第八章 维生素类药物的分析,（一）结构,第八章 维生素类药物的分析,第一节 维生素A的分析,一、结构与性质,-H VitA醇 -COCH3 VitA醋酸酯 -COC15H31 VitA棕榈酸酯,R :,（二）性质 1. 形状：维生素A为淡黄色油状溶液或晶体。 2. 易氧化变质：维生素A中有多个不饱和键，易被空气中氧或氧化剂氧化，易被紫外光裂解。在受热或有金属离子存在时，更易氧化变质，生成无生物活性的环氧化合物、维生素A醛或维生素A酸。 3. 与三氯化锑呈色：维生素A在三氯甲烷中能与三氯化锑试剂作用，产生不稳定的蓝色。 4. 紫外吸收特性：维生素A的环己烷或乙醇溶液在325328nm的范围内有最大吸收，可用于鉴别和含量测定。,第八章 维生素类药物的分析,第一节 维生素A的分析,一、结构与性质,（一）三氯化锑反应（Carr-Price反应） 维生素A在饱和三氯甲烷中能与三氯化锑反应，形成不稳定的蓝色碳正离子，渐变成紫红色。,第八章 维生素类药物的分析,第一节 维生素A的分析,二、鉴别试验,反应需在无水、无醇条件下进行。,（二）紫外分光光度法 维生素A分子中含有5个共轭双键，其无水乙醇溶液在波长326nm处有最大吸收峰。当在盐酸催化下加热，则发生脱水反应而生成脱水维生素A，其比维生素A多一个共轭双键，故在340390nm波长间出现3个最大吸收峰。,第八章 维生素类药物的分析,第一节 维生素A的分析,二、鉴别试验,（三）薄层色谱法 鉴别方法 取供试品和对照品适量，加环己烷（或氯仿）分别制成每1ml中约含1.55IU浓度的溶液，各取2l点样于同一硅胶G薄层板上，不必挥散溶剂，立即用环己烷-乙醚（8020）为流动相展开。取出薄层板后，置空气中挥干，喷以三氯化锑溶液，比较供试品和对照品溶液所显蓝色斑点位置，即可鉴别。维生素A醇及其醋酸酯、棕榈酸酯均显蓝绿色，其Rf值分别为0.1、0.45和0.7。,第八章 维生素类药物的分析,第一节 维生素A的分析,二、鉴别试验,（一）三氯化锑比色法 利用维生素A与三氯化锑的无水三氯甲烷溶液作用，产生不稳定的蓝色，在波长618620nm处有最大吸收，其方法采用标准工作曲线法。 测定方法 取维生素A对照品，制成系列浓度的三氯甲烷标准溶液，分别加入一定量的三氯化锑三氯甲烷溶液，在510s内，于波长620nm处测定吸光度，绘制标准曲线。按同法测定供试品溶液的吸光度，根据标准工作曲线计算供试品含量。,第八章 维生素类药物的分析,第一节 维生素A的分析,三、含量测定,（二）紫外分光光度法（三点校正法） 1. 测定原理 维生素A在波长325328nm范围内具有最大吸收，可用于含量测定。 由于维生素A原料中常混有其他杂质，且维生素A制剂中常含稀释用油，以致在维生素A的最大吸收波长处测得的吸光度并不是维生素A所独有。为了得到准确的测定结果，消除非维生素A物质的无关吸收所引起的误差，故采用“三点校正法”测定。,第八章 维生素类药物的分析,第一节 维生素A的分析,三、含量测定,（二）紫外分光光度法（三点校正法） 2. 三点校正法的条件 （1）供试品中干扰杂质引起的吸收在波长310340nm的范围内几乎呈一条直线，且随波长的增大吸光度变小。 （2）物质对光吸收呈加和性的原理。即在供试品溶液的吸收曲线上，各波长处的吸光度是维生素A与干扰杂质吸光度的代数和，因而吸收曲线也是二者吸收的叠加。,第八章 维生素类药物的分析,第一节 维生素A的分析,三、含量测定,（二）紫外分光光度法（三点校正法） 3. 波长选择 三点波长的选择原则为一点选择在维生素A的最大吸收波长处（即1）；其他两点选择在1的两侧各选一点（2和3）。 （1）第一法（等波长差法）：使31 =12。 （2）第二法（等吸收比法）：使A2 =A3=67A1。