实验设计大纲实验名称：农药对肝肾功能及血清胆碱酯酶的影响课题来源：自选设计班级：09级临床本科六班设计人员：王xx设计日期：2011年6月14日 指导老师：陈玮一. 实验设计的目的意义：实验设计的目的意义，国内外研究现状，存在的问题，解决问题的思路。1. 目的与意义。在科技进步的今天，许多健康性问题成为主流话题。心理和精神的变态越演越烈，如喝农药自杀等。还有现代的许多农作物中农药的含量越来越多，而它对人体的健康有着很大的威胁。而我国是农药中毒高发的国家。究其原因主要是：生产工艺落后，保管不严、配制不当、任意滥用、操作不善、防护不良。制作动物模型，研究农药对人体重要器官的危害及其治疗对人健康有重要的意义。2. 国内外研究现状 自1863年Austin Flint首先报道晚期肝硬化患者可出现少尿等肾功能衰竭的表现后，1924年Heyd首次将肝功能不全患者在胆道梗阻手术后发生的急性肾功能衰竭称为“肝肾综合征”（hepatoren Msyndrone）到1987年意大利的Sassari召开的一次肝肾综合征国际会议上才订出了诊断标准，并且对HRS的概念内涵取得了较统一的认识，1996年国际腹水研究小组推荐了关于HRS的新定义，即“慢性肝病患者出现进展性肝功能衰竭和门脉高压时。以肾功能损伤。肾血流灌注减少和内源性血管活性系统异常为特征的一种综合征”。肝肾综合征是慢性肝病、晚期肝硬化门脉高压患者常见的并发症，约占10左右。它的特点是肾脏缺乏形态异常。肾小管功能正常。肾功能损害是功能性、潜在可恢复。其并非代表肝硬化患者的终末期。也并非提示肝功能衰竭程度的加重。故应对HRS发病原因、发病机制与诊断、治疗进行重新评价。 自1863年Austin Flint首先报道晚期肝硬化患者可出现少尿等肾功能衰竭的表现后，1924年Heyd首次将肝功能不全患者在胆道梗阻手术后发生的急性肾功能衰竭称为“肝肾综合征”（hepatoren Msyndrone）到1987年意大利的Sassari召开的一次肝肾综合征国际会议上才订出了诊断标准，并且对HRS的概念内涵取得了较统一的认识，1996年国际腹水研究小组推荐了关于HRS的新定义，即“慢性肝病患者出现进展性肝功能衰竭和门脉高压时。以肾功能损伤。肾血流灌注减少和内源性血管活性系统异常为特征的一种综合征”。肝肾综合征是慢性肝病、晚期肝硬化门脉高压患者常见的并发症，约占10左右。它的特点是肾脏缺乏形态异常。肾小管功能正常。肾功能损害是功能性、潜在可恢复。其并非代表肝硬化患者的终末期。也并非提示肝功能衰竭程度的加重。故应对HRS发病原因、发病机制与诊断、治疗进行重新评价。3. 存在的问题虽然有多种药物治疗农药中毒，那是没有最优最快的药物，在药物其作用之前，应该做的紧急抢救及相关的病症的确认，切忌误诊。用食农药后并且解救后的其他问题。4. 解决问题的思路复制动物模型，给药致使家兔出现肝肾功能的障碍，然后给以相应的解救药品，观察家兔各项体征。并且对胆碱酯酶的影响测定。最后得到结论，做出农药对肝肾功能及全血胆碱酯酶的影响结论。5. 