上鬲的诰大参文献综述报告（2012届本科）学院： 专业： 班级： 姓名： 学号： 指导教师：2012年5月植物抗氧化活性研究摘要 天然的抗氧化活性物质能够清除自由基保障人体的健康，而植物更是天然抗氧化剂的天然丰富来源，植物中 富含有的黄酮，多酚，生物碱，多糖，皂苷等等，都是非常好的天然抗氧化活性成分。具有良好的清除自由基和抗 菌活性能力，植物抗氧化活性物质以其低廉的价格，高效，低毒的优点，越来越被广泛的研究和利用，通常植物抗 氧化活性的测定是通过利用福林酚法，ABTS法，还原力测定法，DPPH法，铁离子螯合，FRAR,还原力测定等方法来 研究。关键字 ABTS； DPPH ；黄酮 ；多酚； 生物碱1植物抗氧化成分研究1.1 黄酮类许多黄酮类化合物能较显示出明显的抗氧化活性，如、黄芩甙、水飞蓟素，银杏黄酮，三羟基查 尔酮、槲皮素等。、山楂、菠菜、紫山西黑苦荞麸皮，葡萄皮，、茄子皮，甘薯叶和等提取物中都能 分离的黄酮类物质，并且其都有较强的清除自由基能力。黄酮类物质羟基位置上的羟基化程度是衡量黄酮抗氧化活性的一个重要方面，还原力最强的黄酮 其B环上有邻二酚羟基。最新的研究还发现了，如果黄酮一个环上有邻二羟基与邻一个环上有对二羟 基，那么就会产生很强的还原力。如果A环上面的5,7位增加羟基，那么黄酮的抗氧化能力就会提高。 没食子酸，绿原酸，咖啡酸都是植物中通常含有的黄酮类物质，并且其都属于苯丙烷类化合物。都 有苯环C-3碳骨架。其上面的羟基和羟基的数目会直接影响抗氧化的效果，因为羟基作为供氢体，能 消除多种活性氧。由于黄酮类具有多样性和每种黄酮中具有抗氧化活性的有效酚羟基的种类和含量 不同，因此每种黄酮的抗氧化活性也会有所差异，各不相同。1.2 多糖类所谓的多糖类是植物中含量较多，而且普遍的一类由10 个以上的单糖通过糖苷键连接起来的聚 糖。从植物中提取得到的多糖具有抗衰老，抗氧化等功效。其原因是因为多糖一方面在体内扮演着 免疫调节剂的作用从而提高机体的免疫能力，另外一方面多糖能够清楚自由基达到抗氧化的目的。 多糖在体内可以抑制脂质过氧化和蛋白氧化，防止过氧化歧化酶和含硫基蛋白的失活。研究表明五 味子多糖，灵芝多糖，螺旋藻多糖，褐藻多糖，以及猕猴桃多糖都是具有相当强的抗氧化活性。例如灵芝硒多糖可以提高血液中硒的含量，并且可以有效能降低脂质过氧化产物的含量，清除掉 多余的过氧化氢，清除自由基，保护细胞膜不受损害，抑制体内过氧化物的产生，使细胞敏感分子 不受到损害，因此能有效提高机体器官的机能。现在我国对于多糖的研究停留在其分离纯化，生物 活性，化学组成的方面，而没有对其进行构效关系的研究。所以多糖类天然抗氧化成分将会是一个 相当热门，并且前景广阔的研究。1.3 多酚类物质多酚类物质其结构式中苯环与羟基连接，与苯环连接的羟基上的氢不稳定，通常是非常好的氢或 电子的供体。由于所形成酚类游离基中间体不容易被分子氧进攻。所以要发生新的游离基或链式反 应而被氧化的情况是不可能的。因此这几点证明了多酚类物质是非常好的抗氧化活性物质。一般而言，酚类物质是植物中产生的一类次级代谢物。水果中的酚类要比蔬菜中多。酚类物质在 植物中也有很大的结构上和分子量上的差别。Velioglu等人研究了28种植物的多酚量，得出结论是 总酚量与植物的抗氧化性表现出显著关系。但也有人认为植物的抗氧化活性与总酚量并非有关系。 理由是因为Bocco等人对柑橘及其种子提取物进行含酚量的测定与抗氧化活性的研究后。认为两者无 明显的联系。造成这样的争论原因是因为植物中具有抗氧化活性的酚类其结构和含量有所不一样。 并且有些植物的抗氧化活性成分还有少许非酚类物质。Hagerman等人证明了多元酚的抗氧化活性能 力是单酚的15到20倍。1.4 生物碱类研究表明双子叶的植物中分布有较广的生物碱类。生物艰难扮演的角色是活性氧的猝灭剂。