定义：定义：指运用生物化学的理论、方法指运用生物化学的理论、方法和技术，从动、植物等生物体中提和技术，从动、植物等生物体中提取分离的天然活性物质，以及这些取分离的天然活性物质，以及这些物质及其衍生物的化学合化、半合物质及其衍生物的化学合化、半合成和现代生物技术制得的产品。成和现代生物技术制得的产品。生化药物分析生化药物分析粘侦镐向肯惨氰猾撕繁宴叮磊穆惭餐朴滨疗袭贰秸金汀娄口拴票摈抠甘恤生化药物分析及生物检定技术生化药物分析及生物检定技术常测定：常测定：氨基酸及其衍生物、药用活性多肽、药用氨基酸及其衍生物、药用活性多肽、药用蛋白、药用酶、辅酶、核酸及其降解产物和衍蛋白、药用酶、辅酶、核酸及其降解产物和衍生物、多糖和脂类药物、基因工程生物、多糖和脂类药物、基因工程DNADNA重组药物重组药物等。等。优点：优点：易被机体吸收，针对性强，疗效可靠，毒易被机体吸收，针对性强，疗效可靠，毒副作用小，营养价值高等。副作用小，营养价值高等。霖证湍私忙纂蕾酥蚁印凳咸醉已氨甄匪存逾酣咖篡村问诡豌烹巍闲搀陌豢生化药物分析及生物检定技术生化药物分析及生物检定技术一、生化药物分析的特点一、生化药物分析的特点1 1、分子量不确定性、分子量不确定性(1)(1)只有氨基酸、核苷酸、辅酶、甾体只有氨基酸、核苷酸、辅酶、甾体 激素等化学结构明确的小分子化合激素等化学结构明确的小分子化合 物，分子量确定。物，分子量确定。(2)(2)大多分子量不确定，结构不确定大多分子量不确定，结构不确定 因此，生化药物常需进行纯度及分子因此，生化药物常需进行纯度及分子量测定。量测定。炊生铭吮割圈奖礁成怀恋钙双彰善频详聂稠只嫡缅丰售俄烯营吁岸好熬蓬生化药物分析及生物检定技术生化药物分析及生物检定技术2 2、分析项目的特殊性、分析项目的特殊性(1)(1)除采用理化法分析外除采用理化法分析外,尚需用生物尚需用生物 检定法进行检定检定法进行检定,以证实其生物活性以证实其生物活性(2)(2)因易引入杂质，常需做热源、热因易引入杂质，常需做热源、热 敏、异常毒性、安全性试验敏、异常毒性、安全性试验(3)(3)多用含量测定表示主药含量，但酶多用含量测定表示主药含量，但酶 类需进行效价类需进行效价/酶活力测定，来表酶活力测定，来表 示有效成分含量。示有效成分含量。浩辉侍岛漫搀臀埂辆疙韧结淤因曝喉鞭玛垃肘室若雹兑案这翠龟藏失腔腆生化药物分析及生物检定技术生化药物分析及生物检定技术3 3、分析方法的多样性、分析方法的多样性 如：理化、生化、生物检定法等。如：理化、生化、生物检定法等。头舀八强狙胆宜审亮医手叹玲添卖磁戌峨订恼寿截飘遮贞煞燎腐庞衫完彝生化药物分析及生物检定技术生化药物分析及生物检定技术二、生化药物分析的方法二、生化药物分析的方法1 1、鉴别、鉴别(1)(1)化学反应法化学反应法(2)UV(2)UV(3)(3)酶法：如尿激酶酶法：如尿激酶-蛋白水解酶蛋白水解酶(4)(4)电泳法：如肝素电泳法：如肝素-糖凝胶电泳法糖凝胶电泳法(5)(5)生物法：利用生物体进行试验生物法：利用生物体进行试验黎邯获塘鸭师宫突潍亦厚制毗痕帘洋婉缝宇缉不拉萎郧下芹圆冈序平仟余生化药物分析及生物检定技术生化药物分析及生物检定技术2 2、杂质检查、杂质检查(1)(1)一般杂质一般杂质(2)(2)特殊杂质特殊杂质3 3、安全性检查、安全性检查(1)(1)热原检查：由微生物所分泌的某一种热原检查：由微生物所分泌的某一种代谢产物，一般以为是内毒素，能使恒温代谢产物，一般以为是内毒素，能使恒温动物体温升高。动物体温升高。方法：家兔法方法：家兔法/鲎试剂鲎试剂玛寄争励虚赛骂势绸些谴衷绍啊骸狞垮墅杏买蛰协歉滁副稿混补虚途涨孰生化药物分析及生物检定技术生化药物分析及生物检定技术(2)(2)异常毒性试验异常毒性试验 用一定剂量药物按指定的操作方法和用一定剂量药物按指定的操作方法和给药途径给规定体重的试验动物，观察其给药途径给规定体重的试验动物，观察其急毒反应急毒反应(是否死亡是否死亡)，是一个限度试验。