二级学院药科学院专 业药学班 级药学11（2）班姓 名刘星明学 号指导老师 杨智承 2013年12月中枢神经药物的帅选及LD50的测定目的：从未知药物中，通过观察动物的药物反应，筛选出具有中枢神经兴奋惊厥作用的目标药物，并测定其LD50，以评定药物的在效性及安全性。方法：随机捉取3只小鼠，分别注射三种药物，根据小鼠的反应对待测的3种药物做出鉴别和筛选，并从中选取本组药物中枢兴奋药进行后续实验，初筛选出中枢神经兴奋药并探索0%最大无效量（LD0）和100%最小有效量（LD100）。结果：预实验中，确定我们组兴奋药的最小剂量Dmin=258.6mg/ml 和最大剂量Dmax=326.1mg/ml ；根据正式实验得到的数据经计算，得出我们组受试药品的 LD50=357.2146 mg/kg实验器材仪器：天平、注射器、针头、烧杯、移液管药品：中枢药物兴奋药、抑制药、生理盐水动物：小白鼠 实验方法预实验药物的鉴别随机捉取3只小鼠，称重，按0.1ml/10g的剂量分别注射三种药物，再根据小鼠的反应对这3种药物做出鉴别，并从中选取中枢兴奋药进行正式实验.药物LD0及LD100测定捉取18只小鼠，随机分成6组，每组3只，称重，编号，记录数据.以中枢兴奋药的临床反应40min内的存活量为指标，分别对原药（75mg/ml)进行一定浓度稀释（稀释倍数分别为2倍，2.3倍，2.5倍，2.9倍，3倍，5倍)，然后分别对同组小鼠腹腔注射稀释药剂（0.1ml/10g），观察并记录每组小鼠的反应及死亡数。再根据实验结果，计算受试药物的最小剂量Dmin和最大剂量Dmax。正式实验 随机抽取40只小鼠，随机分成5组，每组8只，称重，标记，记录数据。再根据预实验得到的Dmin和Dmax计算每组剂量。设正式实验剂量组数为n，剂量公比为r，则，因此各组的剂量为Dmaxrk-1 ，k为第几组，按此式算出各组所需的剂量进行药液的配制。原药物溶液的浓度为：75mg/mL，根据预实验得出的浓度范围计算各组剂量，对原溶液进行稀释，再给各种动物进行腹腔注射相应剂量的药液（0.1mL/10g），观察并记录给药后40min内小鼠反应情况（是否死亡）。最后进行数据整理，并按照规定的方法计算LD50，及其95%的可信限。实验结果预实验药物的筛选第一只小鼠注射药物后出现强直、惊厥、死亡，说明此药物是中枢兴奋药；第二只小鼠注射药物后出现蜷缩、镇静、翻正反射消失、死亡，说明此药物是中枢抑制药； 第三只小鼠注射药物后无明显变化，说明三号药物是生理盐水。药物LD0及LD100测定表1 小鼠腹腔注射兴奋药预实验结果组别剂量（mg/kg）总小鼠数(只)死亡动物(只)死亡率（%）1150mg/kg3002375mg/kg331003250mg/kg3004300mg/kg3266.75326.1mg/kg331006258.5mg/kg300由上图可知受试药物的最小剂量Dmin=258.5mg/ml和最大剂量Dmax=326.1mg/ml正式实验 lD50的测定将40只小鼠分为五组，n=5，剂量公比为r，则 各组的剂量为：第一组：311.3mg/kg第二组：311.3mg/kg/0.95=327.7mg/kg第三组：327.7mg/kg/0.95=344.9mg/kg第四组：344.9mg/kg/0.95=363.1mg/kg第五组：363.1mg/kg/0.95=382.2mg/kg分别对小鼠进行给药后得出实验结果（如表2）所示：表2 小鼠腹腔注射兴奋药实验结果组别剂量（mg/kg）总小鼠数(只)死亡动物(只)死亡率（%）剂量对数(X)概率单位(Y)1311.38112.52.4933.8502327.78225.02.5154.3303344.98337.52.5384.6804363.18450.02.5605.0005382.28675.02.5825.670回归方程为：Y=-44.3918+19.3471X；（r=0.9913）a=0.01时，查得的r为：0.9590（其中Y的概率单位加5后的值，X为剂量的对数logx）所以LD50=357.2146 mg/kg置信系数a=0.05时的置信区间为：350.2495LD50364.3182,0.0086讨论1 预实验中，注射了中枢兴奋性药的小鼠表现为强直，惊厥，死亡，主要是因为兴奋药能使小鼠中枢神经系统功能增加，从而出现亢奋，但剂量过大，超出安全用量范围就会导致小鼠死亡；注射了中枢抑制药的小鼠出现蜷缩、镇静、翻正反射消失、死亡，主要是因为抑制药能使小鼠中枢神经系统功能抑制，使其出现乏力、昏睡、知觉消失等现象，而同样因为药剂剂量大，会使小鼠中枢极端抑制，从而使呼吸减慢变浅甚至死亡；注射生理盐水的小鼠无临床表现，主要因为生理盐水对小鼠的神经系统无影响。2 由于预实验和正式试验中的中枢兴奋药浓度有些出入，所以在选取预实验中最大剂量注射时小鼠只有两只死亡，则本组就在接下来的实验保持r不变,分别加大或减少剂量来测量LD50。而且在正式试验过程中，小鼠腹腔注射后20分钟左右的时间内一般都会出现强直、惊厥、死亡，有部分还出现咬舌的现象。死后出现肌肉僵直，全身僵硬，身体卷曲的状态，此为兴奋药的特点。3 由于实验的小鼠间个体差异比较大，为避免个体差异对实验结果造成影响。本次实验严格遵循重复和随机的原则对小白鼠进行了分配。而且我们原定于将50只小白鼠分为6组，每组8只，从而增加实验结果的可靠性。本实验全部采用腹腔注射的形式进行给药，是由于腹膜面积大、密布血管和淋巴管，有操作方便、药效作用时间短、速度快等优点。4 药物给药剂量与动物死亡率间呈正态分布。以对数剂量为横坐标、累加死亡率作为纵坐标作图，可得到一对称S型曲线，其两端较平坦，中间较陡，说明两端处剂量稍有变化时死亡率不容易表现出来，在50%死亡率处斜率最大，该处剂量稍有变动时，其死亡率变动最明显，也最灵敏，在技术上也最容易准确测得，故常选用LD50作为反映药物毒性的指标。而在设计实验中可预先设计预实验的给药浓度梯度，但在进行预实验的过程中，应首先取一浓度梯度进行实验，根据该梯度实验结果对其他三组实验的给药剂量进行调整，以保证得出该中枢兴奋药的最大及最小剂量。5 本次实验采用的是兴奋药，给小鼠腹腔注射后，小鼠会出现兴奋的状态，在40分钟内会出现急躁，狂窜，四肢不停抖动，坐立不安，动作灵敏快速，有部分还出现吐血几自咬的现象。死后出现肌肉僵直，全身僵硬，身体卷曲的状态。此为兴奋药的特点。 6 本次实验采用腹腔注射的形式进行给药，腹膜面积大、密布血管和淋巴管，有操作方便、药效作用时间短、速度快等优点 结论本实验组采用所鉴别出来的中枢兴奋药经预实验得最小剂量Dmin=258.6mg/ml和最大剂量Dmax=326.1mg/ml；正式实验得出LD50=357.2146 mg/kg参考文献药理学（第七版），朱依谆主编，人民卫生出版社，2012药理学实验指导（第二版），谭毓治主编，科学出版社，2012.9