Tris-HCl 缓冲液（0.05 mol/L）50 毫升 0.1mol/L 三羟甲基氨基甲烷（Tris）溶液与 X 毫升 0.1mol/L 盐酸混匀并稀释至 100毫升。pH (25) X (mL) 7.10 45.7 7.20 44.7 7.30 43.4 7.40 42.0 7.50 40.3 7.60 38.5 7.70 36.6 7.80 34.5 7.90 32.0 8.00 29.2 8.10 26.28.20 22.9 8.30 19.98.40 17.28.50 14.78.60 12.48.70 10.38.80 8.58.90 7.0Tris 分子量121.14 ；0.1 mol/L 溶液为 12.114 g/L。Tris 溶液可从空气中吸收二氧化碳，使用时注意将瓶盖严。由于 Tris-HCl 是一个缓冲液，因而他的浓度不会影响 pH，因而不会通过 pH 来影响络合物的稳定性，从而影响吸光度另外可能影响的一个方面：Tris-HCl 实际上是三羟甲基氨基甲烷盐酸盐，由于 Tris，也就是三羟甲基氨基甲烷，她里面一个氨基，由于氨基也是一个配位基团，因而它有可能取代原来的络合物中的配体，从而使络合物发生变化，影响吸光度，若要知道会不会有这方面的影响，就要查的它们的配合常数，比较一下就可以了 磷酸盐缓冲液磷酸盐是生物化学研究中使用最广泛的一种缓冲剂，由於它们是二级解离，有二个pKa 值，所以用它们配制的缓冲液，pH 范围最宽：NaH2PO4： pKa12.12， pKa27.21 Na2HPO4： pKa17.21， pKa212.32配酸性缓冲液： 用 NaH2PO4，pH14，配中性缓冲液： 用混合的两种磷酸盐，pH 68， 配碱性缓冲液： 用 Na2HPO4，pH1012。用钾盐比钠盐好，因为低温时钠盐难溶，钾盐易溶，但若配制 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的缓冲液时，只能用磷酸钠而不能用磷酸钾，因为 SDS（十二烷基硫酸钠）会与钾盐生成难溶的十二烷基硫酸钾。磷酸盐缓冲液的优点为：容易配制成各种浓度的缓冲液；适用的 pH 范围宽；pH 受温度的影响小；缓冲液稀释后 pH 变化小，如稀释十倍后 pH 的变化小于 0.1。其缺点为：易与常见的钙 Ca+离子、镁 Mg+离子以及重金属离子缔合生成沉淀；会抑制某些生物化学过程，如对某些酶的催化作用会产生某种程度的抑制作用。Tris（三羟甲基氨基甲烷，N-Tris(hydroxymethyl)aminomethane）缓冲液Tris 缓冲液在生物化学研究中使用的越来越多，有超过磷酸盐缓冲液的趋势，如在SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳中已都使用 Tris 缓冲液，而很少再用磷酸盐。Tris 缓冲液的常用有效 pH 范围是在“中性”范围，例如：Tris-HCl 缓冲液： pH7.58.5Tris-磷酸盐缓冲液： pH5.09.0配制常用的缓冲液的方法有两种：按书后附录中所列该缓冲液表中的方法，分别配制 0.05mol/L Tris 和 0.05mol/L HCl 溶液，然后按表中所列体积混合。由于标准浓度的稀盐酸不易配制，所以常用另一种方法；若配 1L 0.1mol/L 的 Tris-HCl 缓冲液：先称 12.11g Tris 碱溶于 950mL970mL 无离子水中，边搅拌边滴加 4N HCl，用 pH 计测定溶液 pH 值至所需的 pH 值，然后再加水补足到 1L。Tris-HCl 缓冲液的优点是： 因为 Tris 碱的碱性较强，所以可以只用这一种缓冲体系配制 pH 范围由酸性到碱性的大范围 pH 值的缓冲液； 对生物化学过程干扰很小，不与钙、镁离子及重金属离子发生沉淀。其缺点是：缓冲液的 pH 值受溶液浓度影响较大，缓冲液稀释十倍，pH 值的变化大于0.1；温度效应大，温度变化对缓冲液 pH 值的影响很大，即：pKa0.031 ，例如：4时缓冲液的 pH8.4 ，则 37时的 pH7.4，所以一定要在使用温度下进行配制，室温下配制的 Tris-HCl 缓冲液不能用于 04。 易吸收空气中的 CO2，所以配制的缓冲液要盖严密封。 此缓冲液对某些 pH 电极发生一定的干扰作用，所以要使用与 Tris 溶液具有兼容性的电极。