第四章 蛋白质的共价结构,一、蛋白质通论,1. 蛋白质对生命的意义 催化功能 调节和调控功能 运动、支持和结构功能 转运功能 贮存功能 保护功能,2. 蛋白质的组成和分类 元素组成上的特点： 含N量较高，且恒定为16%左右： 蛋白质含量%=含氮量/16%=含氮量6.25 (凯氏定氮法测蛋白质含量的基础) 蛋白质的分类： 简单蛋白质 纤维状蛋白质 缀合蛋白质 球状蛋白质 膜蛋白质,3. 蛋白质结构的组织层次,一级结构 氨基酸的排列顺序 二级结构 三级结构 空间结构 (高级结构、构象） 四级结构,蛋 白 质 的 结 构 层 次 及 相 互 关 系,二级结构是三级结构的组织层次,二、 肽,1. 肽键及其性质,多肽的方向及表示方法,肽键的结构特点： 1. 肽键具有部分双键的性质，所以不能自由旋转； 2. 组成肽键的4个原子和2个相邻的C在一个平面上（称为酰胺平面或肽平面）； 3. 除脯氨酸的-NH2参与形成的肽键外，其余的肽平面上，两个C都是处于更稳定的反式构象；,2 肽的理化性质 2.1 肽的两性解离,pK1=2.34,pK-COOH= 3.86,pK-NH2=10.79,Pk2=8.95,pI= (3.86+8.95)/2=6.4,2.2 肽的双缩脲反应,2.3 天然存在的活性多肽,三、蛋白质一级结构的测定,测定蛋白质的氨基酸顺序的意义： 是阐明蛋白质生物学功能的基础； 是阐明蛋白质空间结构的基础； 有助于揭示一级结构的变化与遗传疾病的关系； 4. 有助于指明蛋白质的进化史；,蛋白质,间接法：,直接法：,蛋白质样品(纯度97）,蛋白质中多肽链的数目,1,非共价结合,变性剂,共价结合,氧化剂 还原剂,断开多肽链内的二硫键,1,水解后分析氨基酸的组成,确定N-末端和C-末端氨基酸种类,用多种方法裂解多肽链成小片段并测定其氨基酸序列,用重叠法重建完整多肽的氨基酸顺序，确定二硫键位置,（一） N-末端分析 1. DNFB法、DNS法、PITC法,2. 氨肽酶法,氨肽酶是能够从N-末端逐个水解下氨基酸的酶。,（二） C-末端的分析 1. 肼解法,2. 还原法 3. 羧肽酶法 羧肽酶A ： 能释放除Pro、Arg、Lys之外的所用C-末端氨基酸； 羧肽酶B： 只能释放Lys和Arg形成的C-末端；,