参考文献1阮诗玮,郑弘义,杨爱国,王智,孙光,郑京,吴竟,洪江淮;慢性肾炎及中医证型与血中内皮素、一氧化氮关系探讨J;福建中医学院学报;1999年04期2石志芸,施赛珠,陈剑秋,李晓明,何婉婷,邓守贞;血瘀证患者血浆内皮素测定的临床意义J;辽宁中医杂志;1996年10期3胡克武,丁俊;肝肾阴虚型高脂血症治疗的临床分析J;辽宁中医杂志;1996年12期4刘晓秋,梁幼雅,贾晓林,唐惠琼,蔡文成;脾虚证患者唾液淀粉酶活性变化与一氧化氮相关性的初步探讨J;中药药理与临床;2002年04期5王元勋，袁静，张敏华，韩明向，李泽根;肺气虚证的实验研究血液流变学及血浆TXB_2、6-KetoPGF_1水平J;甘肃中医学院学报;1994年01期6石林阶,陈国林,陈昌华,罗团连,舒毅刚,李学文,陈泽奇,林源;肝血虚证、肝血虚兼脾气虚证患者血浆TXA_2、PGI_2水平的相关研究J;中国医药学报;1997年05期7蔡圣荣,方志斌,黄开泉,王元勋;肺气虚证大鼠血液流变性指标与内皮素、血栓素水平的相关性研究J;安徽中医学院学报;2003年05期8刘强;心气虚证患者血中ET、CGRP、NO和NOS含量变化J;山西中医学院学报;2004年02期9吾柏铭，潘宜智，洪小苏，刘励军，张莉丽，高岚，陈建昌;急性心肌梗塞患者血小板膜表面抗人活化血小板颗粒膜蛋白血浆凝血噁烷B_2、6酮前列腺素F_（1）的动态变化及其临床意义J;中国循环杂志;1995年01期10李君,徐锡鸿,戴关海,卢莺燕,李凫坚;肺气虚证大鼠模型内皮素含量变化的实验研究J;辽宁中医杂志;2000年05期（11刘红旭，黄丽娟，金玫，夏军，王玉明，王斌，金敬善，邓新荣;血瘀胸痹患者血浆内皮源性收缩舒张因子水平及治疗影响研究J;北京中医;1995年06期12赖世隆,王奇,丘梅清,梁伟雄,谭芬来,谢红,秦莉莉;血瘀证、气虚血瘀证患者血浆TXA_2、PGI_2水平与微循环观察及其相关性分析J;中华中医药杂志;1990年06期13汤健;心钠素(Cardionatrin)心脏产生的一种激素J;北京大学学报(医学版);1984年03期14张全贵;内皮素测定在心血管疾病中的意义J;重庆医学;1993年01期15原世麟,张福琴,李志超,陈金城;家兔实验性呼吸窘迫综合征时肺微栓、白细胞和心阻抗参数J;第四军医大学学报;1987年05期16王元勋，袁静，张敏华，韩明向，李泽根;肺气虚证的实验研究血液流变学及血浆TXB_2、6-KetoPGF_1水平J;甘肃中医学院学报;1994年01期17吴祥声,安乙敏;缩血管肽内皮素J;国际检验医学杂志;1993年05期18吴玉生,姜立萍,王占奎;内皮素、降钙素基因相关肽与急性脑梗塞辨证分型的关系J;贵阳中医学院学报;1998年03期19杨牧祥，李澎涛，方朝义，韩树芬，王占波，王生茂，曹刚;实验性SD大鼠“肺气虚证”血液流变学改变和免疫功能状态研究J;河北中医;1996年05期二. 实验设计方案（实验设计目标,拟解决的主要问题, 实验动物设计,实验专业设计，实验统计设计,实验方法设计，可行性分析,预期结果，实验设计工作时间安排）。（一） 实验设计目标 探讨误食农药后，对集体肝肾功能的影响，它的主要表现特征，给出相应的解救药品后家兔各项体征的变化，设计不同药量的模型作对比。学习血清肝肾功能及全血胆碱酯酶活性的测定。（二） 拟解决的关键问题 观察有机磷酯农药中毒后的症状和特征。观察阿托品和碘解磷定对急性有机农药中毒的解救效果，并且比较两中药物的解救原理和作用特点。（三） 实验设计1. 