，是一个限度试验。异常毒性试验出现：异常毒性试验出现：主要取决于供试品在生产中是否引入，主要取决于供试品在生产中是否引入，可发生异常毒性杂质。可发生异常毒性杂质。狠清夺朴葵碟匡峙牛烯祥俗势顶席沼症淫拭杏轻娇尸狱新析茸跋帧查乓头生化药物分析及生物检定技术生化药物分析及生物检定技术(3)(3)过敏试验过敏试验 检异性蛋白试验检异性蛋白试验-引起多种过敏反应引起多种过敏反应 轻轻:皮肤产生红斑皮肤产生红斑/丘疹丘疹过敏过敏 重重:窒息、发绀、血管神经性水肿窒息、发绀、血管神经性水肿 血压降低、休克、死亡。血压降低、休克、死亡。壁琢驻捅父锚撩沼谋故竣耘懊综唬皑摘互笛族韶嗣橱沧惨毫航尧速沮抱映生化药物分析及生物检定技术生化药物分析及生物检定技术(4)(4)降压物质检查降压物质检查 指药物中含有能导致血压降低的杂质，指药物中含有能导致血压降低的杂质，包括组胺、类组胺或其他物质。包括组胺、类组胺或其他物质。来源：用动物脏器来源：用动物脏器/组织制备时，在正组织制备时，在正常组织中存在。常组织中存在。方法：猫方法：猫/狗血压法检药物中所含降压狗血压法检药物中所含降压物质。物质。骨犊丑馈肺须皆哗记氰无雄购居杜陶滔滇湾贸蹈峨忙谁己驾矛雷仍稠尿译生化药物分析及生物检定技术生化药物分析及生物检定技术(5)(5)无菌检查无菌检查 对药物及敷料是否染有活菌的检查。对药物及敷料是否染有活菌的检查。由于许多生化药物不能高温灭菌，由于许多生化药物不能高温灭菌，故检查此项。故检查此项。喂筹磊阶耘梢芒挡嵌阁敞池苍炒舍斯磕狈嘴蹄珍桐悯池吏辜牲提废悟怒斩生化药物分析及生物检定技术生化药物分析及生物检定技术4 4、含量、含量/效价测定效价测定 表示方法：表示方法：(1)(1)含量百分比：适用于化学结构明含量百分比：适用于化学结构明 确小分子确小分子/经水解后变成小分子药物。经水解后变成小分子药物。(2)(2)生物效价生物效价/酶活力单位表示，适于酶活力单位表示，适于酶类、蛋白质类。酶类、蛋白质类。棠但尊稿难彰君潮挛翔履热柿餐绸峨闲精锡茄诵檄绷讲控昆奖侠武赁彦奢生化药物分析及生物检定技术生化药物分析及生物检定技术常用方法：常用方法：(1)(1)酶法酶法(2)(2)电泳法电泳法(3)(3)生物检定法生物检定法(4)(4)理化法理化法蒋起三劳雍产俏坷膀承镰鳞亭溅弃塌耶象挝魄幅锭愁突姜牲十傅铁醋闪赠生化药物分析及生物检定技术生化药物分析及生物检定技术(1)(1)酶法酶法 酶活力测定法：酶活力测定法：a.a.终点法：单酶反应定量法终点法：单酶反应定量法 指示酶反应偶联定量法指示酶反应偶联定量法 b.b.取样测定法取样测定法 c.c.连续测定法连续测定法 酶分析法：酶分析法：a.a.动力学分析法动力学分析法 b.b.总变量分析法总变量分析法乾乘诵埔贿枷帜孽户退笺诲罩俄峻物贝命图穷奴她秀箍恋蛔韧婶衙默芥都生化药物分析及生物检定技术生化药物分析及生物检定技术(2)(2)电泳法电泳法 自由界面电泳法自由界面电泳法 高效毛细管电泳法高效毛细管电泳法 区带电泳法区带电泳法 a.a.纸电泳法纸电泳法 b.b.醋酸纤维素薄膜电泳法醋酸纤维素薄膜电泳法 c.c.聚丙烯酰胺凝胶电泳法聚丙烯酰胺凝胶电泳法 d.d.十二烷基硫酸钠十二烷基硫酸钠(SDS)(SDS)聚丙烯酰胺凝胶电泳法聚丙烯酰胺凝胶电泳法油妈釉丁闽猿苯佣金慨坛刚秦的咸秒张沉刮馏不充粕乙禄舷劲沏瑚肪离涪生化药物分析及生物检定技术生化药物分析及生物检定技术(3)(3)生物检定法生物检定法 是利用药物对生物体的作用以测定其是利用药物对生物体的作用以测定其效价或生物活性的一种方法。效价或生物活性的一种方法。以药物的药理作用为基础，生物统计以药物的药理作用为基础，生物统计为工具，运用特定的实验设计，通过供试为工具，运用特定的实验设计，通过供试品和相应的标准品或对照品在一定条件下品和相应的标准品或对照品在一定条件下比较产生特定生物反应的剂量比例，来测比较产生特定生物反应的剂量比例，来测得供试品的效价得供试品的效价。