新疆医科大学 硕士学位论文 电针对老年性痴呆大鼠记忆功能影响的实验研究 姓名：张晓琳 申请学位级别：硕士 专业：针灸推拿学 指导教师：刘智艳 201109 研究生：张晓琳 摘要 阴交穴可以改善a大鼠一般情况，加快a大鼠体重增长，减少迷宫测试达标所 TTTTTT TTTTt TTTTTTTTT TTTttttttt TTTTT< TTTTTT： TT TTTttttttt TTTTTTTTTTTT TTTTTTTTTTTT TTTTTTTTTTT 域 TTT, TTTTT. TT T TT TTT TTTTTTT T T TT TTlI TT tT T T t TTTTTJfT TTTTTTT培TTTTT T TT T TTT TTTTTTTTTTT TT TTT TTTTTTTTTTT TTTttTTTT TT TTTT TTTTTTTTTTT TTTTT TT TTl TTT 1111 1111 1 IIIIIII 却 II 域 1111培 IIIIIII II. Illi: IIIII Ill箧llllll 111妆I AAA 老年斑 AAA AAAA AAAAA 反义磷酸硫解酶低聚核昔酸 老年性痴呆即阿尔茨海默病。。。。。。。。。城。是一种主要表现为认知 功能障碍、精神行为异常及日常生活能力丧失的神经系统进行性变性病。随着社会 人口老龄化现象的日益严重，。的发病呈现出明显的增长趋势，。已成为危及老 年人生命的第四大病斟U，仅次于心血管病、癌症、脑卒中。这已成为严重威胁老 年人生活质量的主要疾病之一。 低，。使女性的死亡率增加° %。国外学者对°°°°柿辖。醒芯俊°】，。患者 生存时间为°°°辍S醒"摺。】估计，到。。年，我国的。患者将达到。。万人， 是世界上。患者增长速度最快、人数最多的国家。。的发病在老年期，早期表 已有负面的影响，我们应当重视对。的防洲。。 进行性的，多种较高级的皮层功能被损害，意识仍然存在。。在语言、记忆、视 觉空间技能、情感、行为、人格和认知。爬诚扑恪C卸稀.部虾徒饰鑫侍傅斐。 等精神活动中，至少有三项受损。发病机制及病因尚不完全清楚，。的病理特征 °°。。瑶。°, °°°°城。聚集而形成。。。是 小动脉的血管淀粉样变性均为发病诱因。 现今西医针对。的治疗采用的是对症治疗。。在治疗上虽然取得了一些进 展，但仍然存在着许多问题。目前。的治疗尚无特别有效的手段，基本是达到减 疗效不佳，易导致癫痫、偏瘫、感觉缺失、视野缺损、语言障碍等。这两者的治疗 都不能防止。症状的进行性加重。因此，防治本病的方法需要我们进一步研究。 针灸作为一种独特、安全、方便的自然疗法被广泛运用于。的治疗，其疗效主要 体现在：改善患者症状及生活质量、增强体质、延缓病程、减少西药用量、提高抗 病能力等方面。针灸对本病的治疗具有肯定的疗效，无明显副作用，且可长期使用。 但有关针灸治疗。作用机制的研究甚少。所以，本课题运用电针治疗方法，并应 老年性痴呆归属于中医诊断的0痴呆、£)0郁证D等范咧A,在《景岳全书。杂病论》 髓海失用，髓少不能养脑，痴呆随之而来。《内经精义》说：。事务之所以不忘，赖 此记性，记在何处，则在肾经。益肾生精，化为髓而藏于脑中。D《本草纲目》强调： 6脑为元神之府。，，中医认为脑为6髓海D,为奇恒之腑居颅内，由髓汇聚而成，它支 配人的精神意识思维活动。随着年龄增加，肾虚则髓海不足而脑失所养，导致脑的 统驭、协调形体的作用减退，神机匿藏于内而形体失制于外，会引发此病。 大鼠的学习记忆功能影响。 减退的功效。按照《中国兽医针灸穴位学》AA定位。前期工作基础扎实，课题组前 其作用机理可能是通过抗氧化实现的。