微生物基础知识 与 生产卫生要求,一、微生物基础知识 二、生产卫生要求,一、微生物基础知识,微生物（microorganism, microbe）是一些肉眼看不见的微小生物的总称。包括属于原核类的细菌、放线菌、支原体、立克次氏体、衣原体和蓝细菌（过去称蓝藻或蓝绿藻），属于真核类的真菌（酵母菌和霉菌）、原生动物和显微藻类，以及属于非细胞类的病毒、类病毒和朊病毒等。,我们所生活的环境中，到处都存在着大量的微生物。在一般空气中，微生物达8003500个/m3，在土壤中达1500108个/g，在严重污染的水中可达107个/ml。（饮用水要求细菌总数100个/ml，大肠杆菌3个/ml。经水塔或贮水池贮存后，短期内可繁殖至105106个/ml。）人的头皮上有140万个/cm2，两手上约有440万个，1g指甲污垢有38亿个，1g粪便可达101000亿个。在很多极端环境（高温、高压、强酸、强碱、低温等）甚至是致死的环境中，都已发现有生命力顽强的微生物（称为极端微生物）。各种研究表明：微生物有特别顽强的生存、繁殖和变异能力来适应环境。可以说地球上微生物是无处不在，无处不有。,微生物千姿百态，有些是腐败性的，即引起食品气味和组织结构发生不良变化。当然有些微生物是有益的，它们可用来生产如奶酪，面包，泡菜，啤酒和葡萄酒。微生物非常小，一般必须通过显微镜放大约1000 倍甚至更高倍数才能看到。比如中等大小的细菌，1000个叠加在一起只有句号那么大。,常见名词解释,微生物:是一类（microorganism, microbe）肉眼不能直接看见，必须借助光学显微镜或电子显微镜放大几百倍或几万倍后才能观察到的微小生物的总称。,常见名词解释：,菌落：单个细菌在固体培养基上繁殖，形成肉眼可见的群体。 菌落形成单位（cfu）：由一个（或几个）细菌繁殖，形成肉眼可见的群体。 传代： 将培养物重新接种到另外的培养基内，再进行培养的过程称为传代（passage）或者再培养 。 消毒：是指杀死微生物的繁殖体，但不能杀死芽孢等全部微生物。所以消毒是不彻底的，不能代替灭菌。 灭菌：杀死所有活的微生物（不含活菌）。,名词解释：,消毒与灭菌的区别： 是两个不同的概念。 灭菌要求完全杀灭微生物；消毒只能杀灭一部分微生物。 消毒的方法有多样性，消毒常常用化学物质（消毒剂）。 灭菌效果是用无菌检查法检测；消毒效果是以消毒剂的效价来评定。,微生物五大特点:,体积小，面积大； 吸收多，转化快； 生长旺，繁殖快； 适应强，易变异； 分布广，种类多 ；,微生物的“生物界之最”,个体最小 数量最多 分布最广 形态最简 变异最易 起源最早 胃口最大 抗性最强 发现最晚 食谱最广 休眠最长 界级最宽 繁殖最快 种类最多,影响微生物生长的主要因素：温度、pH和氧气。 根据细菌对氧的要求，将其分为需氧菌、厌氧菌、兼氧菌三种类型,常用试验菌种形态,大肠埃希菌(Escherichia coli )CMCC(B)44 102 金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)CMCC(B)26 003 枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）CMCC(B)63 501 乙型副伤寒沙门菌（Salmonella paratyphi B）CMCC(B)50 094 铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）CMCC(B)10 104 生孢梭菌(Clostridium sporogenes) CMCC(B)64 941 白色念珠菌(Candida albicans) CMCC(F)98 001 黑曲霉(Aspergillus niger) CMCC(F)98 003,大肠埃希菌（营养琼脂平板）,大肠埃希菌（T T C染色）,大肠埃希菌（镜下）,金黄色葡萄球菌（镜下）,枯草芽孢杆菌（营养琼脂平板）,白色念珠菌（镜下）,黑曲霉（改良马丁琼脂斜面）,微生物的营养要求,微生物生长繁殖所需的营养物质主要有水、碳源、氮源、无机盐和生长因子等。 