加热法破坏IgM在孕妇免疫血清学检测中的应用 楼菊蓉【摘 要】目的：探讨不同方法破坏IgM，检测孕妇IgG抗A（B）抗体效价的效果。方法：随机检测7例门诊O型Rh阳性孕妇，对每一例孕妇血清分成三份，分别采用6310分钟、6320分钟及DTT破坏血清IgM后，比较IgG抗A（B）效价的差异，并探讨6310分钟、6320分钟及DTT法的相关性。结果：水浴法不仅中和IgM抗体，。6320分钟与DTT法比较IgG抗A（B）效价结果存在显著差别（P0. 05）。三种方法分离IgG结果有高度正相关。结论：63加热10分钟操作简单，影响因素少，没有致癌性，对身体影响小，试验时间也较DTT短，是值得运用的技术。【关键词】孕妇免疫性抗体;水浴加热法;DTTR715B 1672-3783（2019）04-03-010-01背景新生儿溶血病（HDN）是发生在胎儿或新生儿的一种免疫溶血性疾病，是由母婴血型不合引起。研究证实12，母亲的IgG可通过胎盘上的Fc受体转运到胎儿体内。新生儿溶血病的发病几率依照孕妇IgG抗A或者抗B的抗体效价而变化，效价越高，发病几率越大，且孕妇抗体效价变化越快越早，新生儿溶血病的发病几率越大3血清中抗A和抗B是IgM和IgG的混合物，要测定IgG抗A和抗B抗体，需要排除IgM的干扰。然而采用二硫苏糖醇（DTT）方法破坏gM抗体是血型血清学检查中的常用技术，这种方法所需时间长，很难及时为临床提供诊断依据，国内有人报道血型血清加入生理鹽水70水浴30分钟破坏gM抗体完全且不影响IgG4，外国文献指出63度10分钟的温度能破坏IgM抗体5. 为了提高血清学检查的效率，探讨新方法来补充临床实验室对检测孕妇免疫性抗体。运用6310分钟和6320分钟水浴法对7例标本对比中和IgM的效果，及平行测定IgG抗A（B）效价与DTT测定结果进行比较，现报告如下。1 材料和方法1.1 标本来源随机选取7例O型孕妇，Rh （D）阳性，不完全抗体筛选试验阴性为对象，。1.2 仪器与试剂可调节温度水浴箱、恒温水浴箱、;3% A型和B型Rh（D）阳性血球（选68人份配制）、0.8% 标准A、B型血球（长春博讯生物技术公司，）10mmol/lDTT（BIOSHARP公司）抗人球蛋白（抗IgG+C3d）检测卡（江苏力博生物技术公司），LB-3000医用低速离心机等。1.3 操作与方法1.3.1 将7例O型孕妇血清分成2份，一份用两种方法检测IgM 抗A（B）效价。DTT检测法：取孕妇血清100ul与10mol/LDTT溶液700ul混匀，加盖37孵育30分钟，0.9%氯化钠溶液作倍比稀释，稀释度分别为1：16，1：32，1：64，1：128，1：256，1：512等。然后加入3%A，B型红细胞悬液各一滴，直接3000转15秒离心肉眼观察试管是否凝集。以出现凝集强度1+的最高稀释度的倒数为孕妇IgM抗A（B）效价水浴检测法：调节水浴箱温度到63度，做2管标记，1管取100ul血清加入300ul生理盐水混匀，放63度水浴箱10分钟。另一管取100ul血清加入300ul生理盐水混匀，放63度水浴箱20分钟.后续各管用0.9%氯化钠溶液倍比稀释，稀释度分别为1：8，1：16等。然后加入3%A，B型红细胞悬液各一滴，直接3000转15秒离心肉眼观察试管是否凝集。以出现凝集强度1+的最高稀释度的倒数为孕妇IgG 抗A（B）效价1.3.2 另一份用三种方法检测IgG 抗A（B）效价。DTT检测法：取孕妇血清100ul与10mol/LDTT溶液700ul混匀 ，加盖37孵育30分钟，0.9%氯化钠溶液作倍比稀释，稀释度分别为1：16，1：32，1：64，1：128，1：256，1：512等。然后吸取25l稀释处理好的血清，加入中抗人球蛋白（抗IgG+C3d）检测卡，再加入其标准0.8%A，B红细胞各1滴，混匀37孵育15min，用LB-3000离心机离心9min，结果判读。水浴检测法：调节水浴箱温度到63度，做2管标记，1管取100ul血清加入300ul生理盐水混匀，放63度水浴箱10分钟。