本研究采用A砰垩A鞍A. AAAAA 行为、体重、学习记忆功能及抑制自山基反应提高抗氧化酶活性的影响。为电针治 疗］大鼠记忆功能减退提供新思路及方法。 内容与方法 11主要器材 1型电迷宫：中国医学科学院药物所研制 1 %水合氯醛：上海山浦化工有限公司 真空采血器：湖南安信医用高分子材料有限公司 10低温冰箱：北京医疗设备厂 解状的111呈凝聚态。 11样本含量的估计 样本大小即为样本含量，观察实验动物例数的多少，具有一定可靠性的研究结 论，需要受试对象在设计阶段估计最少的对象数。本实验采用多个样本均数比较的 样本含量估计公式计算样本含量。公式如下: nn造模方法 模型复制依据参考文献【nn炷#n笛Kl>n. n作为n大鼠的造模试剂。 有差异nn. nnn碧影炷3召Knnn射。模型组于实验开始后，不施电针刺激。每 nn动物随机分组及基线比较 鼠间体重变化量及n偷维怨n车坐晁n柩盗反问n冉希n钥糊杓臣蒲E庖nn 口造模后体重肉造模前迷宫达标所需训练次数 含量，每周一次称大鼠体重，观察一般情况。 ”实验操作 时间：早上%点〜％点。 假手术组和模型组：同电针组每天给予抓取和固定。 骨度分寸法选取：睑墨堕：星三呈：三望奎 空：必£穴位于第％以腰椎 风府穴连接电针仪，足三里、三阴交连接电针仪，考虑大鼠能安静耐受，故施以断 ，标本米集 F胄取上清检测。采血后大鼠断头处死, I观察指标 F.「宰橹「脱0金宗「的测定 组织匀浆中f暮ff / —「「舛（芷「舛纫徊舛mg瞻坠芷「舛 结果评定 统计软件XXX xxf星灌慰HV渴碗圆妗糠表示，经正态性检验、方 差齐性检验和复合对称性检验，若资料服从正态分布、方差齐和复合对称性呈对称, 差分析进行统计推断；若不服从正态性、方差齐、复合对称性则采用秩和检验，检 查阅文献确定研究目的和内容 i 选择健康成年xx＞大鼠 上 X i 假手术组 上 脑组织右侧海马区注射XXX C型电迷宫试验、脑组织及血清xx＞删 上 整理数据、结果分析 X 上 得出结果、撰写论文 模型组和电针组造模一周后精神差，无食欲、行动缓慢，反应迟钝、嗜睡、体 造模前’ 造模后 口假手术组口模型组口电针组 图£髯榇笫管炷G昂蠹爸瘟坪第逮££变化 故采用重复测量资料的方差分析进行统计推断，进行两两比较£嘏掠£捎脱型电 提示模型组£大鼠已经出现学习记忆障碍：经治疗后电针组达标所需训练次数较 模型组减少££. £££钮帽型臣蒲0庖源S爰偈质踝橄啾齿禹£P妥£££££, 选模后 口假于术匿谀P妥樗艘乜针组 治疗后 33J1 /3 电针组 图3髯槟宰橹走3活性均数图 电针组 低于假手术组、电针组。 电针组 图4髯集宣4活性均数图 型组与电针组比较4444,差异有统计学意义，见表4巴4。 电针组 图4髯槃靛卑4活性均数图 表4各组大鼠血清444勘冉4又34 低于假手术组、电针组。 电针组 11 1动物模型经过多年的研究取得了一定的进展，可分为自然衰老性、损害性 和转基因性动物模型三大类，但至今还未发现一种能够完全模拟人类1病理、生 化及行为学改变的1动物模型。每一种模型都在某种程度或某些方面模拟了 1 的病理改变和临床症状，它们各自具有自己独特的适用范围和作用，又各有其优点 和不足，应根据不同的实验目的选择合适的1动物模型。目前由于创伤性实验不 可能应用于人类，临床上一般对病人进行无创性测试。本课题为了建立可靠的1 模型以进行实验研究，更好的模拟1的病理特征及临床症状变化，故本实验采用 1111, 11山档虫匀11脑内表达的淀粉样前体蛋白1111 主要用化学成分如大田软海绵酸11111111）然1111111111, 11k海人藻酸111111-淀粉样蛋白等在脑室或核团内注射，使之出现1 的病理、生化及行为学改变的典型表现11疲1,可分为两类： 11. 