无菌技术：主要包括 1、对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进 行清洁和消毒；2、将用于微生物培养的器皿、接种的用具和培养基 等进行灭菌；3、为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒 精灯火焰附近进行；4、实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具 与周围的物品相接触。倒平板操作：1、将灭菌过的培养皿放在火焰旁的桌面上，右手拿装有培养基的锥 形瓶，左手拔出棉塞。2、右手拿锥形瓶，使瓶口迅速通过火焰；3、用左手将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，右手将锥形瓶中的 培养基（约1020m 1）倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖， 轻轻摇匀。4、等待平板冷却凝固（大约需510min）后，将平板倒过来放置， 使皿盖在下，皿底在上。平板划线操作：1 、将接种环放在火焰上灼烧，直到接种环烧红；2、在火焰旁冷却接种环，并打开盛有菌液的试管的棉塞；3、将试管口通过火焰；4、将已冷却的接种环伸入菌液中，沾取一环菌液；5、将试管口通过火焰，并塞上棉塞；6、左手将皿盖打开一条缝隙，右手将沾有菌种的接种环迅速伸入平 板内，划三至五条平行线，盖上皿盖。注意不要划破培养基。7、灼烧接种环，待其冷却后，从第一区域划线的末端开始往第二区 域内划线。重复以上操作，在三区域内划线。注意不要将最后一区域 的划线与第一区相连。8、将平板倒置，放入培养箱中培养。稀释操作：1、将分别盛有9ml水的6支试管灭菌，并按IO】10的6次方（打 不出六次方来）的顺序编号。2、用移液管吸取 1ml 培养的菌液，注入 10】倍稀释的试管中。用手 指轻压移液管上的橡皮头，吹吸三次，使菌液与水充分混匀。3、从10】倍稀释的试管中吸取1ml稀释液，注入102倍稀释的试管中， 重复第 2 步的混匀操作。依次类推，直达完成最后一支试管的稀释。 注：移液管需要经过灭菌。操作时，试管口和移液管应在离火焰的 1 2cm 处。涂布平板操作：1、将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中；2、取少量菌液（不超过0.1ml）,滴加到培养基表面；3、将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃尽后，冷却 810s；4、用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。涂布时可转动培养皿， 使涂布均匀。注意：1、将涂布器末端浸在盛有体积分数为 70%的酒精的烧杯中。 取出时，要让多余的酒精在烧杯中滴尽，然后将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃。2、操作中一定要注意防火！不要将过热的涂布器放在盛放酒精的烧杯中，以免引燃其中的酒精。