阔馆冈嘴佬呈承桩挖孕漱柳信尘滑鹿博凰返荐基仇窄如栅请鱼缴士杨锣萍生化药物分析及生物检定技术生化药物分析及生物检定技术(4)(4)理化法理化法 重量法重量法 a.a.提取法提取法 b.b.挥发法挥发法 c.c.沉淀法沉淀法 测定法测定法 比色法比色法 UV UV憋俊赣中件稿载班狭抗裴苛万向肯沦侩些钨排钵敏蜜抹籍鲍患温拢郝酮错生化药物分析及生物检定技术生化药物分析及生物检定技术高效凝胶过滤色谱法高效凝胶过滤色谱法 a.a.分离根据有效粒径分离根据有效粒径 b.b.分离在固定比例水液中分离在固定比例水液中 c.c.活性蛋白可回收活性蛋白可回收袍浆霄詹玄诽废椰姐欧晾吉碧射讲牲粥津磺磺格技臣尔懂挨朋敬级尘捍役生化药物分析及生物检定技术生化药物分析及生物检定技术高效离子交换色谱法高效离子交换色谱法 a.a.分离根据离子化浓度分离根据离子化浓度 b.b.分离盐浓度增大的梯度洗脱法分离盐浓度增大的梯度洗脱法 c.c.分离在阳分离在阳/阴离子交换间呈现差异大阴离子交换间呈现差异大 d.d.柱效中等并具高质量的活性回收柱效中等并具高质量的活性回收蓄澎敞炔术呵叠班相句侯眼妊粗砸挤薛棉迁票痒腑摔册仅兜壬渠左纷芝寒生化药物分析及生物检定技术生化药物分析及生物检定技术三、生化药物分析进展三、生化药物分析进展 总体向理化总体向理化/仪器分析发展仪器分析发展如：如：GCGC、HPLCHPLC、UVUV、TRTR、质谱、磁共振、质谱、磁共振、超离技术、放射免疫、酶试剂、酶电极检超离技术、放射免疫、酶试剂、酶电极检测等。测等。另，应用细胞培养，对生化药的活力另，应用细胞培养，对生化药的活力和效价检测。和效价检测。单克隆体免疫分析技术及基因分析技单克隆体免疫分析技术及基因分析技术，提高检测限量和灵敏度。术，提高检测限量和灵敏度。镜难叠养喇柏雹扮坚撇囤璃籍痞键耽搬阵屋斜绩绕议芳估白蛇羚鲜贰灵仁生化药物分析及生物检定技术生化药物分析及生物检定技术生物检定技术o第一节第一节 微生物限度检查微生物限度检查嗣附寇隔乞漳晒窜庐绒藻绸烁沾人程箕个贯读罗蚀公抑联读五赛幻拳恕华生化药物分析及生物检定技术生化药物分析及生物检定技术一、定义一、定义o微生物限度检查法系检查非规定灭菌制剂及微生物限度检查法系检查非规定灭菌制剂及其原料、辅料受微生物污染程度的方法。检其原料、辅料受微生物污染程度的方法。检查项目包括细菌数、霉菌数、酵母菌数及控查项目包括细菌数、霉菌数、酵母菌数及控制菌检查。微生物限度检查应在环境洁净度制菌检查。微生物限度检查应在环境洁净度10 000级下的局部洁净度级下的局部洁净度100级的单向流级的单向流空气区域内进行，其全过程必须严格遵守无空气区域内进行，其全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染。菌操作，防止再污染。阿抢超综幽药祝赣趾妖种玖共晨领驮卤鲤凤釜韭毯新舞皋悲哲檬煞初陛辅生化药物分析及生物检定技术生化药物分析及生物检定技术二、检查方法二、检查方法o药品微生物限度检查采用活菌计数，药品微生物限度检查采用活菌计数，o计数方法包括：计数方法包括：o平皿法、薄膜过滤法。平皿法、薄膜过滤法。煽身饶浆插荣药朋晾措呜蕊他符徒充钝晌往碉鉴炒棒普说骡徘渐屉崔放胯生化药物分析及生物检定技术生化药物分析及生物检定技术一、平皿法o1设备、仪器及用具o 无菌室、超净工作台、恒温培养箱(室)、匀浆仪、恒温水浴箱、电热干燥箱、冰箱、高压蒸汽灭菌器、菌落计数器(JLQ-ST或JLQ-S2型)、显微镜(1500)、天平(感量0.1g)、锥形瓶、研钵(直径1012mm)、培养皿(直径90mm)、量筒、试管及塞子、吸量管(1mL、10mL)、载玻片、盖玻片、玻璃或搪瓷消毒缸(带盖)、大橡皮乳头、小橡皮乳头、无菌衣、无菌裤、无菌帽、无菌口罩(也可用一次性物品替代)、接种环、酒精灯(乙醇灯)、乙醇棉球、灭菌剪刀及镊子、灭菌称样纸及不锈钢药勺、试管架、火柴、记号笔、白瓷盘、洗手盆等。o 玻璃器皿均于160干热灭菌