1升降散治疗内毒素发热的实验研究【摘要】目的研究升降散对内毒素发热的影响。方法采用大肠杆菌内毒素复制家兔毒素发热模型，设立正常对照组、模型组、白虎组、布络芬组，升降组，观察各组症状及体温变化，白细胞介素-8（IL-8） ，肿瘤坏死因子-（TNF-）等指标变化。结果升降组症状表现较轻，降温效果平稳；升降组、白虎组、布络芬组家兔的血清 IL-8 和 TNF- 含量较模型组显著降低（P0.050.01） 。结论升降散对内毒素发热具有良好的治疗作用。【关键词】升降散内毒素发热实验研究升降散一方，出自清代温病学家杨栗山的伤寒瘟疫条辨 1：“瘟病总计十五方，而升降散，其总方也，轻重皆可酌用” 。现代药理研究认为2：僵蚕对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌等有一定抑制作用；蝉蜕有明显抗过敏作用；姜黄有抗炎、利胆、护肝、降血脂、抗血凝和抑制血小板聚集的作用；大黄药理作用广泛，对病原微生物有抗菌、抗真菌、抗病毒等作用，还有抗炎止血、降血脂血糖作用。表明该方有抗炎、抗病毒、调节免疫等作用，对炎症的治疗有一定的意义。近年来其抗炎机理已经成为温病界关注研究的焦点。笔者在临床上运用有较好的退热效果。因此，本研究通过大肠杆菌内毒素造模，设立对照组以观察该方对发热的影响及对 IL-8 和 TNF- 水平的影响。1 材料与仪器1.1 动物健康家兔共 40 只，体重 1.82.2kg，基础肛温（39.00.4）（38.739.6，因本实验时间正值酷暑，所以家兔肛温在正常范围内偏高） ，雌雄各半（雌兔未孕） ，由广西中医学院实验动物中心提供。1.2 试剂及试剂盒内毒素（由恒因生物有限公司提供） ，用无菌生理盐水配成 15g/ml 溶液，4冰箱冷藏，用前置 40温水温浴 20min3 。IL-8 和 TNF- 酶免试剂盒（由深圳晶美生物工程公司进口批号：20060218 和 20060205） 。1.3 仪器MK3 型号 IL-8 和 TNF- 酶标仪（热电上海有限公司） ，CELLTAC 型号白细胞计数仪（日本 NIHONKOHDEN 公司） ，Biofuqe.stratos 型高速液晶离心机（德国） ，DT 系列电子天平（美国双杰兄弟集团有限公司） ，715 型半导体数字肛温计（上海医用仪器厂） ，XE-2100 全自动血液分析仪（Sysmex 公司） 。1.4 药物制备2白虎汤：石膏 30g，粳米 15g，知母 15g，甘草 9g，水煎浓缩至每毫升含生药 1g。升降散：僵蚕 9g，蝉衣 6g，姜黄 6g，大黄 6g，水煎浓缩至每毫升含生药 1g。饮片均购自广西中医学院第一附属医院中药房。布络芬缓释胶囊（每粒300mg，批号：060101） ，300mg 稀释于 150mg 蒸馏水中制成浓度 2mg/ml 的溶液，购自广西中医学院第一附属医院西药房。中药煎剂和布络芬稀释液分别经过高压灭菌后贮于置 4冰箱内备用，用前置 30温水温浴 20min。2 方法2.1 动物分组与造模健康家兔共 40 只，随机分为 5 组：正常对照组、模型组、布络芬组、白虎组、升降组，每组 8 只，每笼 2 只分开饲养。实验用兔实验前 1 周抽取血液，经检测比较后筛选出 5 组无差异性动物方可进行造模；并 1 次/d 测直肠肛温，连续 7d，以平均值作为基础肛温4 。抽血 1 周后，除正常对照组外，余组均在室温条件，动物自然清醒的状态下，由家兔的耳缘静脉注入大肠杆菌内毒素液每次 1ml/kg3 （攻毒） ，正常对照组则注入等剂量无菌生理盐水 1 次，全部过程均无菌操作。2.2 给药方法实验动物与人临床用药换算按文献5进行换算。