BED检测方法估计广西艾滋病新近发病率监测方案（试行）二0一0年三月自治区党委、人民政府决定从2010年起，在广西全区范围内组织实施为期五年的防治艾滋病攻坚工程，以实现减少新发艾滋病病毒感染、降低艾滋病病死率、提高艾滋病病毒感染者和病人生存质量的“两降一升”总体目标，到2014年，全区新报告艾滋病病毒感染者年增长率控制在15%以内，接受抗病毒治疗的艾滋病病人病死率控制在3/100人年以下，基本控制艾滋病疫情扩散的速度。为了能够科学地评估我区这场历时5年的艾滋病防治攻坚战争的效果，我们采用中国疾病预防控制中心推荐的艾滋病新近感染监测检测方法（BED-HIV-1 发病捕获EIA），对我区艾滋病防治效果进行评估，特制订本方案。一、BED检测方法在艾滋病新近感染监测检测中的应用长期以来艾滋病病例报告、哨点监测、行为监测等监测方法,为发现HIV和AIDS 疫情,掌握HIV和AIDS 流行趋势、高危行为的变化情况，评价干预措施的效果等提供了大量的依据。但上述这些监测方法难以判定新近感染还是既往感染，无法获得直接准确的新近感染的数据，不能敏感地反映疫情的真正变化趋势和干预措施的效果，而为数不多的队列研究和统计模型估计的发病率远不能适应艾滋病流行形势分析和防治效果评价的需求，且费用高昂。近年来，学术界对艾滋病新发病监测技术进行了积极的探索,其中美国疾病预防与控制中心(CDC) 从2001年起开始组织监测、统计、实验室和流行病等各方面专家共同制定开发了BED HIV-1 发病捕获EIA (BED-HIV-1 Incidence Capture EIA ,简称BED) 监测方法 ,这是艾滋病新近感染监测的实验室新技术，用这个方法来估计艾滋病新近感染发病率。目前有美国、荷兰、泰国等十几个国家运用这个方法监测和估计HIV新近发病率。开展HIV-1 年发病率监测的目的是为了能对不同人群、不同地点和不同时间点上进行比较，操作角度上要求有连续性的样本可供检测。一般情况下每年HIV-1 感染者报告人数在10 个以下的地区或人群不适宜使用BED 方法作为发病率监测。用于BED 方法来作为发病率监测的要求是：1、在同一人群中开展的、采用相同方法采样的、连续性的横断面调查；2、样本人群要有充分的代表性，每个个体在每次调查中仅被抽中一次，其监测的结果不存在将结果与调查对象个人关联的可能性；3、有3 年以上的、保存完好的血清样本；每年有足够的样本量；4、在这样的横断面调查中，调查要在相对较短的时间内完成，如果样本收集的时间过长，趋势变化会造成估计的偏倚。因此，按此方法的要求在我区哨点监测中艾滋病高危人群使用HIV-1 BED 方法来估计新发病率是较为适宜的。二、BED检测方法的原理HIV-1 抗体通常感染后34 周内可以检测到，因而可以用酶免疫测定( EIA) 进行血清学诊断。在血清阳转后抗体发生质和量的变化，表现为抗体类别、抗体亲和性、抗体滴度、HIV-IgG的构成、抗原特性的改变。血清中的HIV-1 特异性IgG占总IgG抗体的比例随感染时间的延长而增高。这些特性可用来区别近期感染与既往感染。BED 检测方法必须应用于HIV-1阳性的样本,该实验对感染时间的长短，即抗体存在水平高低比较敏感。从标准EIA检测为HIV-1血清学阳性至到达应用BED 检测的预定光密度值(OD值，这里为0.8 ,即可以区分近期感染和既往感染的值) ,称为BED 方法的平均窗口期。虽然BED方法 的平均窗口期对于HIV-1 的不同亚型稍有不同,但是计算人群发病率时平均窗口期是155天。BED检测方法只适用于经免疫印迹实验（WB）确证或替代策略判断为HIV-1阳性的样本。由于个体间抗体生成的变异性，对个体而言，BED检测方法可能产生一定的假阳性和假阴性，但在人群水平上，假阳性的数目与假阴性的比例相近，可以相互抵消彼此的作用。因此，美国FDA将BED检测方法归为“只应用于监测目的，不能用于个体诊断和临床”的实验方法，检测结果只能用于人群发病率估计，不能应用于个体诊断。