1头顶一棵珠对实验性脑缺血的保护作用【摘要】目的研究头顶一棵珠对脑缺血的保护作用。方法小鼠断头形成急性脑缺血模型观察断头后张口喘气的时间；结扎大鼠双侧颈总动脉形成缺血模型,观察头顶一棵珠对大鼠脑含水量的影响；利用结扎大鼠双侧颈总动脉形成缺血再灌注模型,观察对脑含水量、脑组织 ATP 酶的活性、LPO 含量的影响。结果头顶一棵珠明显延长小鼠断头后张口喘气时间，减少脑含水量，并可有效降低脑毛细血管通透性，明显提高脑组织 ATP 酶活性,减少过氧化脂质 LPO 的生成。结论头顶一棵珠对实验性脑缺血具有明显保护作用。【关键词】头顶一棵珠；小鼠急性脑缺血；脑缺血再灌注损伤头顶一颗珠系百合科延龄草属植物头顶一颗珠 T.tschnoskiiMaxim.的干燥根状茎及根,分布在湖北的神农架、恩施自治州、郧阳，四川中南部、甘肃东南部、云南北部山区1 。其味甘性温,有小毒,有止血、解毒、接骨续筋等功效,主治头痛眩晕、高血压病、神经衰弱、脑震荡后遗症、跌打损伤、疔疮肿毒等2 。中医临床应用较广,且疗效显著。但现代药效学研究报道较少,其对脑血管疾病治疗作用的药理学研究目前鲜见报道。我们通过该药对脑缺血大、小鼠的影响,观察其用于治疗缺血性脑血管疾病的可行性。1 材料与仪器1.1 药品与试剂试药头顶一颗珠根状茎及根由我院中草药标本中心提供;头顶一颗珠根状茎及根醇提液:取头顶一颗珠根状茎及根粗粉,乙醇回流提取 3 次,除去乙醇以后制成 1gml-1 的醇提取液,复方丹参注射液（上海第九制药厂,批号 991213）;伊文思蓝系中国医药公司北京采购供应站提供,批号 971123;甲酰胺系上海化学试剂采购供应站经销,批号 941205；ATP 酶活性测定试剂盒(由四川省迈克科技有限责任公司提供,批号:1104091)。1.2 仪器与动物 721 分光光度计系上海第三分析仪器厂产品;另有恒温培养箱、电热烤箱等。Wistar 大鼠、昆明种小鼠均由由华中科技大学同济医学院实验动物中心提供。2 方法与结果2.1 头顶一棵珠对实验性脑缺血大鼠的作用 Wistar 大鼠,雌雄各半,体质量(29348)g,随机分 5 组,有假手术组、模型组、头顶一棵珠低剂量（0.5g/kg）组和高剂量（1g/kg）组及复方丹参 10g/kg 组。ig 给药,1 次/d,共给药 7d,其中假手术组和模型组 ig 同体积自来水。末次药后 1h,用乌拉坦 1g/kgip 麻醉,分离出双侧颈总动脉,股静脉注射 5%伊文思蓝 50mg/kg,5min 后结扎模型组和各给药组大鼠的双侧颈总动脉,假手术组大鼠不结扎,3h 后断头取脑称重,浸泡于 5ml 甲酰胺溶液中,45温育 48h,期间定时振摇,然后取上清液,并加入 1.5ml 氯仿溶液,混匀离心,吸取上清液,于 620nm 处比色,根据标准曲线计算出伊文思蓝的含量。脑2组织水含量的测定3参照 Hallenbeck 法,切取大脑前极到视交叉处的脑片,分别称量右脑片,称湿重;105烘干至恒重,即干重,分别计算脑指数(g 脑/100g 体质量)和脑含水量。按下列公式计算脑含水量,脑含水量(%)=脑湿重(g)-脑干重(g)/脑湿重(g)100%。统计分析数据均以表示,采用方差分析和检验(余下相同)。结果见表 1。表 1 头顶一棵珠对实验性脑缺血大鼠的作用（略）表 1 可见,缺血模型组大鼠脑内伊文思蓝含量、脑指数及脑含水量均非常显著地高于假手术组大鼠(P0.01)。头顶一棵珠 1g/kg 则可明显减少脑内伊文思蓝含量、脑指数及脑含水量(P0.05),头顶一棵珠 0.5g/kg 对脑含水量也有明显降低作用，表明该药具有减轻缺血性脑血管通透性增高和脑水肿的作用,从而保护大脑。2.2 头顶一棵珠对实验性脑缺血小鼠存活时间的影响健康小鼠,雌雄各半,体质量（21.41.6）g,随机分 3 组,对照组、头顶一棵珠高剂量（2g/kg）组和低剂量（1g/kg）组。ig 给药,1 次/d,共给 7d,对照组 ig 同体积自来水,末次药后 1.5h,用乌拉坦 1.3g/kgip 麻醉,分离出双侧颈总动脉,结扎并记录呼吸停止时间。结果见表 2。表 2 头顶一棵珠对实验性脑缺血小鼠存活时间的影响（略）表 2 可见,头顶一棵珠 ig2,1g/kg 可非常显著地延长小鼠双侧颈总动脉结扎的存活时间(P0.01)。