白虎组灌胃药物10ml/kg；升降组灌胃 5ml/kg；布络芬组灌胃 14ml/kg；模型组、正常对照组灌胃生理盐水 15ml/kg，在攻毒前 2h 和攻毒后立即，两次灌服完。2.3 观察指标平均发热曲线；白细胞及中性粒细胞含量观察；血清 IL-8 和 TNF-含量观察。体温观察采用电子肛温计测量动物直肠温度，每 30min 记录 1 次，白细胞及中性粒细胞含量的测定，于实验造模 3h 后由清醒家兔的耳缘静脉用 2ml注射器连接 5 号针头采血 1ml，置于普通试管中，用 XE-2100 全自动血液分析仪测量；血清 IL-8 和 TNF- 的测量，也于实验造模 3h 后由清醒家兔的耳缘静脉用 2ml 注射器连接 5 号针头采血 1ml，置于普通试管中，4，3000r/min，离心15min，取上清液按 IL-8 和 TNF- 酶免试剂盒说明严格操作。3 结果3.1 对平均发热曲线的影响见图 1。模型组、治疗组在注射大肠杆菌内毒素后随即出现发热。每隔 30min 测肛温 1 次。模型组高热持续 2h，然后开始下降。在造模后 30min 白虎组肛温较其他两组升高快，在 1h 时达到最高值，然后开始下降，上升和下降幅度都比较大。布络芬组在造模后 30min 达到最高值，然后平稳降温。升降组降温效果好，布络芬组次之，白虎组第 3。升降组在攻毒 1h 后肛温达到最高值，然后平稳降温。治疗组在造模 3h 后肛温降至正常范围。模型组肛温仍未回到正常值。33.2 白细胞及中性粒细胞含量观察结果见表 1。实验结果显示，攻毒 3h 后，模型组白细胞、中性粒细胞均高于正常对照组，经统计学处理差异极显著（P0.01） 。布络芬组、白虎组及升降组的白细胞、中性粒细胞模型组均有下降，与正常对照组比较差异无统计学意义（P0.05） 。布络芬组效果最好，白虎组次之，升降组第 3。3.3 血清 IL-8 和 TNF- 含量观察结果见表 2。实验结果显示，模型组的血清 IL-8 和 TNF- 含量显著增加，经统计学处理差异极显著（P0.01） 。治疗组各组含量均有降低，与正常对照组比较差异无统计学意义（P0.05） 。且升降组的疗效最好，白虎组次之，布络芬组第 3。表 1 各组家兔造模后 3h 白细胞、中性粒细胞结果比较（略）表 2 各组动物血清 IL-8 和 TNF- 含量比较（略）4 讨论升降散作为温病的“总方” ，在临床广泛运用，主要用于瘟疫、温病等急性传染病或感染性疾病的治疗。由本实验可观察到该方能明显降低内毒素所致家兔的肛温和白细胞、中性粒细胞的含量，以及抑制血清 IL-8 和 TNF- 的水平，表明升降散对急性炎症的促炎因子有明显的拮抗作用。内毒素可以使人体和动物发热，产生炎症反应，作用于血液和组织中的单核细胞、巨噬细胞，使分泌 TNF-，IL-1，IL-8 等生物学介质，IL-8 和 TNF-同为促炎因子，在炎症早期起到积极的作用，但随着促炎因子对机体组织的过度分泌，这些促炎因子可以复制全身炎症表现并导致器官损害，而拮抗促炎细胞因子则可以对机体组织提供保护。白细胞是反映机体抗御能力和感染程度的依据，中性粒细胞具有吞噬功能、释放酶和趋化性物质，在炎症反应中具有重要作用。升降散可以降低白细胞和中性粒细胞的含量，可见其具有抗炎治疗作用。至于该方的具体抗炎机制，以及对其他炎症介质的影响有待于进一步研究。【参考文献】1杨栗山.伤寒瘟疫条辨M.北京：中国中医药出版社，2002:126.2张佳扬.彭胜权教授运用升降散的临床经验J.新中医,2000,32(1):5.3戴春福.温病气分证血淤病理变化的初步研究J.中国中医药科技,1997,4(3):137.4孙敬方.实验动物方法学M.北京:人民卫生出版社,2002:48.5陈奇.中药药理研究方法学M.北京:人民卫生出版社,1993:1103.