微血管内红细胞流速、流态恢复正常，显著地改善微循环，有助于改善细胞代谢状况6 。川芎能显著增加兔的脑血流量，川芎嗪可使麻醉犬脑血流量显著增加，血管阻力下降;川芎能改善软4脑膜微循环和流态，增加脑血管搏动性和血容量6 。黄芪对小鼠有镇静作用，黄芪水煎液有加强小鼠学习记忆的作用，还有利于小鼠对信息的贮存作用6 。当归对脑缺血后再灌注脑组织脂质过氧化物增高有明显的抑制作用，当归与川芎合用具有某种程度抗氧化及抑制自由基的作用，从而减轻脑缺氧，对缺氧后再灌注损伤起到治疗作用6 。石菖蒲有中枢镇静和抗惊厥作用，还能明显改善东莨菪碱、亚硝酸钠所致的小鼠记忆获得和巩固障碍，也能改善亚硝酸钠、氰化钾和结扎两侧颈总动脉所致的小鼠缺氧状态6 。从实验结果看，模型组与假手术组比较，Na、K+ -ATP 酶、Ca 2+ -ATP 酶、Mg2+ -ATP 酶均明显升高（P0.05） ，说明造模成功。与模型组比较，大剂量脑欣口服液可使 Na、K+ -ATP 酶、Ca2+ -ATP 酶及 Mg2+ -ATP 酶均升高（P0.05）;中剂量脑欣口服液可使 Na、K+ -ATP 酶及 Ca2+ -ATP 酶均升高（P0.05）;小剂量脑欣口服液仅使 Ca2+ -ATP 酶升高（P0.05） 。从此可知，脑欣口服液抑制新生大鼠缺氧缺血性脑细胞凋亡的机理与 Na、K+ -ATP 酶、Ca2+ -ATP 酶及 Mg2+ -ATP 酶升高有关。其量效关系为大、中剂量脑欣口服液均可使 Na、K+ -ATP 酶升高，小剂量对 Na、K+ -ATP 酶无效;大、中剂量脑欣口服液均可使 Ca2+ -ATP 酶升高，小剂量对 Ca2+ -ATP 酶无效;大剂量脑欣口服液可使 Mg2+ -ATP 酶升高，中、小剂量均对 Mg2+ -ATP