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生化实验04淀粉酶活性的测定陈桃,相关知识点回忆,生化实验04淀粉酶活性的测定陈桃,支链淀粉或糖原分支点的结构,1. 重要的多糖-淀粉,生化实验04淀粉酶活性的测定陈桃,支链淀粉的分枝结构,生化实验04淀粉酶活性的测定陈桃,a -淀粉酶 -淀粉酶 切-1,4-糖苷键 淀粉的 水解 麦芽糖酶 酶促 脱支酶 切 -1,6-糖苷键 降解 异麦芽糖酶 磷酸解: 淀粉磷酸化酶,2、淀粉的酶促降解,生化实验04淀粉酶活性的测定陈桃,3. 淀粉的酶促水解,淀粉酶 淀粉酶:在淀粉分子内部任意水解-1,4糖苷键。产物为麦芽糖,麦芽三糖,糊精等还原糖(内切酶) 淀粉酶:从非还原端开始,水解,4糖苷键,依次水解下一个麦芽糖单位(外切酶),极限糊精,生化实验04淀粉酶活性的测定陈桃,-淀粉酶 -淀粉酶 可跨越分枝点 不能跨越分枝点 内切酶(随机切) 端解酶(非还原端两两相切) 产物糊精分子量小 糊精分子量大(极限糊精) 耐70 15min, 不耐酸 耐pH=3.3 酸性, 不耐高温 分布 发芽种子 休眠种子,-淀粉酶和-淀粉酶的异同点:,相同点:都作用于-1,4糖苷键,产物都是麦芽糖,不同点:,生化实验04淀粉酶活性的测定陈桃,淀粉酶活性的测定(P174),实验04,生化实验04淀粉酶活性的测定陈桃,一、目的 二、原理,D-麦芽糖,生化实验04淀粉酶活性的测定陈桃,淀粉酶活性大小的表示方法: 淀粉酶活性的大小与产生的还原糖的量成正比。以单位质量样品单位时间生成的还原糖的量表示。,测定-淀粉酶和-淀粉酶: -淀粉酶不耐酸, -淀粉酶不耐热,本实验采用70。C保温15min钝化-淀粉酶而测出-淀粉酶。总活力减去-淀粉酶活力则为-淀粉酶活力。,生化实验04淀粉酶活性的测定陈桃,三、材料、仪器设备及试剂,材料:萌发的小麦种子(芽长1cm) 仪器设备:分光光度计、恒温水浴、刻度试管、 容量瓶 试剂: 1、标准麦芽糖溶液(1mg/mL) 2、3,5-二硝基水杨酸(含NaOH) 3、1%淀粉溶液,生化实验04淀粉酶活性的测定陈桃,四、实验步骤,1、麦芽糖标准曲线的制作 A540=0.264x-0.052 (x为mg麦芽糖),生化实验04淀粉酶活性的测定陈桃,3、酶活力的测定,取4支干净的具塞刻度试管,编号,按下表操作:,摇匀,沸水浴中5min,取出流水冷却,加蒸馏水至20mL。摇匀,540nm比色测定。,生化实验04淀粉酶活性的测定陈桃,空白管: 2 mL蒸馏水 + 2 mL3,5-二硝基水杨酸,沸水浴5min,定容至20 mL,生化实验04淀粉酶活性的测定陈桃,五、实验数据,VT= VS= W= A-1= A-2 = A1 = A-2 - A-1 x1= A-1= A-2 = A2 = A-2 - A-1 x2=,生化实验04淀粉酶活性的测定陈桃,六、结果计算,-淀粉酶活力=(+)-淀粉酶活力- -淀粉酶活力,生化实验04淀粉酶活性的测定陈桃,七、分析讨论,注意事项: 1、三个水浴温度的不同,不能混淆。 2、实验步骤较复杂,理解之后动手操作。,生化实验04淀粉酶活性的测定陈桃,
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