核桃青皮中胡桃酿及其衍生物的高效分离摘要：针对胡桃采摘及加工过程小产生有毒有害废弃物现象，该项口以胡桃青 皮为原料，索氏抽取后用层析法制取胡桃覘，并检测其纯度和转移率；用层析所 得胡桃醞进行浸种和喷洒幼苗，观察和测量其对种了萌发及其幼株生长的抑制作 用。结果显示：以氯仿作提取剂，经索氏抽取后反复硅胶柱层析，用氯仿和石油 瞇一乙酸乙酯（200:1）分阶段洗脱得到较纯的胡桃醍制备液，用EX-1600高效液相 色谱仪测得的胡桃酿平均含量为0.39%, RSD= 1.78%o1前言胡桃屈丁胡桃科胡桃屈，学名胡桃（Juglans regia L.）o胡桃在我国栽培历史长 达两T多年，山西、河北、河南、山东、陕西、甘肃、青海及新疆南部多有栽培。 我国胡桃种植面积达到三千一百七十五万亩，产量近五十万吨，总面积和产量均 居世界第一位。胡桃青皮含有丰富的1,8-叶素、胡桃酿、胡桃试、金丝桃试、 挥发油等多种植物次生物质，具冇明显的植物化感作用。早在公元1世纪，普 林尼在口然历史中叙述了胡桃树的“树荫”是令人忧郁的，甚至会引起人的 头痛和损伤种植在其附近的各种植物。R.FDavis从胡桃果和根中提取了胡桃酿, 从而证实了普林尼所观察到的现象。我国老百姓也流传着这样一句俗语，“胡桃 树下无丰草”。很显然胡桃的化感现象很早就被人们所认识，其危害也早已形成 共识。胡桃青皮又称青龙衣，为胡桃外部的一层厚厚绿色青皮。胡桃青皮中化学成图1胡桃醍结构,分有39种挥发油和7种脂肪酸，其中挥 发油占79.09%、脂肪酸占19.02%,其中 的挥发油有姪类（26种、71.80%）、酮 类（3 种、10.83%）、醇类（6 种、7.96%）、 咲喃类（1种、5.79%）、酚类（1种、 1.99%）、月亏类（1种、0.95%）、酯类（1种、0.71%）七大类化合物。1985年，许绍惠等首次从胡桃青皮废弃物中分离捉纯出胡桃酿（植物化感物质），实验结果显示：新鲜山胡桃青皮中胡桃醜含量较高，达到0.42%,随着存储时间的延长，胡桃醍含量逐渐减少，存储9年的青皮中只含 有0.09%o另外，姚焕英等冈人分析了胡桃青皮中的9种醍类衍生物。2材料与方法2.1材料、试剂与主要实验仪器2.1.1试验材料供试材料：胡桃青皮采集于山西省吕梁市离石区王营庄，为中科农1号。 2.1.2试验试剂石油醸、乙酸乙酯、高猛酸钾、磷酸、磷酸二氢钠、氯仿均为分析纯，水为 双蒸水、甲醇（色谱纯）.胡桃酿标准品。2.1.3主要试验仪器及用具主耍仪器：KQ5200DB型超芦机（江苏省昆山市超声仪器有限公司）;FA2104N电了天 平（上海精密科学仪器冇限公司）；N-1000型旋转蒸发仪（EYELA上海爱朗 仪器有限公司）;EX1600高效液相色谱系统（上海伍丰科学仪器有限公司）；离 心机；粉碎机。索氏提取器、锥形瓶（100mL）、容量瓶（10、100mL）、橡皮手套、蹑子、 培养皿、新华滤纸、金属筛、微型喷壶、尺了、放大镜、计算器、微孔滤膜（0.45pm）。（以上药甜、仪器及用甜均由吕梁学院生命科学系提供）2.2试验方法与步骤胡桃酿提取及含量测定方法剥取新鲜胡桃青皮（带上橡皮手套，因为对皮肤氧化能力很强），置室温卜 自然干燥7d,待彻底干燥后于粉碎机彻底粉碎，80目金属筛过筛。含量测定方法的建立。色谱条件：色谱柱为Exformma柱（4.6 x200 mm, 5pm）,流动相为甲醇:水（55:45）,水相用磷酸调PH值约为3.5（磷酸:水为1:500）,流速为0.8mL/min,检测 波长为250nm,柱温为30C。标准曲线的绘制：精密称取胡桃醜标准品，加甲醇溶解并稀释成浓度为1.210 mg mL1的溶液，用移液管分别取0.5、1、1.5、2.5、5 mL置于10 mL的容量瓶, 用甲醇稀释至刻度，浓度为0.0605、0.1210、0.1815、0.3025、0.6050 mg mL1,分别取10 m依次进样，以峰面积值对样品浓度绘制标准曲线为Y= 809630X-20.41, r= 0.9995,线性范围0.0605 mg mL 0.6050 mg- mL_1 供试液的制备：精密称取青皮粉末lg,用滤纸包裹，防止泄露。置于索氏提 取器中，加90 mL氯仿，水浴加热提取至溶液无色为止，过滤后置于100 mL的 容量瓶中，用少量氯仿洗涤索氏捉取器，过滤后并入容量瓶中，用氯仿定容至刻 度，混匀。用移液管精取10 mL,置10 mL离心管中、水浴蒸干，温度设定为40C。 加甲醇3 mL超声提取10 min, 4000 r- min1离心10 min后取上清液，再用甲醇3 mL 提取2次,合并上清液于10 mL的容量瓶中，用甲醇定容至刻度。进样前用0.45 pm 微孔滤膜（有机系滤膜）过滤。3结果与分析3.1胡桃酿提取及含量测定优化梯度洗脱条件，得胡桃酿标准品色谱图（图4）。胡桃醜标准溶液在21:05 分吋出现最大峰，峰形较好，比较理想。胡桃酿标准品标准曲线图由图6可知，在浓度为0.0605 0.1210、0.1815、0.3025、0.6050 mg mL1 范 围内内线性关系良好，以峰面积值对样品浓度绘制标准曲线为Y= 809630X-20.41, r= 0.9995。精密度试验:取浓度为0.0506、0.1936、0.7125 mg mL1供试液（低、中、 高）按上述色谱条件连续进样5次，RSD分别为0.87%、1.02%、1.35%。稳定性试验：在一定时间内测定样品溶液小胡桃醜含量。结果是室温下在甲 醇中放置8h,检测其含量稳定；氯仿中放置3d,检测其含量稳定。重复性试验：对青皮按样品处理方法制备5份供试液，按上述色谱条件进样 后测得胡桃酿的峰面积，代入标准曲线计算，胡桃醍的平均含量为0.39%, RSD= 1.78%（图 5）。加样回收率试验：精密称取已知含量的青龙衣5份，每份lg,分别精密加入 1 mL浓度为l.OlOmg mL1标准品溶液，其它操作按样品制备方法制备加样冋收 率试验供试品溶液，按先前规定的色谱条件检测，平均回收率为98.01%, RSD= 1.02%o