实验专业设计选用家兔作为实验动物，给予一定量的农药后再给予阿托品和碘解磷定，观察对实验性农药治疗作用，观察家兔的呼吸频率、心率、瞳孔大小、唾液分泌、大小便、肌紧张、肝功能、肾功能等实验指标。2. 实验动物设计（遗传背景，微生物质量控制，育种繁殖，饲养管理，动物模型，实验动物学技术）2.1 实验动物的选择我们选用家兔作为实验动物，有以下几点理由：1）、家兔易得到，容易饲养，在科研工作中被广泛利用。2）、家兔肝肾相对较大，易于得到样品，能在称重过程中减少实验误差。3. 实验统计设计实验统计设计中应始终贯彻随机、对照、重复三大原则。（1）随机：选正常成年健康重相近的家兔2只，雌雄兼用。（2）对照：本组实验做了空白对照和实验对照，在前面的专业设计里已经提及。（3）统计数据收集：本实验搜集计量资料，初步确定对各组实验数据的比较分为实验值和基础值比较。（4）统计数据分析：酶活力值=（A1+A2-A1-A样）/(A3-A1)酶活力百分比=（酶活力值（给药后或解救后）/酶活力值（给药前）4. 实验方法设计4.1 实验技术路线全血胆碱酯酶活性测定实验操作步骤试剂（ml）磷4.2 实验技术方法1、 取家免两只，称重并编号。观察家免的活动情况，测量并记录正常指标，包括呼吸频率、心率、大小便、唾液分泌、瞳孔大小、肌肉紧张及有无肌震颤情况。2、 从1号家免耳中动脉取血约0.5ml，分别加入2号试管和4号试管各0.15ml,充分震摇，混合均匀，其中2号试管为对照管，4号试管用以测定正常家免全血胆碱酯酶活性。（取血法：先轻弹免耳，使血管充分扩张，耳中动脉用手术刀片割破约2mm伤口，让血液自流，以刻度吸管吸血，其中一份血采用肝素法抗凝，另一份不抗凝。）3、 1号家免从耳缘静脉注射0.1%阿托品1mg/kg,密切观察上述指标有何改变。当毒覃碱样症状消失时（约10min）,记录作用时间，按上法取血0.15ml加入6号试管，用以测定家免阿托品解救后的胆碱酯酶活性。4、 2号家免按1号家免同样方法取空白血测定中毒前胆碱酯酶洗发敌百虫中毒后，以2.5%PAM50mg/kg代替阿托品进行解救，两样按上法采取中毒后和解救后血样，测定各血样胆碱酯酶活性。5、 将实验中甩采集的非抗凝血的血样离心取血清用于肝肾功能的检测（采用半自动生化仪）。6、 将抗凝血的血样按上表实验操作步骤测定全血胆碱酯酶活性，比较1号和2号家免解救后的症状、体重变化以及及胆碱酯酶活性变化有何不同。（四） 可行性分析1、家兔易得到，容易侍养，在科研工作中被广泛利用。2、其中使用的药品比较常用，市场上可以买到，价格不贵。3、手术器材和设备均为实验室常用，手术方法我们也相对熟练。（五） 预期效果 农药中毒后：瞳孔扩大、大小便失禁、肌震颤、胆碱酯酶活力下降、肝肾功能障碍等。注射阿托品或者碘解磷定红后症状缓解。（六） 实验设计工作时间安排在器材完善，条件适宜的情况下，本实验可在一天内完成。三. 完成实验的条件（一） 仪器设备情况注射器（1ml,2ml,5ml,20ml各1 支），6号针头，瞳孔测量尺，烧杯，滤纸，漏斗，试管，试管架，移液枪，吸头，手术刀片，干棉球，婴儿磅秤，听诊器，秒表，免固定箱，恒温水浴箱，分光光度计。.（二） 实验动物情况健康，成年，雌雄兼用的家免（三） 药品试剂来源市场购买和实验室提供