第七章 基因重组与基因工程一 选择题【A型题】1催化位点特异的重组的酶是 A逆转录酶B整合酶CDNA聚合酶D限制性内切酶EDNA连接酶2由整合酶催化、在两个DNA序列的特异位点间发生的整合称 A位点特异的重组B同源重组C基本重组D随机重组E人工重组3发生在同源序列间的重组称为 A基本重组B位点特异的重组C随机重组D人工重组E非位点特异的重组4DNA克隆不包括下列哪项步骤 A目的基因的获取B构建合适的表达载体C外源基因和载体连接D用抗药性标志选择法筛选转化菌E将重组DNA导入受体菌5不需要DNA连接酶的是 ADNA复制B光复活C切除修复D基因工程E重组修复6关于质粒的叙述， 错误的是 A大小约为数千个碱基对B双链线性分子C存在于大多数细菌胞质D易从一个细菌转移入另一个细菌E常带抗药基因7某限制性内切核酸酶切割5GGAATTCC3序列后产生 A5突出末端B3突出末端C5及3突出末端D5或3突出末端E平末端8限制性核酸内切酶识别序列的特点是 A超螺旋结构B螺旋结构C回文结构D锌指结构E串联重复序列9cDNA文库包括该种生物 A全部遗传信息B所有蛋白质的编码基因C某些蛋白质的编码基因DrRNA基因EtRNA基因10不能用作克隆载体的DNA是A质粒DNAB噬菌体DNAC细菌基因组DNAD腺病毒DNAE逆转录病毒DNA11常用质粒载体的特点是 A为线性双链DNA分子B为环型单链DNA分子C具有自我复制能力D含有同一限制性内切酶的多个切点E缺乏表达外源基因的能力12基因克隆载体应具备的基本条件是 A含有耐药基因B具备表达调控元件C具有转录能力D具有翻译能力E具有自我复制能力13关于建立cDNA文库的叙述，错误的是 A从特定组织中提取mRNAB从特定组织中提取DNAC用逆转录酶合成与mRNA互补的单股DNAD用DNA聚合酶，以单股cDNA为模板合成双链cDNAE双链cDNA与适当载体连接14基因工程中不需要 A限制性内切酶B基因载体CDNA连接酶D末端核苷酸转移酶E核酶15连接目的基因与载体不能采用 A粘端连接B平端连接C同聚物加尾连接D人工接头连接E非共价键连接16在DNA重组中，催化形成重组DNA分子的酶是 ADNA聚合酶B逆转录酶C解链酶DDNA连接酶E拓扑异构酶17不属于回文结构的双链DNA序列(仅列出其中一条链序列)是 AAGAATTCTBTGAATTCACGGAATTCCDCGTTAAGCEAGATATCT【X型题】18DNA重组的步骤包括 A用PCR技术合成大量的重组DNAB将外源性DNA与载体连接C将重组DNA引入受体细胞D培养细胞以扩增重组DNAE筛选出含有重组体的克隆19关于限制性内切酶的叙述，正确的是 A一类能识别单链DNA中特定碱基顺序的核酸水解酶B大部分类酶识别的DNA序列呈二元旋转对称C酶切产生的末端是粘性末端或平末端D不同的限制性内切酶酶切产生的末端不同E辨认的核苷酸序列一般为4或6 个核苷酸20关于质粒DNA的叙述，正确的是 A是基因组DNA的组成部分B具有独立复制功能C含有目的基因D具有限制性内切酶酶切位点E含有抗生素抗性基因21载体必需具备的特点是 A本身是一个复制单位，具有复制起点B插入外源DNA不影响载体本身的复制C进入细胞后用自身酶系进行复制D易进入受体细胞E易于鉴定和筛选22载体和目的基因的连接效率最高而且是定向连接的 A两个不同的粘性末端B两个相同的粘性末端C一个粘性末端和一个平端D两个酶切产生的平端E两个由粘性末端补平产生的平端23同聚物加尾连接法连接目的基因与载体需要 A核酶B限制性核酸内切酶C末端核苷酸转移酶DDNA连接酶EDNA拓扑异构酶24在分子克隆中，目的DNA可来自 A原核细胞染色体DNAB真核细胞染色体DNAC真核细胞mRNA反转录的cDNAD聚合酶链式反应E人工合成的DNA二、名词解释1. DNA cloning 2. 限制性核酸内切酶 3. Gene library三、简答题1. 在基因克隆中，目的基因有哪些主要来源?2. 常用的限制性核酸内切酶有哪些特点?3. 连接目的基因与载体的方式主要有哪些?4. 简述基因克隆的基本过程5. 理想的基因克隆载体应具有哪些条件?质粒为什么能作为基因载体?参考答案一 选择题1B 2A 3A 4B 5B 6B 7A 8C 9C 10C11C 12E 13B 14E 15E 16D 17D 18BCDE 19BCE 20BDE 21ABDE 22. AC 23CD 24ABCDE二、名词解释1. DNA克隆又称基因克隆或重组DNA。应用酶学的方法，在体外将各种来源的遗传物质同源的或异源的、原核的或真核的、天然的或人工的DNA与载体DNA结合成一具有自我复制能力的DNA分子复制子，继而通过转化或转染宿主细胞、筛选出含有目的基因的转化子细胞，再进行扩增、提取获得大量同一DNA分子。