高效液相色谱柱柱效测定一、实验目的1 了解高效液相色谱仪的基本结构和工作原理2 学习高效液相色谱仪的使用3 学习、掌握液相色谱柱柱效测定方法二、基本原理 高效液相色谱法是以液体作为流动相的一种色谱分析法，它亦是根据不同组分在流动相和固定相之间的分配系数的差异来对混合物进行分离的。气相色谱中评价色谱柱柱效的方法及计算理论塔板数的公式同样适合于高效液相色谱，即：式中：tR为组分的保留时间Y1/2为色谱峰的半峰宽度Y为色谱峰的峰底宽度三、仪器和试剂1 仪器1：KLC321型高效液相色谱仪（紫外检测器）2 5l微量进样器3 试剂：甲酯、乙酯、丙酯、丁酯、混合液 四、实验条件1 色谱柱1 长15cm，内径 4.6mm，装填10mm的C-18烷基键合固定相2 流动相 甲醇:水（85:15），流量0.8ml/min3 紫外光度检测器 波长254nm，灵敏度0.084 进样量 5ul五、实验步骤 1根据实验条件和实验录像指导，按KLC321仪器操作步骤将仪器调节至进样状态，待仪器流路及电路系统达到平衡，色谱工作站之“采样系统”基线平直时，即可进样。 2分别吸取5l甲酯、混合液，并用色谱工作站记录色谱数据，同时记录色谱数据文件名。 3用色谱工作站之“数据处理”系统处理数据文件并记录所需数据。六、数据记录及处理单位：min单液类别保留时间起点时间落点时间理论塔板数甲酯5.5435.5075.58092249.500乙酯5.3505.1975.970766.423混合液类别保留时间起点时间落点时间12.6672.5732.7373.0672.7453.2283.4533.3353.7223.8523.7224.1504.5234.3654.6405.5675.3805.69322.6872.5972.7703.0672.7773.1853.4033.1853.6253.7323.6253.9834.2774.0554.6405.0974.9225.693 混合液各理论塔板数计算结果如下表：1242313859.786459041273.77957.06129617384328.2855.235061699