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实验十二消化实验家兔离体小肠平滑肌生理特性 目的要求 1 、学习离体肠段平滑肌的实验方法。2 、了解肠段平滑肌的生理特性。 基本原理 哺乳动物消化管平滑肌与肌肉组织共有的特性, 如兴奋性、 传导性和收缩性 等。但消化管平滑肌又有其特点,即兴奋性较低,收缩缓慢,富有伸展性,具有 紧张性、自动节律性,对化学、温度和机械牵张刺激较敏感等。这些特性可维持 消化管内一定压力, 保持胃肠等一定的形态和位置, 适合于消化管内容物的理化 变化,在体内受中枢神经系统和体液因素的调节。 将离体组织器官置于摸拟体内 环境的溶液中, 可在一定时间内保持其功能。 本实验以台式液作灌流液, 在体外 观察及记录哺乳动物离体肠段的一般生理特性。 动物与器材 兔、恒温平滑肌槽、支架、烧杯、 20ml 注射器、张力传感器、生物机能 实验系统、温度计、台式液、肾上腺素( 1:10000)、乙酰胆碱( 1:10000)、 阿托品针剂( 1 支)。 方法与步骤 1、装好实验装置,平滑肌槽恒温调至 37C。2 、制备离体兔肠段用木槌猛击兔后头延髓部,致其昏迷后立即剖开腹腔,找到胃幽门与十 二指肠交界处。在十二指肠起始端扎一线, 取出十二指肠、空肠 、放入冷台式液 内。先用20ml注射器冲洗内容物,冲洗干净后剪成若干约1.5cm长的小肠段(每 一实验小组一段) 在其两端结扎, 一端做一短线环固定在通气的浴皿内, 另一端 扎线与张力传感器相连。 将肠段完全浸浴在调好温度的平滑肌槽中 ,并调整好台 式液充气量(小气泡接连不断)。3、开启生物机能实验系统,接通与张力传感器相连的通道。固定管并调节扎 线与张力传感器, 使肠段运动自如又能牵动传感器 (注意: 扎线不可贴壁或过紧 过松)。调节增益与扫描速度, 使肠段的运动曲线清晰地显示在显示器上并记录 肠段活动曲线。4、实验观察( 1 )记录对照肠段运动曲线后,停止供气 1 分钟并记录曲线变化,同时观察 肠段紧张度变化。当出现明显变化后,立即恢复供气。用新鲜 37C台式液冲洗, 待恢复正常(注意作好标记)(2) 记录对照肠段运动曲线后,加入 25C台式液,并记录曲线变化,同时 观察肠段紧张度变化。同法,当出现明显变化后,立即用 37 C台式液冲洗,待 恢复正常。(3) 同法加入45C台式液并记录曲线变化,同时观察肠段紧张度变化。当出现明显变化后,立即用新鲜 37 r台式液冲洗并待恢复。由于以上流出液中未加入药物,可以回收使用。以下加入药物的流出也 不可再用。(4) 同法,加入 2 滴肾上腺素( 1:10000),观察并记录曲线变化。(5) 同法加入12滴乙酰胆碱(1: 10000),观察并记录曲线变化。( 6)加入 3 滴阿托品后立即加入于( 5)同样剂量的乙酰胆碱,记录并观察 曲线变化。同( 5)比较曲线有何不同。注意:1加药前必须准备好更换用的37C台式液。上述药物剂量只是参 考,效果不明显可补加, 每次加药出现效果后, 必须立即更换浴槽内的台式液并 冲洗 3 次,待肠肌恢复正常后在观察下一项目。浴槽内台式液要保持一定温度。2 游离及取出肠段时,动作要快,取兔肠及兔肠穿线时尽可能不用金 属及手指触及。为保持离体肠段的活性,可先预冷充氧的营养液,游离肠段 及穿线在预冷的营养液中进行。实验中始终通气。 思考题 1、本实验是否可用麻醉动物的肠段?为什么?麻醉状态影响肠段细胞的反应性以及对药物的敏感度2、进行哺乳动物离体组织器官实验时,需控制哪些条件? 温度:本实验控制恒定温度 37 度湿度:要时刻记住用相应的润湿液润湿,本次试验用哺乳 动物的台氏液 PH :要与哺乳动物体液相似避免不必要的刺激:不要用手或者是金属触碰离 子成分与浓度:要与相关的动物体液相似,本实验是台氏液3、为什么加入各种药物会引起离体肠段活动的变化?其机理是什么?adr对其是抑制作用可见离体肠管活动减弱,描记曲线出现收缩频率变慢,幅度减小以及基线下移 ach 是促进作用, 可见离体肠管活动增强, 描记曲线出现收缩频率变快,幅度增加。出现上述现象的机理, 与消化道平滑肌细胞产生动作电位的离子基础是Ca2的内流有关。阿托品是 ach 的阻断剂。所以两者加入个观察到曲线无明显变化。 阻断乙酰胆碱与肌膜上的M受体结合。HCL离体肠管活动减弱,描记曲线出现收缩幅度降低,频率变慢。H+升高能干扰肌肉的代谢和肌丝滑行的生化过程: H+能与Ca2+竞争钙调蛋白的结合位点而使肌球蛋白ATP酶活性降低;使肌原纤维对Ca2+的敏感性和Ca2+从肌质网的释放量减少。加了 NAO肠管活动增强。中和了 H离子改变了细胞 外液的PH值所以恢复正常4、加入阿托品后再加入乙酰胆碱,肠段活动受到抑制,为什么? 这两种药对肠道平滑肌的作用正好相反, 乙酰胆碱能促进肠道平滑肌蠕动, 阿托 品是胆碱能神经阻断剂, 能抑制肠道平滑肌蠕动。 两药同时使用, 阿托品阻断了 乙酰胆碱的作用,所以表现出肠道活动受到抑制。5 、根据实验结果,说明平滑肌的生理特性消化管平滑肌又有其特点, 即兴奋性较低, 收缩缓慢,富有伸展性,具有紧张性、 自动节律性, 对化学、温度和机械牵张刺激较敏感等。 这些特性可维持消化管内 一定压力, 保持胃肠等一定的形态和位置, 适合于消化管内容物的理化变化, 在 体内受中枢神经系统和体液因素的调节。 将离体组织器官置于摸拟体内环境的溶 液中,可在一定时间内保持其功能。
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