2019/7/10,仪器分析教程,第10章 高效液相色谱法,10.2 概述,High Performance Liquid Chromatography （HPLC),10.2.1 高压输液系统,10.2.2 进样系统,10.2.3 分离系统,10.2.4 检测系统,2019/7/10,10.2 高效液相色谱仪,液相色谱仪器,2019/7/10,10.2 高效液相色谱仪,液相色谱仪器,2019/7/10,10.2 高效液相色谱仪,液相色谱仪器,2019/7/10,10.2 高效液相色谱仪,液相色谱仪器,2019/7/10,10.2 高效液相色谱仪,2019/7/10,10.2 高效液相色谱仪,高效液相色谱仪主要由高压输液系统、进样系统、分离系统、检测和记录系统四大部分组成。,HPLC流程示意图,2019/7/10,10.2 高效液相色谱仪,10.2.1 高压输液泵 HPLC主要部件之一，为了获得高柱效而使用粒度很小的固定相（10m），液体的流动相高速通过时，将产生很高的压力，因此高压、高速是高效液相色谱的特点之一。 高压输液泵主要由贮液器、高压泵、过滤器、梯度洗脱装置等组成。,2019/7/10,10.2 高效液相色谱仪,10.2.1 高压输液泵 （1）贮液器,一般由玻璃、不锈钢或聚四氟乙烯制成，容量为12L。 贮液器应带有脱气装置。,2019/7/10,10.2 高效液相色谱仪,10.2.1 高压输液泵 （2）高压泵,一般要求泵的输出压力高达1550Mpa。,恒压泵：输出的压力恒定，而流量则随色谱系统阻力的变化而变化，不适于梯度洗脱， 恒流泵：在一定的操作条件下，输出的流量恒定，柱阻力或流动相黏度改变只引起柱前压力的变化，特别适合梯度洗脱。,2019/7/10,10.2 高效液相色谱仪,外梯度: 利用两台高压输液泵，将两种不同极性的溶剂按一定的比例送入梯度混合室，混合后进入色谱柱。,内梯度: 一台高压泵, 通过比例调节阀,将两种或多种不同极性的溶剂按一定的比例抽入高压泵中混合。,10.2.1 高压输液泵 （3）梯度洗脱装置,2019/7/10,10.2 高效液相色谱仪,10.2.1 高压输液泵,梯度洗脱装置示意图,2019/7/10,10.2 高效液相色谱仪,10.2.2 进样系统,（1）注射器进样,2019/7/10,10.2 高效液相色谱仪,10.2.2 进样系统,流路中为高压力工作状态，通常使用耐高压的六通阀进样装置， 其结构如图所示：,（2）六通阀进样,2019/7/10,10.2 高效液相色谱仪,10.2.2 进样系统,（3）自动进样器,可自动进样、适合大量 样品的分析、实现自动 化。,2019/7/10,10.2 高效液相色谱仪,10.2.3 分离系统,柱体为直型不锈钢管，内径16 mm，柱长540 cm。发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。,2019/7/10,10.2 高效液相色谱仪,10.2.4 检测系统,1.紫外检测器,原理：基于待测组分对特定波长紫外光的选择性吸收，组分浓度与吸光度的关系服从比耳定律。,特点：灵敏度高；线形范围高； 流通池很小（容积 8L）； 对流动相的流速和温度变化不敏 感；波长可选，易于操作；可用 于梯度洗脱。应用最广，对大部 分有机化合物有响应。,2019/7/10,10.2 高效液相色谱仪,紫外检测器的重要进展： 光电二极管阵列检测器：1024个二极管阵列，各检测特定波长，计算机快速处理，三维立体谱图，如图所示。,2019/7/10,10.2 高效液相色谱仪,10.2.4 检测系统,2.荧光检测器,高灵敏度、高选择性； 对多环芳烃，维生素B、黄曲霉素、卟啉类化合物、农药、药物、氨基酸、甾类化合物等有响应；,2019/7/10,10.2 高效液相色谱仪,10.2.4 检测系统,3.电导检测器,原理：基于被测组分的导电能力的不同，它对温度和载液流速较敏感，是离子交换色谱中使用最广泛的检测器。,2019/7/10,10.2 高效液相色谱仪,10.2.4 检测系统,4.示差折光检测器,原理：基于被测组分和流动相的折光率的不同， 特点：该检测器为通用型检测器（每种物质具有不同的折光指数） ，是除紫外检测器之外应用最多的检测器。其灵敏度低、对温度敏感、不能用于梯度洗脱 类型：偏转式、反射式和干涉型三种。,2019/7/10,10.2 高效液相色谱仪,10.2.4 检测系统,4.示差折光检测器,类型：偏转式、反射式和干涉型三种。,2019/7/10,Thanks,