能 够影响其抗氧化活性的主要是由于电位因素和立体结构的因素。氮原子在杂环中充分裸露能够与活 性氧更好的接触，并且反应，其抗氧化效果就越好。一些提供给氮原子电子的基团越多，其抗氧化 性也越好。2抗氧化活性研究的方法2.1 DPPH 法2.11实验原理DPPH 清除率的检测是一种快速，简单，高效的实验室抗氧化检测方法，在天然植物提取物体 外抗氧化测定中应用广泛。其原理是用到二笨代苦味酰基（有毒）， DPPH. 它是种在有机溶剂中比 较稳定的氮自由基，其分子结构有三个苯环，一个氮上有孤对电子，在517 纳米处有最强吸收峰。 若有抗氧化物质存在时， DPPH 上的孤对电子被配对从而使其颜色发生变化，成为浅红紫色，用分 光光度计分析DPPH含量的变化。利用DPPH配对的电子数与颜色深浅有直接的联系，因此可用于 实验室样品的抗氧化活性检测。2.1.2实验过程A DPPH标准液配制 称取DPPH2.5mg，甲醇定容到100m 1,配成浓度为0.025mg/ml的标准液。放置 在冰箱中保存。B 标 准曲线 绘制 分别取 0,2,4,6,8,10ml 标准溶液 ，用甲 醇 定容到 10ml 最 终浓 度分别 为 0,5,10,15,25ug/ml分别取上诉标准液，并且在515纳米处测吸光度的值，绘制标准曲线。C样品曲线的绘制以甲醇为溶剂，配制不同浓度的样品溶液，取0.1ml的样液，并且加入3.9毫 升的质量浓度为25mg/mlDPPH标准液，以甲醇代替样液做空白试验，混合液摇匀，在515纳米处测 吸光值。D VC参照曲线的绘制 配制不同浓度的VC溶液，取0.1ml的样液，并且加入3.9毫升的质量浓 度为25mg/mlDPPH标准液，以甲醇代替样液做空白试验，混合液摇匀，在515纳米处测吸光值。2.1.3 试验结果分析根据标准曲线可以换成DPPH的质量浓度，从而计算出DPPH的残留率。根据残留率和相应的 样品添加量，可以绘制出DPPH的清除曲线。清除率（）=1 （AiAj）/AcX100 %，其中Ac表示甲 醇代替样液的吸光度值，Ai表示样品的吸光度值，Aj表示甲醇代替DPPH的吸光度值。2.2 福林酚法2.2.1 实验原理： 多酚类物质是植物抗氧化的主要成分之一，忍冬藤中就含有丰富的多酚类物质，其能与福林试 剂，在碳酸钠溶液下生成蓝色，多酚类物质含量越高，其在770 纳米处的吸光度越高，抗氧化活性 越强。通过标准没食子酸标准曲线的绘制，从而确定样品的含酚量2.2.2 实验过程：A福林试剂配制 称取钨酸钠40g,和85%磷酸20mL,磷钼酸8g溶于200mL蒸馏水，煮沸加热回 流两小时，冷却，稀释至300mL，并且置于黑暗处避光保存。B 标准曲线的绘制：称取0.025g没食子酸，定容至500ml,配成浓度为100mg/l的标准液，精密移 取0，0.5，1,1.5,2,2.5ml没食子酸标准液于6个比色管中（避光）定容至25ml,加5ml水，2ml福林 试剂，4ml碳酸钠。30度90分钟，在770纳米处测吸光度，绘制标准曲线。C样品的的测定，取1ml的不同浓度浓度样品于比色管中，加5ml水，2ml福林试剂，4ml 10%碳 酸钠， 30度90分钟后， 770纳米处测定吸光度，绘制其吸光度曲线2.2.3 结果分析根据样品的吸光度与标准浓度没食子酸吸光度的比较，得出样品的多酚含量，结果用每ml样品 含有没食子酸的当量表示总酚量也可用总酚量=G*100/w其中G表示样品根据吸光度得出的酚的 总量 mg W 表示样品的干重。2.3 ABTS 法231 实验原理ABTS法用于测定样品的抗氧化能力，ABTS即2,2联氮一双一（3 乙基苯基）并噻唑啉一6 磺酸，它是种水溶性自由基显色剂，ABTS被活性氧化后可以生成蓝色阳离子自由基ABTS+.若在其 中加入被测抗氧化活性样品，则样品能使ABTS发生反应，使其褪色，然后可以通过分光光度计在 734纳米处检测。