,第八章 维生素类药物的分析,第一节 维生素A的分析,三、含量测定,（二）紫外分光光度法（三点校正法） 4. 杂质的吸收 （1）维生素A2和维生素A3：维生素A2在345350nm波长范围内有吸收。 （2）维生素A的氧化产物：环氧化物、维生素A醛和维生素A酸。 （3）维生素A在光照条件下产生的无活性的聚合物鲸醇。 （4）维生素A的异构体和合成过程中产生的中间体等,第八章 维生素类药物的分析,第一节 维生素A的分析,三、含量测定,（二）紫外分光光度法（三点校正法） 5. 测定方法 （1）第一法：适用于纯度高的维生素A醋酸酯 1）操作方法：取供试品适量，精密称定，加环己烷制成每1ml中含915IU的溶液。然后在波长300、316、328、340和360nm处分别测定吸光度，确定最大吸收波长（应为328nm）。计算各波长下的吸光度与328nm波长下的吸光度比值，并与表中规定的理论值比较。,第八章 维生素类药物的分析,第一节 维生素A的分析,三、含量测定,（二）紫外分光光度法（三点校正法） 5. 测定方法 （1）第一法：适用于纯度高的维生素A醋酸酯,第八章 维生素类药物的分析,第一节 维生素A的分析,三、含量测定,（二）紫外分光光度法（三点校正法） 5. 测定方法 （1）第一法：适用于纯度高的维生素A醋酸酯 2）计算 如果最大吸收波长在326329nm之间，且所测得各波长吸光度比值不超过表中规定值的0.02时，可用下式计算含量：,第八章 维生素类药物的分析,第一节 维生素A的分析,三、含量测定,（二）紫外分光光度法（三点校正法） 5. 测定方法 （1）第一法：适用于纯度高的维生素A醋酸酯 2）计算 如果最大吸收波长在326329nm之间，且所测得各波长吸光度比值超过表中规定值的0.02时，应用下式求出校正后的吸光度，然后再计算含量：,第八章 维生素类药物的分析,第一节 维生素A的分析,三、含量测定,（二）紫外分光光度法（三点校正法） 5. 测定方法 （1）第一法：适用于纯度高的维生素A醋酸酯 2）计算 若校正吸光度与328nm实测吸光度相差 不超过3%，则仍用A328实测计算含量； 若校正吸光度与328nm实测吸光度相差 在15%至3%之间，则用A328校正计算含量；,第八章 维生素类药物的分析,第一节 维生素A的分析,三、含量测定,（二）紫外分光光度法（三点校正法） 5. 测定方法 （1）第一法：适用于纯度高的维生素A醋酸酯 2）计算 若校正吸光度超过328nm实测吸光度 的15%或+3%，或者最大吸收波长不在326329nm之间，则供试品应按第二法测定。,第八章 维生素类药物的分析,第一节 维生素A的分析,三、含量测定,（二）紫外分光光度法（三点校正法） 5. 测定方法 （2）第二法（皂化法）：适用于维生素A醇 1）测定方法：精密称取一定量供试品（约相当于维生素A总量500IU，重量不多于2g），加氢氧化钾乙醇溶液后煮沸回流，得到的皂化液再经乙醚提取、洗涤、滤过、浓缩和干燥等处理，最后用异丙醇溶解残渣并稀释成每1ml中含维生素A为915IU的溶液，在波长300、310、325、334nm处测定吸光度，并确定最大吸收波长。,第八章 维生素类药物的分析,第一节 维生素A的分析,三、含量测定,（二）紫外分光光度法（三点校正法） 5. 测定方法 （2）第二法（皂化法）：适用于维生素A醇 2）计算： 如果最大吸收波长在323327nm之间，且A300/A325的比值小于或等于0.73，按下式计算校正吸光度，并与A325实测比较。,第八章 维生素类药物的分析,第一节 维生素A的分析,三、含量测定,（二）紫外分光光度法（三点校正法） 5. 