1.水：水是各种生物细胞必需的。水是良好的溶剂，微生物的新陈代谢过程中的一切生化反应都离不开水的作用。 2.碳源：碳源是合成菌体成分的原料，也是微生物获取能量的主要来源。整体上看来，微生物可以利用的碳源范围极广，从大类上说，可以分为有机碳源和无机碳源两大类，凡必须利用有机碳源的微生物就是异养微生物，凡能利用无机碳源的微生物就是自养微生物。糖类是最广泛利用的碳源。,3.氮源 氮源主要是供给合成菌体结构的原料，很少作为能源利用。与碳源相似，微生物作为一个整体来说，能利用的碳源种类十分广泛。某些微生物（如固氮菌）能利用空气中分子态的氮或利用无机氮化物如铵盐、硝酸盐合成有机氮化物。多数致病菌则必须供给蛋白胨、氨基酸等有机氮化物才能生长。,微生物的生长和繁殖,微生物在适宜的环境条件下，不断地吸收营养物质，并按照自己的代谢方式进行代谢活动，如果同化作用大于异化作用，则细胞质的量不断增加，体积得以加大，于是表现为生长。 简单地说，生长就是有机体的细胞组分与结构在量方面的增加。,环境微生物,空气中的微生物主要存在于尘埃上。而尘埃的多少与种类就直接决定了微生物的数量与种类的多少。所以空气中微生物的数量随人的密度、活动程度(尘土被搅动的情况) 等产尘程度以及温度、湿度、风力等因素而异。,环境微生物,空气携带细菌主要有2种方式；一是细菌可附着在尘土上(细微颗粒)，长时间浮游在空气中；其二，细菌在人咳嗽、喷嚏、唱歌、讲话、呼吸时通过口腔、鼻腔部喷出的飞沫(大多数飞沫为48m)可长时间浮游在空气中，飞沫的水分蒸发后便成飞沫核，直径缩至l2m，附着的微生物随气流悬浮不定。 空气中微生物是药品生产中引起污染的重要来源之一。因此必须做好空气的清洁卫生和消毒管理工作。,推行GMP目的：消灭污染、混药、差错 污染的定义：当一个产品存在有不需要的物质时，它即受到污染。 污染的形式：最主要是粉尘污染分化学物质污染与尘土污染（微生物），此外还有吸潮等气、液污染。 传播污染的五大媒介：空气、水、表面、人、物料,传播污染的五大媒介：空气,空气并不是产生污染的介质，但它是污染的危险携带者。充满微生物的尘埃和水滴就是通过空气作为侵袭我们产品的媒介而成为重要的污染源的。 当我们谈话、咳嗽和打喷嚏时，被污了的水滴正是不断地从我们的呼吸道中放入我们的工作场所。尘埃微粒正是通过空气流不间断地在我们整个药厂范围循环运行着。 空气中存在的尘埃微粒是含有微生物(细菌等)的。因此，空气是侵袭我们产品的污染物的主要媒介。这就是为什么要尽量保持空气洁净是极为重要的,传播污染的五大媒介二：水,水：从理论上来讲，微生物在纯水中是不能生长的。但是，所有的各类水，不管怎样仔细地蒸溜或过滤，总会含有一定量的可溶性有机物和盐类。正是这些可溶性的物质可被微生物利用作为它们生长的养料源泉。 在生产过程中，水是应用最广泛的原料之一。这就是为什么我们药厂的卫生规程不仅必须仔细地控制用于生产过程的水，而且要控制好如何正确地用水来清洗我们的设备。,传播污染的五大媒介三：表面,表面包括：天花板、墙壁、地面、设备、容器、工具或桌子； 由于空气中的湿度，所有表面都包上一层含水的薄膜。这层薄膜由于静电吸引而饱含尘埃微粒，有很多时候，表面还覆盖一层油状物质，此层油膜易受到尘粒污染。 表面因尘埃微粒和微生物由空气传播的回降而受到污染。 一个表面看起来很干净，而实际上已经被千百万个微生物所污染，除非已经做了正确的消毒灭菌。 一个表面看起来很干净，而实际上已经被千百万个微生物所污染，除非已经做了正确的消毒灭菌。,制药企业生产车间的厂房，库房及实验室都必须清洁整齐。洁净区厂房必须表面不透水，光滑平整、无裂缝、接口严密、无颗粒物脱落，并能耐受清洗和消毒。