第三部分遗传信息的传递复制、转录、翻译、基因表达调控及基因工程第十章 DNA的生物合成 复制要求：掌握遗传信息传递的中心法则及其补充；掌握 DNA的半保留复制方式、复制的原料、模板、参与复制的酶类；掌握逆转录的概念及逆转录酶的功能。熟悉 DNA复制的过程。提要：遗传信息的传递在医学生物学中具有重要作用，在这里主要讨论遗传的分子基础，即基因的分子生物学基本知识。DNA是遗传的物质基础。 DNA分子中碱基（核苷酸）的排列顺序即是贮藏的遗传信息。所谓基因，实质上是 DNA大分子中的各功能片段。虽然 DNA分子中只有 A、G、C、T 四种碱基，但由于 DNA分子很大，含有的碱基数量极多（如人的基因组 DNA含有约 3109 个碱基对），可以有多种多样不同的排列方式。不同的基因，其碱基的序列不同，携带着千变万化的遗传信息。细胞有丝分裂之前，细胞中的 DNA分子必须进行自我复制，将亲代 DNA的遗传信息准确地传递到子代 DNA分子中，这一过程称为 DNA复制 (replication) 。由此，子代细胞则具有一套与亲代细胞完全相同的 DNA分子，这就是遗传作用。另一方面， DNA是信息分子，其分子中贮藏的信息必须要通过由它指导合成的特定蛋白质，表现特异的功能，才能体现出来。如前所述，蛋白质是生命的物质基础，蛋白质功能的复杂性依赖于蛋白质分子内氨基酸的排列顺序及其空间结构。蛋白质的结构不同，功能也各异，从而影响机体的各种生命活动。现已证明，体内蛋白质分子合成时，其氨基酸的排列顺序最终是由 DNA分子中核苷酸（碱基）顺序所决定的。但是， DNA本身并不能直接指导蛋白质的合成，而是首先以 DNA分子为模板，在细胞内合成与其结构相应的 RNA，将 DNA 的遗传信息抄录到 mRNA（信使 RNA）分子中，这种将 DNA遗传信息传递给 RNA 的过程，称为转录 (transcription) 。通过转录， DNA的碱基序列按互补配对的原则转变成 RNA分子中的相应碱基序列。然后，再以 mRNA为模板，按照其碱基 (A 、G、 C、 U)的排列顺序，以三个相邻碱基序列为一种氨基酸的密码子形式，来决定蛋白质合成时氨基酸的序列。这一过程称为翻译 (translation)。通过转录和翻译，基因遗传信息指导合成各种功能的蛋白质，这就是基因表达（ gene expression ）。遗传信息传递方向的这种规律，即复制 转录 翻译，称为遗传信息传递的中心法则。进一步研究发现，某些病毒中 RNA也可以作为模板，指导 DNA的合成。这种信息传递方向与转录过程相反，称为逆（反向）转录。另外，还发现，某些病毒中的 RNA亦可自身复制。这就是中心法则的补充。学习基因分子生物学的基本知识具有重要意义。一方面它可以使我们对生命的本质有更深刻的认识，并且在此基础上有利于生物体的改造；另一方面，随着研究工作的深入，愈来愈多地发现某些疾病的发生与基因及表达异常有关。例如遗传病、恶性肿瘤、心血管疾病、某些神经性疾病等。为了更好地理解这些疾病发病的分子机理及相应的防治措施，学习遗传信息传递的基本知识是十分必要的。在 DNA复制过程中，首先是原 DNA双螺旋的两条多核苷酸链之间的氢键断裂，双链解开并分为两股单链。然后，每条单链 DNA各自作为模板，以三磷酸脱氧核糖核苷 (dNTP)为原料，按照碱基配对规律 (A 与 T 配对， G与 C 配对 ) ，合成新的互补链。这样形成的两个子代 DNA分子与原来的亲代 DNA分子的核苷酸顺序是完全相同的。