免疫学实验 HBsAb 检测（ELISA法）实验目的实验原理实验用品1. 待检血清（采血管，采血针，消毒棉球，绑带，离心机）2. 包被HBsAg的微孔板3. HBsAg-HRP4. HBsAb阳性对照血清5. HBsAb阴性对照血清6. PBS-T20缓冲液7. 过氧化氢（底物A）8. TMB（底物B）9. 2M H2SO4 (终止液)10. 封口膜11. 移液枪，枪头12. 滤纸13. 培养箱14. 检测仪 15. 打印机，打印纸实验方法与步骤1. 编号2. 加样 每孔50ul (待检血清, 阳性对照, 阴性对照，空白对照)3. 加HBsAg-HRP, 每孔50ul4. 37 25min5. RT 5min6. PBS-T 洗5次, 每次浸泡30-60s，滤纸上扣干。7. 每孔加底物A,B各50ul，轻拍混匀，避光37 15min（锡纸或带盖搪瓷盒）8. 加终止液，每孔50ul，混匀9. 检测仪 450nm, 630nm（双波长检测）, 30min检测完成。10. 打印机参数设定，打印机打印结果。结果检测与判定1、吸光光度法 2、比例法3、滴度法 4、吸光度值直接表示阳性的程度5、标准曲线法临界值计算临界值 = 阴性对照A值均值N2.1 （阴性对照A值小于0.05时，按0.05计）结果判定样品A值/阴性对照A值1 样品A值/阴性对照A值1阴性对照A值0.1 或阳性对照A值 0.4， 实验应重新进行。