Quantitative Biochemical Analysis一、目的學習使用pipetman的正確方法并瞭解如何校正，可使實驗結果準確性提高。Pipetman是最常用於biochemistry及molecular biology實驗的基本必須工具，一般有p2、p10、P20、p100、P200、P1000、P5000、P10mL等規格，不同規格型號的pipetman所及取的體積各有不同，在記錄結果時需注意單位變化。二、原理Pipetman是一種取樣量連續可調的精密取液儀器，基本原理是依靠活塞的上下移動。其活塞移動的距離是由調節輪控制螺杆機構來實現的，推動按鈕帶動推杆使活塞向下移動、排除了活塞腔內的氣體。鬆手後，活塞在復位彈簧的作用下恢復其復位，從而完成一次吸液過程。三、材料、藥品Pipetman、tube、tip、蒸餾水、蒸餾水、燒杯、精密電子秤。四、步驟1、分別進行P20、P200、P1000的吸取動作和讀取方式。（1）将一个tip装在pipetman上，推到套紧位置以保证气密性。（2）转动调节轮，使读数显示为所要取液体的体积。 图1 移液器的使用（3）轻轻按下推动按钮，将推动按钮由位置“0”推到位置“l”。（4）手握移液器，将吸液尖垂直浸入待取液体中，浸入深度为24mm。（5）经23s后缓慢松开推动按钮，即从推动按钮位置“1”复位到“0”位，完成吸液过程，停留12s后将pipetman移出液面。（6）用纱布或滤纸将粘在tip外表面的液体擦掉。注意不要接触到吸液尖头部的孔表面。（7）将tip头部放入被分配的容器中，使尖贴着容器的内壁，然后慢慢按下推动按钮至位置“1”，继续按至位置“2”，此时液体应全部排净。（8）将tip口部沿着容器内壁滑动几次，然后移走pipetman，松开推动按钮，按卸尖按钮推掉tip，即完成一个完全的操作过程。2、再分別進行校正，先拿取一個tube稱重后，將電子秤歸零。3、pipetman（P20/P200/P1000）吸取蒸餾水至tube中，再放置於電子秤稱重。4、將此時tube的重量記錄下來，差值即為稱取的水的體積，可換算pipetman所吸取的水的體積5、重複上述步驟三次，得到三組數據6、將此三組說句平均后所得的數值對照此款pipetman的Maximum permissible errors表中的Gilson，確定此次操作是否在可接受誤差範圍內。7、若超過了誤差範圍，則需進行校正。五、實驗結果P20tube重(g)蒸餾水+tube重(g)蒸餾水重(g)蒸餾水體積(L)1st1.10431.12430.020.022nd1.10671.12720.02050.02053rd1.10891.12870.01980.0198平均1.1.0.02010.0201P200tube重(g)蒸餾水+tube重(g)蒸餾水重(g)蒸餾水體積(L)1st1.10921.31220.2030.2032nd1.111.31350.20350.20353rd1.10441.30780.20340.2034平均1.1.0.20330.2033P1000tube重(g)蒸餾水+tube重(g)蒸餾水重(g)蒸餾水體積(L)1st1.10582.11141.00561.00562nd1.11022.11381.00361.00363rd1.11672.12331.00661.0066平均1.11092.1.1.(Reference Extent)ModelVolume(L)Maximum Permissible Errors(Gilson)(Accuracy)(Precision)Systematic error(L)Random error(L)Min 20.100.0350.100.04P20100.100.05Max200.200.06Min 500.500.20P2001000.800.25Max2001.600.30Min 20030.6P100050041.0Max100081.5誤差值與參考範圍對比ModelReference Extent(L)Average Error(L)ConclusionP200.200.1accpectP2001.603.3refuseP100085.27accpect本次實驗的目的是學習pipetman使用方法和判斷pipetman是否需要校正。我們通過tube裝水前後的質量之差，以差量法為手段，得出pipetman吸取最大量程時候的體積與理論吸取體積的誤差是否在可接受的參考量程之內，來判定此pipetman的可用性。（1）P20為例：其平均的誤差值為0.1L，小於其可接受誤差為0.20L。說明此pipetman不需要校正。（2）而P200的平均的誤差值為3.3L，而可接受誤差為1.60L，超過了可接受誤差的範圍。說明此pipetman需要校正。（3）P1000：其平均的誤差值為0.1L，而可接受誤差為0.20L。說明此pipetman不需要校正。六、討論在本次實驗中出現pipetman需要校正的結論有一下可能：（1）pipetman確實是自身存在缺陷，需要調節維護。由於使用時間長、使用不當、或者自身彈簧、密封圈老化的問題的出現，使其準確性下降。（2）由於tip的質量問題，其密封性、表面材質粗糙度、流線性、口徑大小等，可能影響pipetman的取液準確性。（3）精密電子秤是未經過準確度驗證的，其可能存在自身的測量誤差，導致差量法的準確性下降。因為本次實驗是用重量與體積的關係來確定pipetman誤差的。（4） 個人的操作規範也會對實驗結果造成很大的影響。改進和注意事項：在下次做相同的實驗之前，可先對tip、精密電子秤進行校準；另外嚴格要求個人操作技術：操作时要慢和稳；吸嘴浸入液体深度要合适，吸液过程尽量保持不变；改吸不同液体、样品或试剂前要换新吸嘴；发现吸嘴内有残液时必须更换；新吸嘴使用前应先预洗；为防止液体进入移液枪套筒内。七、參考文獻（1）P型移液枪操作规程，http:/wenku.baidu.com/view/bfa5132cbd64783e09122b09.html?from=related&hasrec=1（2）移液器使用標準規程，http:/wenku.baidu.com/view/8fa6638acaaed5e7.html?from=rec&pos=1&weight=3&lastweight=1&count=5严格执行现金管理制度和现金使用范围，遵守银行结算制度，现金银行存款按时间顺序逐笔登记，每日结出余额现金当日核对，银行存款月终必须与银行核对，做到日清月结。