医院消毒灭菌的效果监测,河北医科大学第二医院 史利克,一、前言： 1.医院消毒是预防医院内感染的重要措施之一 2. 消毒效果的监测是评价 3.消毒设备运转是否正常 4.消毒药剂是否有效 5.消毒方法是否合理 6.消毒效果是否达标的唯一手段,医院消毒效果监测时需遵循以下原则,监测人员需经过专业培训，掌握一定的消毒知识； 熟悉消毒设备和药剂性能; 具备熟练的检验技能; 选择合理的采样时间(消毒后、使用前); 遵循严格的无菌操作。,二、热力灭菌效果的监测方法,（一）压力蒸汽灭菌效果监测方法 1、化学监测法: 化学指示卡(管)监测方法 既能指示蒸汽温度，又能指示温度持续时间 化学指示管(卡)放入大包和难以消毒部位的物品包中央 （旧版消毒技术规范是放入每一待灭菌的物品包中央）,化学指示胶带监测法： 将化学指示胶带粘贴于每一待灭菌物品包外,BD试验,对预真空和脉动真空压力蒸汽灭菌，每日进行一次B-D试验。 设计原理 a. 使实验包成为灭菌器内残留空气的聚焦点，它相对较大的面积和可透气布料易吸附、“捕捉”残留空气。 b.真空测试图上的化学试剂对残留空气具有敏感性。,BD试验方法,将测试图置于实验包中间位置； 然后，将实验包放于灭菌器室内排气口处，关闭柜门； 进行1345分钟灭菌处理完毕，打开柜门，观察测试结果。,BD实验包的制备,实验包由4650cm8090cm纯棉布巾组成，布巾先横折为三层，再纵折成六层。将折好的布巾一条摞一条至25cm高度。摞放时，各层布巾按折叠侧左右交替摆好，以使两侧厚度相等。布巾摆好后，将真空测试图夹放于中央布巾之间，然后用布包巾包好，外面用化学指示胶带固定好，成为一个实验包。整个实验包的大小高约25cm，宽约23cm，长约27cm，重约5kg。,BD实验条件,实验规定在134蒸汽条件下，使用3.5分钟观察结果，最长不超4分钟。 测试图必须夹放于布包的中央层位置。 实验包放在灭菌器底层，靠近柜门与排气口处。 实验在每天第一次灭菌前空锅进行。,结果判断,结果判断 合格：测试图变黑且均匀，即中央部分和边缘部分颜色一致，表示灭菌器抽真空系统良好。 不合格：测试图变色不均匀，通常中央比边缘部分颜色浅，表示空气排除不彻底，须检查、修理后使用.,B-D测试失败原因分析,真空泵效果下降 自控系统失灵, 抽气时间缩短 柜室密封性能下降, 不能维持规定的负压 空气起始温度低, 重力作用明显 送入蒸汽动能偏高, 将过多的空气挤入试验包 试验包与柜室容量相比过小, 产生小装量效应 B-D试验未按规定进行,2、生物监测法,指示菌株：指示菌株为耐热的嗜热脂肪杆菌芽孢(ATCC 7953或SSIK 31株)，菌片含菌量为5.Ol05cfu/片5.Ol06cfu片，在121O.5条件下，D值（杀灭90%微生物所需时间）为1.3min1.9min，杀灭时间(KT值)19min，存活时间(ST值)为3.9min。 培养基：试验用培养基为溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨水培养基。,检测方法,将两个嗜热脂肪杆菌芽孢菌片分别装入灭菌小纸袋内，置于标准试验包中心部位。 在下排气压力蒸汽灭菌柜室内，排气口上方放置一个标准试验包(由3件平纹长袖手术衣，4块小手术巾，2块中手术巾，1块大毛巾，30块lOcmlOcm 8层纱布敷料包裹成(25cm30cm30cm大小)。,预真空和脉动真空压力蒸汽灭菌器,预真空和脉动真空压力蒸汽灭菌器灭菌柜室内，排气门上方放置一个标准测试包(由16条全棉手术巾4lcm66cm，将每条手术巾的长边先折成3层，短边折成2层然后叠放，作成23cm23cml5cm大小的测试包) 。,手提压力蒸汽灭菌器,手提压力蒸汽灭菌器用通气贮物盒(22cml3cm6cm)代替标准试验包，盒内盛满中试管，指示菌片放于中心部位的两只灭菌试管内(试管口用灭菌牛皮纸包封)，将贮物盒平放于手提压力蒸汽灭菌器底部。