固定化技术微生物与发酵工艺 1.了解固定化细胞的原理。 2.掌握用海藻酸钠制备固定化酵母细胞的方法。一、实验目的 二、实验原理 细胞固定化的方法有多种，如吸附法、载体偶联法和包埋法等。工业上常用包埋法固定微生物细胞。根据包埋剂的特性，如在海藻酸钠呈溶液状时，将细胞加入混匀，然后在氯化钙中凝固形成海藻酸钙凝胶，凝胶颗粒中的微小空格将细胞固定。海藻酸钙凝固的颗粒能反复使用，细胞在空格中可以新陈代谢（固定活细胞)，也可利用细胞中的酶进行酶促反应(固定死细胞)。1.1.海藻酸钠、海藻酸钠、0.2 mol/L0.2 mol/L氯化钙溶液（氯化钙溶液（4.44g4.44g氯化钙，蒸馏水氯化钙，蒸馏水200mL200mL）、市售活）、市售活性干酵母粉、青霉素、天平、纱布、细性干酵母粉、青霉素、天平、纱布、细绳、绳、20mL20mL注射器、注射器、250mL250mL烧杯、烧杯、250mL250mL三三角瓶、搅拌、电炉、培养箱角瓶、搅拌、电炉、培养箱2.2.沙保培养基沙保培养基 蛋白胨蛋白胨10g10g，葡萄糖，葡萄糖40g40g，蒸馏水蒸馏水1000mL 1000mL ，pHpH自然，自然，115115灭菌灭菌20 20 minmin。三、实验材料 1.1.称取称取1.5g1.5g海藻酸钠于海藻酸钠于250mL250mL烧杯中烧杯中，加蒸馏水至，加蒸馏水至100mL100mL处，加热搅拌溶解处，加热搅拌溶解。冷却后加入。冷却后加入1g1g市售酵母粉，搅拌均市售酵母粉，搅拌均匀。匀。 2.2.配制配制0.2mol/L0.2mol/L氯化钙溶液氯化钙溶液200mL200mL。将海藻酸钠酵母混合液装入将海藻酸钠酵母混合液装入20mL20mL注射注射器中，逐滴加入到器中，逐滴加入到0.2mol/L0.2mol/L氯化钙溶氯化钙溶液中，搅拌成珠（固定酵母）。液中，搅拌成珠（固定酵母）。 四、实验步骤 3.用蒸馏水洗涤固定酵母2次后，加入到灭过菌的200mL沙保培养基中（其中加入1mg青霉素）。 4.将固定酵母于28静置培养2天后观察，可见沙保培养基中有大量的CO2气泡产生，嗅气味有酒香；用刀片切开固定酵母，镜检可见大量密集的酵母菌。四、实验步骤四、实验步骤 1.1.海藻酸钠溶液滴进氯化钙溶液中为什海藻酸钠溶液滴进氯化钙溶液中为什么会凝固？么会凝固？ 2.2.固定化细胞与游离细胞比较，有什么固定化细胞与游离细胞比较，有什么优点？优点？五、结果与讨论