实 验 一 蛋 白 质 两 性 电 离 与 等 电 点,【教学目标】 1、独立操作，一丝不苟地作实验。 2、仔细观察不同阶段试剂颜色变化及沉淀的出现和消失，通过现象观察能分析蛋白质两性电离的性质，正确填写实验报告。 3、通过往五支不同pH值溶液的试管内加入酪蛋白，观察沉淀出现的情况，确定其等电点。 4、共同讨论测定等电点的原理。,一、蛋白质的两性电离,多肽链中氨基酸残基中有可解离基团，如：末端-COO-、-NH3+，酸性氨基酸侧链- COO- ，Lys的-NH3+，Arg的胍基，His的咪唑基。,*蛋白质的等电点(pI) 当蛋白质溶液处于兼性离子，净电荷为零，此时溶液的pH称为蛋白质的等电点。,各种蛋白质的氨基酸组成不同，解离情况不同，等电点不同。多数接近5.0。,蛋白质的性质之一：两性电离与等电点,【实验原理】 蛋白质分子是两性电解质。蛋白质在溶液的pH值为等电点时游离为两性离子，溶解度最低，容易沉淀析出。若在大于或小于等电点的溶液中，因蛋白质分子带有同种电荷而相互排斥，不易产生沉淀。,【试剂】 1、0.5酪蛋白醋酸钠 2、0.01溴甲酚绿指示剂 变色范围是pH3.85.4。指示剂的酸色型为黄色，碱色型为蓝色。 3、0.02molL盐酸溶液 4、0.02molL氢氧化钠溶液 5、1.00molL乙酸溶液 6、0.10molL乙酸溶液 7、0.01molL乙酸溶液,【操作】,1、蛋白质的两性电离 （1）取一支试管，加入0.5酪蛋白醋酸钠溶液20滴和0.01溴甲酚绿指示剂2滴，摇匀。观察溶液颜色，记录，并分析原因。 （2）用细滴管缓慢加入0.02mol/L盐酸溶液，、边滴边摇，直至有明显的大量沉淀发生，此时溶液的pH值接近酪蛋白的等电点。观察溶液颜色的变化，记录，分析原因。 （3）继续滴入0.02molL盐酸溶液，观察沉淀和溶液颜色的变化，记录，分析原因。 （4）再滴入0.02molL氢氧化钠溶液进行中和，观察是否出现沉淀，记录，解释原因。当继续滴入0.02molL氢氧化钠溶液时，观察沉淀和溶液颜色的变化。解释其原因。作好记录。,2、酪蛋白等电点的测定 （1）取5支试管，编号后按下表的顺序准确地加入各种试剂，然后混合均匀(每管加入酪蛋白醋酸钠溶液后，须立即摇匀该管)。,(2)静置约20 min，观察每支试管中溶液的混浊度，以-，+，+，+，+符号表示沉淀的多少，将结果记录于上表中。,（3）该实验要求各种试剂的浓度和加入量必须相当准确。除了需要精心配制试剂以外，实验中应严格按照定量分析的操作进行。 思考题 根据实验观察结果，指出哪一支试管的pH是酪蛋白的等电点？在等电点时蛋白质的溶解度为什么最低？请结合你的实验结果和蛋白质的胶体性质加以说明。,