,检测方法,经一个灭菌周期后，在无菌条件下，取出标准试验包或通气贮物盒中的指示菌片，投入溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨水培养基中，经561培养7d(自含式生物指示物按说明书执行)，观察培养基颜色变化。检测时设阴性对照和阳性对照。,快速检测(24小时出结果),结果判定,每个指示菌片接种的溴甲酚紫蛋白胨水培养基都不变色，判定为灭菌合格：指示菌片之一接种的溴甲酚紫蛋白胨水培养基，由紫色变为黄色时，则灭菌过程不合格。 注意事项：监测所用菌片须经卫生部认可，并在有效期内使用，生物指示物监测应1月1次。,、干热灭菌效果监测方法,1、化学检测法 检测方法：将既能指示温度又能指示温度持续时间的化学指示剂3个5个分别放入待灭菌的物品中，并置于灭菌器最难达到灭菌的部位。经一个灭菌周期后，取出化学指示剂，据其颜色及性状的改变判断是否达到灭菌条件。,结果判定,检测时，所放置的指示管的颜色及性状均变至规定的条件，则判为达到灭菌条件；若其中之一未达到规定的条件，则判为未达到灭菌条件。,2、物理检测法：(热电偶检测法),检测方法：检测时，将多点温度检测仪的多个探头分别放于灭菌器各层内、中、外各点。关好柜门，将导线引出，由记录仪中观察温度上升与持续时间。 结果判定：若所示温度(曲线)达到顶置温度，则灭菌温度合格。,生物检测法,指示菌株：枯草杆菌黑色变种芽孢(ATCC9372)，菌片含菌量为5.0105cfu/片5.0106cfu/片。其抗力要求同上。 检测方法：将枯草杆菌芽孢菌片分别装入灭菌中试管内(1片/管)。灭菌器与每层门把手对角线内，外角处放置2个含菌片的试管，试管帽置于试管旁，关好柜门，经一个灭菌周期后，待温度降至80时，加盖试管帽后取出试管。,在无菌条件下 ，加入普通营养肉汤培养基(5ml管)，以361培养48h，观察初步结果，无菌生长管继续培养至第七日。 结果判定:若每个指示菌片接种的肉汤管均澄清，判为灭菌合格，若指示菌片之一接种的肉汤管混浊，判为不合格。 对难以判定的肉汤管，取o1ml接种于营养琼脂甲板，用灭菌L棒涂匀，放361培养48h，观察菌落形态，并做涂片染色镜检，判断是否有指示菌生长，若有指示菌生长，判为灭菌不合格；若无指示菌生长，判为灭菌合格。,三、环氧乙烷(EO)灭菌效果监测,灭菌效果监测 每次灭菌均应进行程序监测 每个灭菌物品的外包装应粘贴包外化学指示胶带，作为灭菌过程的标志；包内放置化学指示卡，作为灭菌效果的参考。 每月应做生物监测，移植物必须等生物监测结果为阴性时方可使用。,生物指示物监测法,一般每月用生物指示物监测一次。生物指示物用枯草杆菌黑色变种芽孢(ATCC9372)，抗力要求为：菌量在5105cfu片5106cfu片，在环氧乙烷剂量为600mgL30mg/L，作用温度为542，相对湿度为6010条件下，其杀灭90该微生物的D值为2.6min5.8min，存活时间应7.8min，死亡时间应58min。,生物指示剂的要求,菌量为5103cfu片5104cfu片。通常做常采用以下数量的生物指示物较为适宜： 灭菌器柜室可用体积小于5m3时，至少放置10个菌片； 灭菌器柜室可用体积为5m3至10m3时，每增加1m3，增加1个菌片； 灭菌器柜室可用体积大于10m3时，每增加2m3，增加1个菌片。 生物指示物应放在那些在性能鉴定时发现是最难灭菌的部位，并均匀分布于整个灭菌物品中。,要求：,每次灭菌都应进行灭菌过程监测。 检测所用化学和微生物指示物必须经卫生部批准，并在有效期内使用。,四、紫外线消毒效果的监测,紫外线灯管辐照度值的测定 1、紫外线辐照计测定法： 开灯5min后，将测定波长为253.7nm的紫外线辐照计探头置于被检紫外线灯下，待仪表稳定后，读数。