Word文档教你一招丨需氧培养法在日常检测中，大多数的细菌、放线菌、霉菌培育法均为需氧培育。培育基接种微生物后放于35 37 或25恒温培育箱(或水浴箱)中，培育18 h-24h或3d-5d,大多数菌能达到指数期，可以进行计数及鉴定。需氧培育法按培育基的状态来分，可分为三类。一、固体培育法固体培育法是指将微生物接种在固体培育基上生长繁殖的方法，固体培育基包括琼脂平板和琼脂斜面。琼脂平板用于菌落计数和分别菌落，琼脂斜面用于微生物形态观看或保藏，接种后的平板倒置(防止冷凝水滴落到生长的菌体上),堆叠(一般不超过6个平皿)放于培育箱中，培育皿之间和培育皿距离箱壁至少要25 mm,保证空气循环，这时，对各个点的温度要进行验证。为防止培育基过分干燥，可用塑料袋松散的包一下，也可以在培育箱内放一杯水防止培育基干瘪。斜面试管放于试管架上，然后放置于培育箱中进行培育。除此两种方法属固体培育法外，还有以下几种。(一)插片培育法(1)用高压灭菌后冷却到50左右的培育基制备平板，凝固后用接种环挑取菌悬液划线接种。(2)将灭过菌的盖玻片以450斜插入固体培育基中，紧靠接种物，使菌体沿盖玻片生长，置28 32 培育箱培育3d-5 d。(3)培育完毕后，取出盖玻片放在载玻片上，直接用低倍镜观看放线菌的自然生长个体形态。也可在载玻片上滴一滴0.1%的美蓝水溶液，再放上插片，用高倍镜观看孢子结构。(二)载玻片培育法(1)在培育皿底部铺一张圆形滤纸，滤纸上放上一根U形载玻片搁架，其上放一块洁净的载玻片和两片盖玻片，盖上皿盖，外用纸包扎，高压灭菌后，烘干备用。(2)将经过高压灭菌冷却到50 左右的培育基，倒入另外的无菌培育皿中制成2mm厚的平板，凝固后用无菌刀切成1cm2的方块，放置于载玻片上左右各一块。(3)琼脂块的四周用接种针接种上霉菌孢子，而后盖上盖玻片，压紧琼脂块，在滤纸上加2 ml -3 ml。无菌水或20%无菌甘油，保湿培育，培育好后，可直接用低倍镜观看(三)透析膜培育法透析膜浸在试管中高压灭菌后，用无菌的镊子取出后平铺在琼脂平板上，在膜上用接种工具点接上菌种，盖好皿盖后，进行培育。也可直接把透析膜放在液体培育基里浸泡后，直接铺在平皿中，灭菌后进行点种微生物，再盖上皿盖进行培育。(四)其他应用在酿造工业上的培育瓶培育，盘曲、帘子曲培育，厚层通风培育。二、液体培育法液体培育法是利用液体培育基对微生物进行培育的方法，可分为静止培育法和深层培育法。(一)静止培育法静止培育法是指在接种后培育液静止不动进行培育。一般包括试管法和三角瓶浅层培育法，培育时盛液体培育基的螺口瓶或螺口试管的盖不要拧紧，松散盖上即可，放于试管架上，然后放置于培育箱或水浴锅中进行培育。在静置状态下，三角瓶内的通气状况与其中的装液量和瓶口棉塞的通气程度对瓶内微生物的生长速度和生长量有很大的关系。一般状况下，接种量越大，培育时间越长，生长量越高。刚接种的时候，菌体需适应培育基环境，故繁殖较慢，然后进入快速生长期，生长速度呈指数增长，到肯定数量后，培育基的养分成分消耗殆尽，次生产物增多，菌体生长速度减缓。(二)通气深层培育法1.振荡(摇瓶)培育法此法最早是荷兰人A. J. Kluyver等在1933年使用，即将三角瓶内培育液用8层纱布包住瓶口，以取代一般的棉花塞，同时降低瓶内的装液量，把它放置于摇床上有节奏的振荡，以该法提高液体溶氧量的目的。该法可以对微生物进行通气深层培育，通过对细菌、酵母等单细胞微生物振荡培育，可以得到均一的菌悬液，常用于菌种的选育及生化试验和发酵试验等。振荡培育的设备有恒温摇床、摇瓶机等，培育瓶放在里面后，进行振荡培育，瓶口用6层8层的纱布包扎，瓶内液体不宜过多，防止溅到瓶塞上引起污染。2.发酵罐培育法可进行较大液体量的通气培育，有小型发酵罐和大型的发酵罐，小型的发酵罐一般为1L100 L,大型的容量一般在1m3-500 m3,能够供应培育微生物的养分和氧气，并且有自动掌握和记录装置。三、半固体培育法利用半固体培育基进行培育的方法，半固体培育基含有肯定的琼脂(0.02%-0.3% )，使培育基有肯定的黏度，但没有完全固化。培育时，盛半固体培育基的试管放置于试管架上，然后置于培育箱中进行培育。一般用于生化试验。4