word这里是它的官网：正题1、安装后首先打开ImageJ：2、打开要分析图片：Fileopen热键为Ctrl+O3、转换成8bit的灰度图：ImageType8-bit4、黑白反转因为对于光密度OD来说越白数值越小，纯白为0；越黑数值越大，纯黑理论上是无限大。因此我们需要将上一步所转换的灰度图进展黑白反转，不然的话测出来的数值就会荧光越亮反而数值越小：EditInvert热键为Ctrl+Shift+I以下为从左到右分别为原图、8bit灰度图与反转后的图：5、校正光密度软件默认为测量灰度，因此我们要改为更加适用的光密度，其中原理不是一两句话能说得清的，这里忽略：AnalyzeCalibrate 在弹出来的界面的Function选择Uncalibrated OD，并下界面左下方勾选Global calibration，然后点击右下角的OK点击OK后会跳出校正后的光密度曲线：如不勾选Global calibration，光密度的校正只对这X图片有效，一般分析都要分析多X图片，所以需要勾选，勾选后在打开另一图片时会提示是否将此校正应用于所有图片，不勾选Disable Global Calibration，勾选Disable these Messages6、选择测量单位一般选择象素，如有明确的比例，也可以选择相应单位：AnalyzeSet scale点击后在弹出的界面里点击中间的click to Remove Scale，并勾选下面的Global同样的，如不选Global这个测量单位的选择只对这X图片有效，最后点击OK7、选择测量项目：AnalyzeSet Measurements在弹出界面中选择我们需要测量的项目Area、Integrated density，并勾选下面的Limit to threshold这个选项是指只测量我们选中的X围，如不勾选侧会测量整X图片数据，选择后点击OK8、选择测量域值：ImageAdjustThreshold热键为Ctrl+Shift+T滑动弹出界面中间的滑块选择适合的域值，以使的你图片中的细胞或待测目标刚好全部被选中，选好之后点击右下角的Set在弹出来的界面点击OK9、测量：AnalyzeMeasure热键为Ctrl+M或直接按M10、记录数据并计算：结果中的Area为选择X围的面积，如果是测量的是细胞的话就是细胞在图中的面积；IntDen就是所选X围的IOD光密度的总和。结果界面中的数据可以复制到Excel等软件中进展计算。用IntDen的数值除以Area的数值得出来的就是这X图片中细胞的平均光密度，以这X图片的数据为例，即：18854/179252=0.105181532/pixel同法测量多X图的平均光密度值后就可以进展半定量比拟。以下附上分别应用Image-Pro Plus与ImageJ对五X图片进展分析的结果比照：从结果的比照看来ImageJ与IPPImage-Pro Plus的分析结果是根本一致的 /