在此过程中，每个子代 DNA分子的双链，一条链来自亲代DNA，而另一条链则是新合成的。这种复制方式称为半保留复制。由于 DNA在代谢上的稳定性和复制的忠实性，经过许多代的复制， DNA分子上的遗传信息仍可准确地传给子代。DNA的复制过程极为复杂，但其速度极快，这是由于许多酶和蛋白质因子参与了复制过程。其中，DNA聚合酶起着重要作用。在原有DNA模板链存在情况下， DNA聚合酶催化四种脱氧核苷酸(dATP、dTTP、 dGTP、 dCTP)，通过与模板链的碱基互补配对，合成新的对应DNA链，故此酶又称为DNA指导的 DNA聚合酶 (DNA directed DNA polymerase，缩写为 DDDP)。 DNA聚合酶的特点是不能自行从头合成 DNA链，而必须有一个多核苷酸链作为引物，DNA聚合酶只能在此引物的端催化dNTP与末端作用，形成,- 磷酸二酯键，从而逐步合成 DNA链。因此， DNA链的合成是有方向性的，即从端端方向进行。这一特点在 DNA复制过程中具有重要意义。无论在原核细胞或真核细胞中，都存在多种 DNA聚合酶，它们的性质和作用不完全相同。在真核细胞中至少有 5 种 DNA聚合酶，即 DNA聚合酶 a、b、g、 d 和 e。其中 DNA聚合酶 a 在细胞中活性最强，在复制中起关键作用，而 DNA聚合酶 b 主要在 DNA损伤的修复中起作用。在 DNA复制过程中，若有 dNTP与亲代 DNA链中相应碱基错误配对时，某些 DNA聚合酶还具有核酸外切酶的活性，切去错误配对的核苷酸，以保证 DNA复制的忠实性，称为 “校对 ”作用。 DNA复制的这一特性也具有重要意义。引物酶是 DNA复制的另一种重要的酶。如上所述， DNA聚合酶不能自行从头合成 DNA链，因此，在复制过程中首先需要合成一小段多核苷酸链作为引物（ Primer ）。实验证明，这段引物是 RNA链片段，在这段引物的 3 端引导 DNA链的合成。催化引物链合成的酶称为引物酶，实际上它是一种特殊的 RNA聚合酶。此酶以相应复制起始部位的 DNA链为模板，合成短片段的 RNA引物。DNA连接酶也是 DNA复制过程中不可缺少的酶。因为复制过程中DNA链的合成方向只能由端端方向进行，因此其中有一条新链的合成是不连续的，起初生成的只是许多短链的 DNA片段（对这点的理解十分重要）。此种片段须在 DNA连接酶的催化下，首尾相连，才能成为一条完整的 DNA长链。实际上， DNA连接酶是将一片段DNA链上的-OH末端与相邻另一片段DNA链上的-P 末端连接起来，使二者生成磷酸二酯键，从而将两个片段的DNA链连接起来。除了上述的三种酶， DNA复制还需要一些其它的酶和蛋白质因子，它们主要参与 DNA的解旋和解链过程。因为 DNA具有超螺旋结构，复制时必然要松弛DNA模板的超螺旋结构，并使 DNA的双链分开，暴露碱基，才能发挥模板作用。松弛 DNA超螺旋结构的酶是拓扑异构酶，解开 DNA双链的酶是解链酶。还有一些蛋白质因子结合在解开的单链 DNA链上，保持模板链处于单链状态，便于复制，称为 DNA结合蛋白。DNA的复制过程十分复杂，大体可分为几个阶段：1起始与引物的合成。 DNA复制有固定的起始部位，原核细胞中只有一个复制起始部位，而真核细胞 DNA有多个复制起始部位。在起始部位首先起作用的是 DNA拓扑异构酶和解链酶，它们分别松弛 DNA超螺旋结构和解开一段双链，并由 DNA结合蛋白保护和稳定解开的 DNA单链，形成复制点，又称复制叉。