11 争淀粉样蛋白1111 111111阳性神经元缺 失，并出现海马11祟孕切谓褐氏赴11笫蜻难1凹旦沸斐。陆怠11。111取11 与造模的剂量和注射部位有关。脑内注入A损毁胆碱能神经元并诱导建立A动 AA. AA 筛选健康雄性成年AAA大鼠A只，由新疆医科大学动物中心提供，动物级 对A，锻楸碧鲤涸炷G坝胸炷：蟠铿晁A柩盗反问AA邢灾A钳AAAAA,符合 鼠精神较差，活动减少，行动较为缓慢，一周后观察大鼠状态基本正常。与假手术 组相比，模型组GG. GGG炷3闪＜s肽p妥橄啾解G籍胱GGGGG，提示 两组具有可比性。模型组造模后大鼠精神不振，食欲下降，活动减少，行动较为缓 慢，嗜睡，毛发没有光泽，两周后体重增长较假手术组和电针组缓慢，以上症状持 续存在。这与中医认为G的病因病机是i肾精不足、脑髓失养。比较接近。故本研 后一周大鼠精神状态较前好转，进食量增加，睡眠减少，活动增多，行动较快。一 般情况较模型组有所改善。 老年痴呆症是在老年前期及老年期出现的神经退行性疾病，以记忆、感觉、运 动及语言功能减退，人格和行为改变为特征。在发病的某一时期患者可出现抑郁及 精神症状【。】。G的发病机理分为G"波磐GW茉猿沾楼GGGGG GGGG， GCCC，GG海沾修CCCCCCC'C玲C， 其中最常见的是G，约占老年性痴呆发病率的GG。 QQ. GQ 自由基学说 随着年龄的增长，机体的防御及免疫系统功能逐渐下降，自由基清除系统的功 能减弱。有研究显示在机体组织细胞中GG瘢G的含量具有高度的特异性，共 同形成阻止活性氧损害的有效保护体系【翎。自由基大量出现，神经细胞膜和细胞器 基功能下降，脂质过氧化反应是由于大量的自由基与脑组织内的生物膜不饱和脂肪 突变、交链等影响，以至于蛋白质合成能力、合成蛋白质功能紊乱，从而出现记忆 力和智力减退。大量的报道表明，GGG克婺灵深脑龈叨G龈措GltG活性随 年龄的增高而降低，GG杯杂肽G镭倜G氏终G喙氐谋碉郑理G具有保护脑组织 功能、抗衰老方面有其重要作用GG俊a跚焰业取GG对快速老化的脑萎缩小白鼠模型 GO. GGG的脑组织GGu入赘孰墓G建G倦GGGISG的活性进行观察， 随着小鼠年龄增长的基础上，观察了针刺对快速老化的脑萎缩小白鼠模型的影响， 从而初步探讨了快速老化的脑萎缩小白鼠发生快速脑老化的机理，并研究了针刺治 疗脑老化的部分作用机制。结果显示针刺组脑组织GGGG'G活性明显高于对 照组XX xxxxxxx针刺可以提高 视/冲莫型鼠脑组织xxxx X 运用自由基、胆碱能学说，探讨针刺对拟濮型大鼠大脑皮质和海马具有的抗氧 XX X＞氧化应激学说 在狼病过程中，氧化应激有影响作用，脑神经元受损之前氧化应激已发生。 死亡之间。氧自由基的作用下【＞保地她可裂解生成X二者具有相互促进的效 粉样蛋白。两者的基本结构中都有被外氨基酸多肽。老年斑形成的始动因子 和核心成分均为X其是X＞恼X4冲回涟杀J怯xxxx＞个氨基酸跨膜蛋白 共同组成了 X＞碱渥由浏乍痉置诿腹餐灌枚xxxx＞经酶裂解并产生肽 段从而发生聚集，连接细胞膜后可使细胞发生变性。有报道显示【摩现.淀粉蛋白被 究推测，在加工过程中，非XXX＞赐返闹谱髀肪妒片揭种疲X用煽椭的路径 有紧密的关系。 被其激活，导致炎症因子和神经元毒性介质被排出从而造成对神经元的破坏。大量 II. II胆碱能受体激动药 在额叶皮层和海马区是i受体所在之处，外周有i和i受体。i活化在认知 及记忆方面有一定的影响，对其刺激活化可使记忆功能改善，因此患者服用i受 体激动药有利于患者增强记忆力。i受体激动药可增强神经递质释放，可增强的 调节认知功能是中枢胆碱能系统主要的作用，海马胆碱能神