血p53蛋白对肺癌诊断价值探究作者：沈巨信秦娥周国忠韩东方贺群孙健【关键词】蛋白对肺癌肺癌发病率逐年增高，早期诊断对提高患者生存率至关 重要。p53蛋白是肺癌相关基因p53基因编码的核酸蛋白， 在癌变的早期阶段，即可在血液中出现1 。本研究采用 新技术一流式细胞术(Flow Cytometry, FCM),分析FCM定 量检测肺癌患者血细胞中p53蛋白水平，探讨p53蛋白在肺 癌诊断中的应用价值。1临床资料1. 1 一般资料肺癌组为2006年5月至2007年8月本院确诊患者， 共30例，男21例，女9例，平均年龄(60. 810. 44)岁， 所有入选的患者均经纤维支气管镜(简称纤支镜)肺活检、 经皮肺穿刺活检、手术等组织病理学确诊，排除接受过放、 化疗或肺癌手术，有严重心肺功能障碍不能耐受纤支镜检查 者。其中鳞癌16例，腺癌8例，小细胞癌6例；按国际抗 癌联盟(UICC1997)分期标准进行临床TNM分期，I期6例、 II期10例、III期9例、IV期5例。同期收集肺部良性疾病 组30例为对照组，包括肺结核5例、支气管扩张6例、肺 炎15例，慢性支管气炎4例，平均年龄(58. 011.66)岁， 经细菌学、影像学、病理学确诊。1. 2标本采集所有受检对象均抽肘静脉血5ml,放置 -2(rc冰箱内保存待检。1. 3实验步骤外周血细胞内p53蛋白检测 采用双色标记法，取外 周血 2ul EDTAK2 抗凝，CD45-PCY 10 u 1+100 u 1 全血，避 光反应15min。PSB离心沉淀物制成悬液，用试剂 intrapreptm(Immunotech公司)单细胞固定和破膜。加破膜 剂I液150 ul,振荡后放15min,加FPBS离心洗涤，取沉 淀物，加破膜剂II液150 ul,轻轻混匀放置5min,加20 u 1 p53流式细胞仪检测，轻轻摇匀12s,放置20min,加PSB lml离心洗涤，上机，仪器方案“2006p53”，计数1万个细 胞中p53表达百分率作为观察数据。1.4主要试剂及仪器p53蛋白抗体试剂盒购自Cell Signal Technology公 司。流式细胞仪由美国公司提供，型号为Coulter EPICS XLo1.5统计学处理计量资料用(xs)表示，均数间比较采用t检验， 以Excel 2000建立数据库，应用受试者工作特征曲线(receiver opera ting charac teris tic curve, ROC) 分析 法综合评价诊断实验的实用价值。所有统计计算及绘图采用 SPSS 11.0系统软件完成。2结果2. 1两组患者血p53蛋白检测水平比较肺癌组(2.16土 1.88)、对照组(0. 930, 51), 2 组比 较，差异有显著性(P<；0.01)2.2肺癌患者血p53蛋白水平与病理类型的关系p53水平小细胞肺癌6例,为(4.762. 92)、非小细 胞肺癌24例，为(1.460. 52), 2组比较,差异有显著性P 0. 9时表示诊断准确性较高，在临床诊断中可作为重要的 诊断依据。本研究显示：使用p53试剂进行检测，ROC 下面积为0. 793, p53有较好的诊断准确性。当取p53蛋白 诊断点为1265时，其诊断肺癌的敏感性为70%,特异性为 83.3%,准确率为76.7%。目前关于p53蛋白检测方法多用免疫组化和酶联免疫吸 附法，免疫组化需要组织标本，取材困难不易于术前诊断， 酶联免疫吸附法虽因标本易取、操作简便而受到临床医生关 注，但检测阳性率低，据报道阳性率仅14%23% 10, 检测率高低受肿瘤细胞是否释放蛋白或释放的多少有关，以 及释放到胞外的蛋白稳定性下降易被清除也影响到检测的 阳性率。所以肿瘤细胞内虽有p53基因突变、p53蛋白积聚, 但血清中不一定存在P53蛋白或浓度低而检测不到。而采用 FCM直接检测细胞内p53蛋白，避免了以上缺陷，本文检测 的血p53蛋白在肺癌组中阳性率达70%,明显高于对照组 16. 7%o因此FCM检测肿瘤具有简便、快速、准确的优点， 在恶性肿瘤的诊断上具有重要意义。血p53蛋白作为新型肿瘤标记物，在辅助诊断肺癌是 可行的，其特异性高，在SCLC诊断价值优于NSCLC,为肺癌 的无创性诊断提供了一种手段。但采用FCM检测血细胞中p53 蛋白临床报道尚不多，其对肺癌的诊断价值有待进一步研 究。【参考文献】1 Luo JC, Zehab R, Anttila S, et al. Detection of serum p53 protein in lung cancer patients. J Occup Med, 1994, 36 (2)： 155160.2 Gemba K , Ueoka H , KiuraK , et al.Immunohistochemical detection of mutant p53 protein in small-cell lung cancer： relationship to treatment outcome, Lung Cancer. 2000, 29(1):2331.3 Bennett WP, Hussain SP, Vahakangas KH, et al. Molecular epidemiology of human cancer risk： gene-environment interactions and p53 mutation spectrum in human lung cancer J Pathol. 1999 , 187(1):8 18.4古涛，刘永，王伟，等肺癌端粒酶活性、p53突变 蛋白及细胞增殖DNA合成期比例相关研究.徐州医学院学报, 2002, 22 (1)： 3033.5董光同，胡咏武，高元光，等.肺癌切除组织和支 气管切缘p53基因突变的研究浙江临床医学,2001, 3(4): 229-300.6 Sheikh MS, Fornace AJ. Dea th and decoy recep tors andp53-mediatedapoptosis Leukemia.2000 ,14(8):1509 1513.7周欣，李龙芸，古力夏提.HnRNP A2/B1与p53在肺癌 患者痰中的表达癌症进展杂志,2006,4(2)： 172175.8 Luo JC, Neugut Al, Garbowski G, et al. Levels of p53 an tigen in the plasma of patients with ade no mas and carcinomas of the colon. Cancer Lett. 1995 , 91 (2):235-240.9 Swets JA, Measuring the accuracy of diagnostic systems. Science, 1998, 240 (4857)： 12851293.10 Barbati A, Mariani L, Porpora MG, et al. Serumevaluation of p53 protein in patients with gynaecological cancer .Anticancer Res2000,20(2A)： 1033-1035