2. 限制性核酸内切酶：是能够识别DNA的特异序列，并在识别部位或其周围切割双链DNA的一类核酸内切酶。这类酶存在于细菌体内，具有限制外源DNA侵入的作用，对细菌遗传性状的稳定遗传具有重要意义。限制性核酸内切酶可分为三类。类限制性核酸内切酶是基因克隆中常用的重要工具酶。3. 基因文库是指提纯生物体的全部DNA，用限制性核酸内切酶随机切割成长短大致相同的数以万计的片段，将所有片段重组于同一类载体上，便得到许多重组体，将重组体全部转化入宿主菌中保存起来，就形成基因文库。基因文库有二种，用基因组总DNA制备的叫G-文库；用细胞全部mRNA经反转录制备全套cDNA后建库，则称c-文库。三、简答题1目的基因的主要来源有：(1)从染色体DNA中直接分离：主要针对原核生物。(2)化学合成法：由已知多肽的氨基酸序列，推得编码这些氨基酸的核苷酸序列，利用DNA合成仪人工合成其基因(3) 基因组DNA：分离组织/细胞染色体DNA，利用限制性内切核酸酶将染色体DNA切割成片段，与适当的克隆载体连接后转入受体均扩增，即获得基因组DNA文库，用核酸探针将所需目的基因自基因文库中“钓”取出来。 (4) 从mRNA合成cDNA：提取mRNA，利用反转录酶合成与其互补的DNA（cDNA）分子，再复制成双链cDNA片段，与适当载体连接后转入受体菌，即获得cDNA文库，然后采用适当方法从cDNA文库中筛选出目的cDNA.。(5)PCR方法扩增目的基因。2型限制性核酸内切酶(限制酶)是基因工程中常用的重要工具酶，是一类能识别双链DNA分子中特异核苷酸序列的核酸内切酶，常用限制酶主要有以下特点：(1) 均来自于微生物，并以其来源的微生物学名进行命名；(2) 分子量小，仅需Mg2+作为辅助因子，无需ATP；(3) 识别特异性DNA双链顺序，在序列内特异切割产程特异性DNA片段(4) 识别序列长度：连续的4/6/8bp；(5) 识别序列特点：呈二元旋转对称，称回文结构，富含GC；(6) 有三种切口：5端突出的粘末端（如Hind ）、3端突出的粘末端（如Pst） 平末端（如Hpa）3连接目的基因与载体的方式主要有：(1)粘性末端连接：同用一限制酶切割载体及目的基因后，产生完全相同的粘性末端，可以用DNA连接酶直接进行共价连接。或两种不同的限制性内切核酸酶切割产生的配伍末端（相同类型的粘性末端）之间也可以进行粘末端连接。(2)平端连接：某些限制酶切割DNA后产生平头末端，由于平头末端5端带有磷酸，3端带有游离羟基，可在DNA连接酶作用下直接连接，并且不管末端序列如何均可连接，但连接效率要比粘性末端之间的连接低。(3)同聚物加尾连接：利用同聚物序列，如多聚与多聚T之间的退火作用完成连接。如果载体和目的基因上找不到共同的酶切点时，可经不同的限制酶切割后，用单链核酸酶将其各自的粘性末端切平，在末端核苷酸转移酶作用下，在DNA片段末端加上同聚物序列，制造出粘末端，而后连接。(4)人工接头连接：将磷酸化接头/适当分子连到平末端，使产生新的限制性酶切核酸酶位点，再用限制酶切割，产生粘末端后连接。4基因克隆的主要过程包括分、切、接、转、筛五大步骤。分：是指分离目的基因和基因载体，切：是指利用限制性核酸内切酶分别切割目的基因和基因载体，经切割后产生粘端切口或平端切口。接：是指利用连接酶将目的基因与载体共价连接形成DNA重组体。转：是指将DNA重组体转入细胞，可通过转化、转染、感染的方式转入。筛：是指对含有DNA重组体的宿主细胞(阳性克隆)进行筛选和鉴定并加以扩增。5.理想的基因克隆载体应具备：(1)在宿主细胞内可自行复制，并保持一定的拷贝数；(2)有适宜的限制性核酸内切酶切割位点，最好对同一种限制酶有单一切点；(3)载体分子应尽量小，可插入较大的外源DNA而不影响复制；(4)有一定的筛选标记，便于识别和筛选。质粒可作为载体是由于其本身具有以下特点：(1)质粒是存在于细菌染色体外的小型环形双链DNA分子，分子大小为2，3kb几百kb不等；(2)质粒份子本身是具复制功能的遗传结构，可在宿主细胞内独立自主地复制，并在细胞分裂时保持恒定地传给子代细胞；(3)可在细菌内保持一定的拷贝数，并易于从一个细菌转移入另一细菌；(4)含有EcoRI、Hind、BamHI等多种限制酶切割位点；(5)质粒带有某些遗传信息，会赋予宿主细胞一些遗传性状，如对青霉素或重金属的抗性等，可作为选择标志，便于筛选；(6)具有基因表达的功能，可构建成表达载体，在原核细胞中进行目的基因的表达；因此天然的质粒经过人工改造，可构建成理想的基因载体。