提示头顶一棵珠可增强大脑缺血性缺氧所形成脑循环障碍的耐受力。2.3 头顶一棵珠对小鼠断头后张口喘气时间的影响健康小鼠,雌雄兼用,体质量（22.51.8）g，随机分 4 组：对照组，头顶一棵珠高（4g/kg） 、中（2g/kg） 、低（1g/kg）剂量组。ig 给药,1 次/d,共给 7d,对照组 ig 同体积自来水,末次药后 1.5h,自小鼠颈部剪断鼠头,记录断头后张口动作的持续时间。结果见表 3。表 3 可见,头顶一棵珠中、高剂量具有显著延长小鼠断头后喘气时间的作用。表 3 头顶一棵珠对小鼠断头后张口喘气时间的影响（略）2.4 对结扎大鼠双侧颈总动脉所致脑缺血再灌注模型的影响4Wistar 大鼠,雌雄各半,体质量（29341）g,随机分为 5 组。采用双侧颈总动脉结扎法造模,25%乌拉坦 5ml/kg 腹腔麻醉,颈部正中切开分离,用小动脉夹夹闭双侧颈总动脉 30min 后,松开双侧小动脉夹,恢复再灌注 60min,制成缺血再灌注模型;假手术组颈部切开分离后不结扎颈总动脉。在缺血后 30min 经舌下静脉注射头顶一棵珠醇提取液;模型组注射等量生理盐水;假手术组不结扎颈总动脉,其它操作同生理盐水组。逐层缝合伤口,术后回笼饲养,各组均腹腔注射给药 5d,末次给药 1h 后断头处死,迅速取脑,以检测脑含水量及脑组织 Ca2+，Na+-K+-ATP 酶活性及过氧化脂质(LPO)含量。脑组织水含量的测定方法同“2.1”项;脑组织 Ca2+，Na+-K+-ATP 酶及过氧化脂质(LPO)含量的测定:断头取脑组织,用冰生理盐水按体积比为 19 比例稀释后在冰水浴下制成 10%的脑匀浆,于 43500r/min 离心 10min,取上清液弃沉淀,置 20冰箱中保存。按试剂盒方法分别测定脑组织中 Na+-K+-ATP 酶、Ca2+-ATP 酶活性。过氧化脂质(LPO)含量测定:取冻存大鼠脑皮质,加生理盐水,用匀浆器研磨成 10%的匀浆液,用硫代巴比妥(TBA)法测定。结果见表 4。表 4 头顶一棵珠对脑缺血再灌注大鼠脑组织含水量、Na+-K+-ATP 酶、Ca2+-ATP3酶活性和 LPO 含量的影响（略）由表 4 可见,脑缺血模型组与正常对照组比较,脑含水量明显增加。头顶一棵珠 1mg/kg 组及复方丹参组的动物,脑水肿程度较模型组明显降低,缺血再灌注时脑组织 ATP 酶活性下降,头顶一棵珠高、低剂量组能提高脑组织 Na+-K+-ATP 酶活性,差异有显著性。模型组 LPO 含量均显著高于各用药组和假手术组。头顶一棵珠 1,0.5mg/kg 组 LPO 含量明显降低。3 讨论本实验结果表明,头顶一棵珠 ig 给药,可明显降低结扎双侧颈总动脉大鼠脑内伊文思蓝含量、脑指数、脑含水量;显著延长结扎双侧颈总动脉小鼠的存活时间;延长断头小鼠张口动作持续时间。提示,该药可改善脑缺血造成的脑血管通透性增加、脑水肿,并对大脑缺血性缺氧所形成的脑循环障碍,可增强其耐受力,降低脑耗氧量,保护大脑。同时本实验结果也显示:缺血再灌注时脑组织 Na+-K+-ATP 酶和 Ca2+-ATP 酶活性下降与脑组织缺血缺氧引起的能量合成障碍有关。头顶一棵珠高剂量能提高脑组织 Na+-K+-ATP 酶和 Ca2+-ATP 酶活性,从而能减轻细胞内 Ca2+超载,减轻细胞内 Ca2+对细胞膜及线粒体膜的损伤;缺血再灌注时大鼠脑组织中的过氧化脂质LPO 含量显著增加,提示脑缺血再灌注可激活氧自由基生成系统,导致自由基生成过多或清除能力下降,因此测定这些物质的活性或含量变化可作为评价药物抗脑缺血再灌注损伤作用的有效指标。该药还可显著降低缺血再灌注大鼠脑组织中的过氧化脂质 LPO 含量,说明其具有抗氧化,清除自由基作用。综上所述,头顶一棵珠可明显改善脑缺血和缺血再灌注大鼠的脑代谢,具有明显的脑缺血保护作用，本研究为指导今后临床应用提供了理论依据。【参考文献】1中科院植物研究所.中国植物志，第 13 卷M.北京:科学出版社，1978：97.2谢宗万，范崔生，朱兆仪，等.全国中草药汇编,上册，第 2 版M.北京:人民卫生出版社,2000:225.3丁永芳,袁冬萍,方泰惠,等.注射用银杏叶(冻干)对实验性脑缺血的保护作用J.时珍国医国药,2003,14(4)201.4高艳.麦芽醇对大鼠脑缺血再灌注损伤的防治作用J.咸宁学院学报,2005,19(2)84.