放线菌筛选的一般方法摘要：放线菌是重要的抗生素产生菌，主要分布在土壤中（主要是链霉菌），其数量仅次于细菌。放线菌是革兰氏阳性细菌。因菌落呈放线状而的得名。常以孢子或菌丝状态存在，在自然界中分布很广，主要以孢子繁殖。由于土壤中的微生物是各种不同种类微生物的混合体，为了研究某种微生物，就必须把它们从这些混杂的微生物群体中分离出来，从而获得某一菌株的纯培养。关键词：放线菌 筛选 微生物1 放线菌的情况放线菌（Actinobacillus）是一类主要呈菌丝状生长和以孢子繁殖的陆生性较强大的原核生物。因在固体培养基上呈辐射状生长而得名。大多数有发达的分枝菌丝。菌丝纤细，宽度近于杆状细菌，约0.51微米。可分为：营养菌丝，又称基质菌丝，主要功能是吸收营养物质，有的可产生不同的色素，是菌种鉴定的重要依据；气生菌丝，叠生于营养菌丝上，又称二级菌丝。是一群革兰氏阳性、高(G+C)mol%含量(55%)的细菌。放线菌因菌落呈放线状而的得名。放线菌与人类的生产和生活关系极为密切，广泛应用的抗生素约70%是各种放线菌所产生。一些种类的放线菌还能产生各种酶制剂（蛋白酶、淀粉酶、和纤维素酶等）、维生素（B12）和有机酸等。弗兰克菌属（Frankia）为非豆科木本植物根瘤中有固氮能力的内共生菌。此外，放线菌还可用于甾体转化、烃类发酵、石油脱蜡和污水处理等方面。少数放线菌也会对人类构成危害，引起人和动植物病害。因此，放线菌与人类关系密切，在医药工业上有重要意义。放线菌在自然界分布广泛，主要以孢子或菌丝状态存在于土壤、空气和水中，尤其是含水量低、有机物丰富、呈中性或微碱性的土壤中数量最多。放线菌只是形态上的分类，属于细菌界放线菌门。土壤特有的泥腥味，主要是放线菌的代谢产物所致。它是一个原核生物类群，主要以孢子繁殖，其次是断裂生殖。与一般细菌一样，多为腐生，少数寄生。2 放线菌的培养基高氏一号合成培养基是培养放线菌的培养基。这种培养基是采用化学成分完全了解的纯试剂配制而成的培养基，高氏一号培养基：碳源为可溶性淀粉、氮源为KNO3、NaCl、K2HPO43H2O、MgSO47H2O作为无机盐，FeSO47H2O作为微生物的微量元素，提供铁离子等组成。高氏一号合成培养基需要K2HPO43H2O 0.125g，可溶性淀粉5g，硝酸钾0.25,MgSO47H2O 0.125g，FeSO47H2O 0.025g，氯化钠0.125g，琼脂5g，水250ml。配制时，先依次加入上述药品（除琼脂外）顺序溶解，加入无菌水至250ml，调节pH7.4，再加入琼脂不断搅拌震荡至溶化后，121灭菌20分钟。3 土壤中放线菌的分离 编号，分装 取6套无菌平皿，在皿底贴上标签，注明土壤稀释液的稀释度（10-3、10-4、10-5）。每个稀释度做两个培养皿。然后在每皿中倒入已溶化并冷凝至50左右的高氏一号培养基1520ml左右，待冷凝成平板。另取5支盛有9ml一只盛有10ml无菌水的试管，排列于试管架上，依次标明10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6。稀释倾注分离 称1g土样放入10ml无菌水试管中振荡10min，即10-1的土壤悬液，静置30s。用无菌吸管无菌操作取10-1浓度的土壤悬液1ml并加入编号10-2的无菌试管中，并吹吸吸管23次，吸时伸入管底，吹时离开水面，使其混合均匀。即为10-2浓度的土壤稀释液。依此类推，直到稀释至10-5的试管中（每个稀释度换1支无菌吸管）。4 倒平板分离培养于上述盛有不同稀释度菌液的培养皿中，倒入溶化后冷却至45左右的高氏培养基约1015ml，置水平位置，迅速旋动混匀，待凝固。（若融化的培养基温度太高，会产生太多的冷凝水，影响观察。）用1ml无菌吸管分别精确地吸取10-4、10-5、10-6的稀释菌液1ml，对号放入编好号的无菌培养皿中，每一浓度对应两个平板。用无菌涂布棒（从浓度小液开始）将加入平板培养基上的土壤稀释液在整个平板表面涂匀，涂完一个平板用酒精灯灭菌。5 培养接种完毕，将平皿和试管放入28恒温箱培养7天，观察平皿上放线菌（主要是链霉菌）菌落。6 菌种纯化倒平板 将加热融化的高氏一号合成培养基倒平板，并标号。平板划线 划线的方法很多，但无论哪种方法划线，其目的都是通过划线将样品在平板上进行稀释，使形成单个菌落。7 进一步鉴定用接种铲将平板上的菌苔连同培养基切下一小方块（宽2-3mm），菌面朝上放在载玻片上，另取一洁净载玻片置火焰上微热后，盖在菌苔上，轻轻按压，使培养物（气生菌丝、孢子丝和孢子）粘附（“印”）在载玻片的中央，将有印记的一面朝上，火焰固定，染色（1min），水洗，干燥，油镜观察。8 确定放线菌参考文献1周长林 微生物学 北京市海淀区：中国医药科技出版社，2004：1060082司美茹，薛泉宏等 放线菌分离培养基筛选及杂菌抑制方法研究 微生物学通报 2004, 02期:61-653高鹏，薛泉宏等 拮抗放线菌的筛选培养基与筛选方法研究 西北农林科技大学学报(自然科学版) 2005, 01期:59-634冯轶男，杨润清放线菌分离与筛选方法的研究进展 生物技术 2010, 第4期:95-975林雁冰，陆家贤等 地黄根圈土壤拮抗放线菌筛选、鉴定及发酵条件优化 植物保护学报2010, 03期:234-240