颜色越浅，则说明样品的抗氧化能力越强。通过用VE作标准曲线来换算出被测样 品抗氧化能力大小。ABTS缓冲液的配制是实验的关键，实验所需的ABTS需新鲜配制，通过乙醇 来调节ABTS的吸光度。2.3.2实验方法A ASTS标准液的配制，配制7nmol/l的ABTS 10ml,2.45nmol/l的过硫酸钾10m 1,两者溶液混合， 加入乙醇缓冲液，在分光光度计上调节吸光度在0.70B 标准曲线，取0,0038g的水溶性维E定容至100ml,配成浓度为150umo1/1,配制浓度为 0,30,60,90,120,150umo1/1,取2.5ml以上浓度的液体，加入ABTS工作液定容至25毫升，734纳米处 测吸光度值，并且绘制标准曲线。C样品吸光度曲线绘制：配制不同浓度的样品溶液，各取2.5毫升，加入ABTS工作液定容至25 毫升，在 734纳米处测样品的吸光度值，绘制曲线2.3.3结果分析样品抗氧化能力的大小用水溶性维生素E的量来表示，根据曲线也可以得到样品的抗氧化能力 是标准水溶性VE的多少倍。ABTS法本质上是一种间接方法,是用来检测物质清除ABTS+这种 自由基的能力，与真实的氧化分解没有关系，它只是用VE值来表征测试样品与经氧化得到的ABTS + 反应的能力。2.4 铁离子螯合能力测定2.4.1实验原理抗氧化剂通常可以作为活性氧的淬灭剂，或金属离子螯合剂，自由基受体等方式来阻止自由基 链式反应，还可以用来消除脂质过氧化等其他物质的氧化对生物体的伤害。因此测定金属离子如亚 铁离子螯合能力的大小也是评价氧化剂抗氧化性能常用的方法。，螫合Fe2+能力与抗氧化活性关系 非常密切，2 价铁能与菲洛嗪“结合形成复合物。在波长 562 纳米处具有强的吸收。如果抗氧化样 品具有螯合二价Fe “作用，则形成的紫色复合物就会减少，吸光度就会减少，因此反应物的吸光度 较低，表明抗氧化样品的螯合铁离子的能力较强。2.4.2 实验过程A 药液的配制，取0.0247g菲洛嗪，定容到25ml。0.035g Fecl2,定容到10ml，称取4.2mgEDTA定容 到 25 毫升。B EDTA对照曲线的绘制，取不同浓度的EDTA溶液1ml,加入6.7ml的水，0.2ml的菲洛嗪和0.1ml 的氯化亚铁，混合均匀在562纳米处测定吸光度值，用蒸馏水代替样液做空白实验。C 样品的测定：取1ml的样品，加入6.7ml的水，0.2ml菲洛嗪，0.1ml氯化亚铁。混合均匀562 纳米处测定吸光值。蒸馏水代替样做吸光度值2.4.3 实验分析;实验结果用螯合率来表示样品抗氧化程度的大小，螯合率=(1-A1)/A0*100% A0表示空白实验 的吸光度，A1表示样品的吸光度。参照EDTA的螯合率来评价样品螯合率的大小，从而得出样品抗 氧化能力的大小。2.5 还原力测定方法2.5.1 实验原理： 本实验主要利用抗氧化样品的还原作用能使铁氰化钾还原为亚铁氰化钾后，亚铁氰化钾能与三价铁离子反应生成普鲁斯蓝，在700纳米处有最强吸收峰，测定其其吸光度值，吸光度越高，则样 品的还原能力越强，用 VC 来做参照曲线，来衡量样品忍冬藤的抗氧化能力大小。2.5.2 实验方法A PBS缓冲液的配制，配磷酸氢二钠溶液0.2mol/l和磷酸二氢钠0.2mol/l溶液100ml,混合后在PH 计上调节ph至6.6现配现用。B 标准曲线绘制：配制浓度为20,40,60,80,100ug/ml的标准VC溶液，取该溶液1ml加入2.5mlPBS 标准液，加入2.5ml1%铁氰化钾，50加热20分钟，然后迅速冷却，加入2.5ml的10%TCA溶液， 3000转离心十分钟，取上清液2.5毫升，加入蒸馏水2.5毫升，加入0.5ml0.1%的三氯化铁，充分反 映10分钟， 700纳米处侧吸光值，绘制标准曲线。C样品的吸光度曲线绘制测分