,2、紫外线强度照射指示卡监测法,开启紫外线灯5min后，将指示卡置紫外灯下垂直距离lm处，有图案一面朝上，照射lmin(紫外线照射后，图案正中光敏色块由乳白色变成不同程度的淡紫色)，观察指示卡色块的颜色，将其与标准色块比较，读出照射强度。,3、结果判定,普通30w直管型紫外线灯，新灯辐照强度90W/cm2为合格；使用中紫外线灯辐照强度70W/cm2为合格；30W高强度紫外线新灯的辐照强度180W/cm2为合格。 注意：测定时电压220V5V，温度2025，相对湿度60%，紫外线辐照计必须检定。指示卡应获得卫生许可批件。,五、医疗器械灭菌效果的监测,无菌检验是检查无菌物品是否无菌的一种方法。 注意： 1、无菌检验应在洁净度为100级单向流空气区域内进行，应严格遵守无菌操作，避免微生物污染；对单向流空气区域及工作台面，必须进行洁净度验证。 2、采样时间在灭菌后，保存有效期内。,无菌检验前准备,洗脱液与培养基无菌性试验：无菌试验前3d，于需-厌养培养基与霉菌培养基内各接种lml洗脱液，分别置3035与2025培养72h，应无菌生长。,小件医疗器械的采样,取缝合针、针头、刀片等小件医疗器械5件直接浸入6管需厌氧培养管(其中一管作阳性对照)与4管霉菌培养管。培养基用量为15ml/管。,注射器采样,取5付注射器，在5ml洗脱液中反复抽吸5次，洗下管内细菌，混和后接种需-厌养菌培养管(共6管，其中1管作阳性对照)与霉菌培养管(共4管)。接种量：lml注射器为0.5ml，2ml注射器为lml，5ml10ml注射器为2ml，20ml50ml注射器为5ml。 培养基用量：接种量为2ml以下为15ml/管，接种量5ml为40ml/管。,大件医疗器械的采样,手术钳、镊子等大件医疗器械取2件用沾有无菌洗脱液的棉拭子反复涂抹采样，将棉拭子投入5ml无菌洗脱液中，将采样液混匀，接种于需厌氧培养管(共6管，其中1管作阳性对照)与霉菌培养基(共4管)。接种量为1ml/管，培养基用量为15ml/管。,培养时间,将需厌氧培养管以及阳性与阴性对照管均于3035培养5d，霉菌培养管与阴性对照管于2025培养7d，培养期间逐日检查是否有菌生长。 如加入供试品后培养基出现混浊或沉淀，经培养后不能从外观判断时，可取培养液转种入另一支相同的培养基中或斜面培养基上，培养48h72h后观察。,3、注意事项,（1）送检时间不得超过6h，若样品保存于04，则不得超过24h。 （2）被采样本表面积100cm2取全部表面；被采样本表面积100cm2，取100cm2。 （3）若消毒因子为化学消毒剂，采样液中应加入相应中和剂。,六、手和皮肤黏膜消毒效果监测,1、手的采样 被检人五指并拢，用浸有含相应中和剂的无菌洗脱液的棉拭子在双手指屈面从指根到指端往返涂擦2次(一只手涂擦面积约30cm2)，并随之转动采样棉拭子，剪去操作者手接触部位，将棉拭子投入lOml含相应中和剂的无菌洗脱液试管内，立即送检。,2、皮肤粘膜采样,用5cm5cm的标准灭菌规格板，放在被检皮肤处，用浸有含相应中和剂的无菌洗脱液的棉拭子1支，在规格板内横竖往返均匀涂擦各5次，并随之转动棉拭子，剪去手接触部位后，将棉拭子投入lOml含相应中和剂的无菌洗脱液的试管内，立即送检。不规则的粘膜皮肤处可用棉拭子直接涂擦采样。,细菌总数检测,将采样管在混匀器上振荡20s或用力振打80次，用无菌吸管吸取1.Oml待检样品接种于灭菌平皿，每一样本接种2个平皿，内加入己溶化的4548的营养琼脂15ml18ml，边倾注边摇匀，待琼脂凝固。置361温箱培养48h，计数菌落数。,卫生学标准,I、类区域工作人员：细菌总数5cfu/cm2，并未检出金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、铜绿假单孢菌为消毒合格。 类区域工作人员：细菌总数l0cfu/cm2，并未检出金色葡萄球菌、大肠杆菌为消毒合格。 类区域工作人员：细菌总数15cfu/cm2，并未检出金黄色葡萄球菌、大肠杆菌为消毒