测定方法 （2）第二法（皂化法）：适用于维生素A醇 2）计算： 若 的值在3%以内，仍以A325实测计算含量：,第八章 维生素类药物的分析,第一节 维生素A的分析,三、含量测定,（二）紫外分光光度法（三点校正法） 5. 测定方法 （2）第二法（皂化法）：适用于维生素A醇 2）计算： 如果测得最大吸收波长不在323327nm之间或A300/A325的比值大于0.73，则表示供试品溶液中杂质含量过高，应采用色谱法将未皂化部分纯化后再进行测定。,第八章 维生素类药物的分析,第一节 维生素A的分析,三、含量测定,（二）紫外分光光度法（三点校正法） 6. 应用示例：维生素AD胶丸中维生素A的测定方法如下：精密称取维生素AD胶丸装量差异项下的内容物0.1287 g（每丸内容物的平均装量0.07985 g，标示量每丸含维生素A 10000单位），置l0ml烧杯中，加环己烷溶解并定量转移至50ml容量瓶中，用环己烷稀释至刻度，摇匀；精密量取2ml，置另一50ml容量瓶中，用环己烷稀释至刻度，摇匀。以环己烷为空白，测得最大吸收波长为328nm，并分别于波长300、316、328、340和360nm处测得吸光度如下，计算胶丸中维生素A占标示量的百分含量?,第八章 维生素类药物的分析,第一节 维生素A的分析,三、含量测定,（二）紫外分光光度法（三点校正法） 6. 应用示例：,第八章 维生素类药物的分析,第一节 维生素A的分析,三、含量测定,（三）高效液相色谱法 采用RP-HPLC法（反相高效液相色谱法）同时测定人血清中维生素A，根据不同病理生理状态下人血清中维生素A的浓度，探索与某些疾病的关系，为临床治疗学与营养学研究提供依据。,第八章 维生素类药物的分析,第一节 维生素A的分析,三、含量测定,（一）结构 （二）性质 1. 溶解性：维生素B1为白色结晶或结晶性粉末，有微弱的特臭，味苦。 2. 显酸性：本品的水溶液显酸性，且在酸性溶液中较稳定。,第八章 维生素类药物的分析,第二节 维生素B1分析,一、结构及性质,（二）性质 3. 碱性中与氧化剂反应：本品分子结构中噻唑环在碱性介质中可开环，再与嘧啶环上的氨基环合，经铁氰化钾等氧化剂氧化成具有荧光的硫色素。 4. 紫外吸收：本品的12.5gml-1盐酸溶液（91000），在波长246nm处有最大吸光度。 5. 与生物碱沉淀试剂反应：分子中含有两个杂环，故可与某些生物碱沉淀试剂反应生成组成恒定的沉淀。 6. 氯化物特性：维生素B1为盐酸盐，故本品的水溶液显氯化物的鉴别反应。,第八章 维生素类药物的分析,第二节 维生素B1分析,一、结构及性质,（一）硫色素反应 维生素B1在碱性溶液中，可被铁氰化钾氧化生成硫色素。硫色素溶于正丁醇（或异丁醇等）中，显蓝色荧光。,第八章 维生素类药物的分析,第二节 维生素B1分析,二、鉴别试验,（二）生物碱沉淀试剂反应 本品可与多种生物碱沉淀试剂反应，生成不同颜色的沉淀。 1. 维生素B1与碘化汞钾生成淡黄色沉淀 BH2HgI4 2. 维生素B1与碘生成红色沉淀 BHII2。 3. 维生素B1与硅钨酸生成白色沉淀 B2SiO2(OH)212WO34H2O。,第八章 维生素类药物的分析,第二节 维生素B1分析,二、鉴别试验,（三）氯化物反应 本品的水溶液显氯化物的鉴别反应。 （四）硝酸铅反应 维生素B1与NaOH共热，分解产生硫化钠，可与硝酸铅反应生成黑色沉淀，可供鉴别,第八章 维生素类药物的分析,第二节 维生素B1分析,二、鉴别试验,（一）非水溶液滴定法 维生素B1分子中含有两个碱性的已成盐的伯胺和季铵基团，在非水溶液中（在醋酸汞存在下），均可与高氯酸作用。根据消耗高氯酸的量即可计算维生素B1的含量。 测定方法：取本品约0.15g，精密称定，置100ml具塞锥形瓶中，