另一管取100ul血清加入300ul生理盐水混匀，放63度水浴箱20分钟。后续各管用0.9%氯化钠溶液倍比稀释，然后吸取25ul稀释处理好的血清，加入中抗人球蛋白（抗IgG+C3d）检测卡，再加入其0.8%标准A，B红细胞，混匀37孵育15min，用LB-3000离心机离心9min，结果判读1.4 统计学处理 用Graphpad prism6统计软件，检测结果以2 为底数取指数后计算结果。P0.05表示两组之间有显著性差异。用pearson检验做相关性分析，若P0.05表示两组之间有显著性相关。2 结果2.1 三种方法中和IgM抗体结果DTT法和63水浴法对IgM抗体中和效果无明显差异，6310min与6320 min破坏IgM抗体同样较彻底。遂接下来选择6310分钟和6320分钟水浴法对IgG抗体进行检测。见表1.2.2 三种方法取得IgG效价分别用6310min与6320min检测7例0型孕妇IgG效价，对检测结果DTT30min进行医学统计，方差齐（P0.05），6320min与DTT30min检测效果有显著性差异（P0.05）。通过实验显示两种水浴法与DTT法有高度正相关性，6310min方法优于6320min（R2=0.9177）。DTT还有化学致癌性7，实验操作时间长， DTT对IgM抗体中和能力较差7。63加热10分钟操作简单，易控制，影响因素少，没有致癌性，对身体影响小，试验时间也较DTT短，是值得运用的技术。参考文献1Leach JL，Sedmak DD， Osborne JM， et a1.Isolationfrom human placenta of the IgG transfer，FcRn，andlocalization to the syncytiotrophoblast：implications formaternalfetal antibody transport. J Immun01， 1 996.157 （8）： 33173322.2Tamm A，Kister A，N01te KU，et a1.The IgGbindingsite of human Fc gamma RB receptor involves CCand FG loops of the membraneproximal domain.J BiolChem.1 996，271（7）：36593666.3柳爱华，储穆庭.2 5 3 7 例孕妇AB0 血型抗体效价检测结果及分析J.现代预防医学，2 0 1 1 ，0 1 ：4 9 -5 1 。4蒙. 娟巯基试剂处理和加热法分离血清中Ig G抗A（B）的比较 华夏医学，（2010） 04-0432-025IA.AI-Muzairai，M.Mansour，L.AImajed，N.ALkanderi，N.ALshatti，andM.Samhan.Heat Inactivation Can Differentiate Between IgG and IgM Antibodies in the Pretransplant CrossMatch.TransplantationProceedings，40，2198-2199（2008）6孙爱农， 黄小红， 吴晓燕， 等. IgG血型抗体温和还原的应用. 中国输血杂志， 2001， 14（4）：81 - 8217247孙桂香等 唾液，DTT，2-Me三种物质对IgM抗体中和能力的比较 科学技术与工程，（2007）08-1723-03健康必读下旬刊2019年4期健康必读下旬刊的其它文章康复治疗学专业教风学风建设的构建与思考口腔颌面软组织损伤分析与探讨腹腔镜技术在肠胃外科急腹症探查及治疗中的运用研究经皮椎体成形术与经皮椎体后凸成形术治疗骨质疏松脊柱压缩性骨折的临床对比分析实践强化健康教育对维持性血液透析患者护理质量的影响血凝试验检查的影响因素分析 -全文完-