设备、管道应易于拆卸、结构简单，便于清洁消毒。 药品生产过程中使用的容器，包括内包装容器，都应进行清洗和消毒,传播污染的五大媒介四:人,人是最常见的传染源。事实上，人们常说，人是药厂中最不清洁的成份，最大的污染源。为什么呢?一个原因，人体是一个永不休止的污染媒介。当您每天来药厂上班时，您也许随身将几百万细菌带入工厂。,人员污染的途径和方式 人的头发和皮肤 水滴 衣着 化妆品和珠宝手饰 生产过程中人们所引起的混杂和误差,每分钟从人类皮肤中要散发出约10,000个微生物?如果说，一小粒糖的空间中能装载4亿个微生物，那么，您想想看，在一股头发中可以容纳多少微生物呢? 我们的手，也拥有大量的微生物。此外，在人们正常的日常活动中都接触大量微生物。 水滴、呼吸和咳嗽将产生出大量水滴，这种水滴既含有尘粒污染也含有微生物污染。口腔是对污染最为敏感的地区。一次咳嗽或喷嚏将把干百万个微生物引入工作环境内。,衣着 从可洗涤的纺织物中，可能散发出棉绒和淀粉粒。而从羊毛、开士米和其它松软的针纺织物中也可能散落出纤维和磨损下的微粒。污染也可能通过我们的鞋子进入工作场所。 化妆品和珠宝手饰 发胶、气雾除臭剂、眼脸膏、香粉等，为微生物污染提供了极好的源泉。耳环、戒指、项链、手链能传播微生物污染。如果，一小片珠宝碎片落入一批产品中，则可能引起严重的尘粒污染。 生产过程中人们所引起的混杂和误差 由人引起的污染也可能来自于生产过程中出现的混杂和误差。例如，当员工没有按照SOP进行工作时，车间的污染程度增加。让产品容器不加盖地存放，将导致产品污染。,传播污染的五大媒介五物料 。 1、药品生产所用物料，其对微生物的污染控制等级是不一样的。 2、有些物料是微生物的良好营养源，容易产生大量的微生物；有些物料具有一定的防腐性或消毒作用，能抑制微生物的生长与繁殖。 3、有些物料属非药用级，其在生产包装运输储存使用中没有控制微生物。有些物料属于药用级，在其生产包装运输储存使用中应严格按照规定执行，以控制微生物可能受到的污染水平。,微生物污染及消毒灭菌,常用的消毒与灭菌方法： 物理灭菌和化学消毒法。 物理灭菌分为：热力灭菌、辐射灭菌、滤过除菌。,物理灭菌方法 热力灭菌法,干热灭菌法,湿热灭菌法,火焰灼烧法,烘箱内热空气灭菌法,常压,加压,巴氏消毒法,煮沸灭菌法,间歇灭菌法,LTH法（低温维持法）,HTST法（高温瞬时法）,常规连续加压灭菌法,连续加压灭菌法（121 1520分钟，115 35分钟。）,表面消毒剂 化学治疗剂,溶液状态,气体状态,抗代谢物：磺胺类等,抗生素,中草药有效成分,常用的消毒剂介绍：,1醇类：醇类消毒作用较快，性质稳定，无腐蚀性，无毒性，能去污，起清洁作用，价廉易得。 目前使用最为普遍的是乙醇。它属中效消毒剂，可杀死各种微生物，但不能杀灭细菌芽胞。杀菌机理是使菌体蛋白质变性。使用浓度75%。常用于皮肤及手的消毒。采取常用浓度，仅l0s就能杀灭绿脓杆菌、大肠杆菌、葡萄球菌、伤寒杆菌等。,表面活性剂：带阳电荷的季胺盐类化合物能被牢固地吸附于带有负电荷的细菌表面，破坏细菌质膜，使菌体成分漏出。这类化合物列细菌繁殖体有广谱杀灭作用，且作用快而强，毒性亦较小，属于低效消毒剂(可杀灭细菌繁殖体、真菌和亲脂病毒。但不能杀灭芽胞、结核杆菌和亲水病毒) 属于此类的药物有新洁尔灭(常用浓度0 l0.2%)、杜灭芬(O.01O.02%)、洗必泰(O.10.2%)。,使用时应注意；配制消毒液时不宜用硬水，最好用蒸馏水。高浓度在低温时易发生浑浊或析出，宜置于温水(约40)中使其混匀溶解澄清，再配制所需浓度。 新洁尔灭等虽属低效消毒剂，但在医疗用品生产环境中，鉴于此类药物杀菌浓度低，价廉(与乙醇相比)，作为综合消毒措施中的补充，减少生产环境细菌数量，还是有实用价值的。,下列消毒剂常用于手、皮肤及操作台面等消毒。 70%75%乙醇水溶液； 0.5%洗必泰溶于70%乙醇，再加入2%甘油，用于皮肤、器具等消毒； 异丙醇 75%水溶液，用于