在此基础上，进一步由引物酶起作用，合成引物 RNA片段。引物的长短约为十多个至数十个核苷酸。2DNA片段的合成。这是 DNA复制的核心内容。在细胞内， DNA的两条链都可以作为模板，分别合成两条新的 DNA子链。由于 DNA的两条链是反向平行的，即一条链是，而另一条链则是。但是，如上所述，DNA聚合酶催化 DNA链的合成只能沿着方向进行，因此，解开双链以后，在，方向的模板上可以反向平行的方式顺利地按方向合成新的 DNA链。这条链是连续合成的（以方向链为模板，称为前导链；而另一条链是不连续合成的（以方向链为模板），称为随从链。即在随从链合成过程中，首先仍以方向合成较短的DNA片段（由冈崎发现，故称为“冈崎片段 ” ），然后在 DNA连接酶作用下，再将这些片段连接起来，形成完整的DNA链。虽然随从链的合成从总体来看是方向，但每个冈崎片段的合成方向仍然是成随从链成为可能。正确理解随从链合成在所在。 。只有这样才能使合DNA复制中的作用，是本章的难点3RNA引物的水解。 DNA片段合成到一定长度后，链中的 RNA引物即被核酸酶水解而除去。由此出现的缺口通过 DNA片段的继续延长而填补。4完整子代 DNA分子的形成。随从链中相邻的两个 DNA片段在 DNA连接酶作用下连接起来，形成大分子 DNA链，与其对应的模板 DNA链一起生成子代双螺旋 DNA，即完整的 DNA分子。合成的前导链也与其对应的另一条模板 DNA链生成另一个双螺旋子代 DNA分子。这两个子代 DNA与亲代 DNA的结构完全相同，由此遗传信息从亲代传递给子代。 DNA复制在细胞分裂周期的 S 期进行。抑制 DNA复制可以抑制细胞分裂，其些抗肿瘤药物则是通过这个途径而达到治疗的目的。DNA的合成除了复制外，还可以RNA为模板合成 DNA，这个过程称为逆 ( 反)转录。催化此反应的酶是逆（反）转录酶。逆转录在病毒 RNA的致癌过程中起重要作用。第十一章RNA的生物合成 转录要求：掌握转录的原料、模板、酶及转录的基本过程。熟悉编码链、模板链、内含子、外显子的概念。提要：细胞中的 RNA是以 DNA为模板合成的。这种由 DNA向 RNA传递信息的过程，称为转录。 RNA的转录需要多种成分参与，包括 DNA模板、四种三磷酸核糖核苷酸 (NTP)，RNA聚合酶及某些蛋白质因子等，总称为转录体系。RNA合成需要 DNA做为模板，根据碱基配对规律，按照 DNA模板中核苷酸的排列顺序，合成相应核苷酸顺序的 RNA分子，即模板 DNA分子中的 A、G、C、T 分别对应合成 RNA分子中的 U、C、G、A。由此，模板 DNA的结构决定着转录 RNA的结构，从而将遗传信息传递给 RNA(mRNA)。可见，转录是基因表达的重要过程。细胞内 DNA的双链中只有一条链可以作为模板转录合成 RNA，此链称为模板链。转录本 RNA的核苷酸序列与 DNA模板链序列互补。 DNA的另一条链无转录功能，称为编码链。此链的序列与转录本 RNA链的序列基本相同，只是编码链中的 T 相应在转录本 RNA中为 U。由于转录本 RNA编码合成蛋白质，故 DNA 的这条链命名为 “编码链 ”。与 DNA复制不同，转录是不对称的（即只有一条链转录，而不是象复制中两条链均可以用做模板）。这是转录的重要特点。需要指出的是，在一个包含多个基因的双链 DNA分子中，各个基因的模板链并不是全在同一条链上，在某个基因节段以某一条链为模板转录，而在另一个基因节段可由另一条链为模板。正确理解这一特点也十分重要。转录