三、BED检测方法在我区的应用在国家艾滋病参比实验室的指导下，广西壮族自治区疾病预防控制中心艾滋病确证中心实验室于2006年9月参加BED方法估计新近感染监测国家试点工作。这个试点工作开展至今，自治区艾滋病确证中心实验室每年都要参加美国疾病控制中心组织的两次BED检测方法能力验证工作，并获得合格证书，具备开展BED方法监测检测的能力。截止2009年12月，共挑选两个县的吸毒人群哨点监测HIV抗体阳性样本、2009年度全区国家级哨点监测HIV抗体阳性样本、2009年第一季度新报告艾滋病病毒感染者的样本进行BED检测，其结果为： 。四、我区BED检测方法应用目的 应用BED方法来检测我区HIV哨点监测和在咨询检测中报告的艾滋病病毒感染者的样本，以估计我区的HIV新近发病率，为广西艾滋病疫情流行趋势分析和防治效果评价提供参考依据。五、确定我区BED方法监测的目标人群1、当年全区各市县在检测中报告的艾滋病病毒感染者；2、当年全区吸毒者、暗娼、男男性接触者、性病门诊男性就诊者等四类高危人群艾滋病哨点监测中新报告的艾滋病病毒感染者；3、当年全区孕产妇艾滋病抗体检测中新报告的艾滋病病毒感染者。六、参加BED方法的监测单位（一）自治区级医疗卫生机构：自治区疾病预防控制中心、广西龙潭（胸科）医院HIV确证实验室（二）市级医疗卫生机构：14个市级疾病预防控制中心的HIV确证实验室（三）承担吸毒者、暗娼、男男性接触者、性病门诊男性就诊者等四类高危人群艾滋病哨点监测的疾控中心（见广西艾滋病哨点监测方案）。七、BED检测方法检测样本的入选和排除标准1、入选标准（1）BED检测方法的样本必须诊断为HIV-1阳性（包括WB确认阳性和替代策略检测阳性），禁止将HIV阴性样本纳入BED方法监测检测。（2）对于替代策略HIV抗体阳性且BED方法检测OD-n值0.3的样本，需要对该样本进行WB检测，以排除潜在的HIV阴性样本。（3）用于BED方法监测检测的样本，可以使用剩余或者库存样本，不必重新采集样本。（4）没有交叉污染，个案信息准确。（5）进行BED方法监测检测的阳性样本数量必须占总阳性样本的80%以上。（6）如果同一人在三个月以内出现两份或两份以上的HIV抗体确认阳性样本，将第一份样本纳入BED检测，其余样本从总样本中删除。2、排除标准（1）已经在监测系统报告过的感染者的样本（非初次诊断阳性者），该样本采集时间距HIV阳性检测记录已经超过3个月。（2）所有艾滋病病人样本。（3）所有接受抗病毒治疗的艾滋病病毒感染者样本。八、BED检测方法检测样本的采集、保存、上送要求1、样本的采集用一次性注射器（或真空采血管）抽取一定量静脉血，同时将血样制作一份滤纸片干血斑（DBS），室温下自然放置12h，待血液凝固、血块收缩后再用3000r/min离心15min，将血清/血浆分装到有样本标记的EP管/冻存管，每管约1ml，置-20以下保存备检，滤纸片干血斑（DBS）的制作及保存严格按照DBS的要求进行，作为回顾性检测或检测其它项目。2、样本的保存为了便于样本识别，各高危人群艾滋病哨点监测的样本编号原则上按监测方案的要求进行编写，每个样本管的编号至少包括监测人群+调查序号+市（县）地区代码。（哨点监测样本上送至艾滋病确证实验室不能变更此编号）；其它非主动监测类（常规检测）的样本以各市艾滋病确证检测实验室的编号为准。各级艾滋病检测实验室对呈阳性反应的样本保存在-20以下的冰箱，避免反复冻融，每份样本样本量不少于0.5ml，要求清亮、无严重溶血、没有交叉污染，不丢失，不渗漏，保证样本质量满足检测要求。3、样本的上送各艾滋病筛查检测实验室负责将HIV抗体初筛呈阳性反应的样本，同时填写HIV抗体复检送检单（附表1）送辖区内的艾滋病确证实验室进行HIV抗体复核和确证；市级艾滋病确证检测实验室负责收集辖区内纳入BED监测检测人群的HIV-1抗体呈阳性反应样本（替代策略检测/WB确认检测），填写BED检测样本上送单（附表2）送自治区艾滋病确证中心实验室统一进行BED检测。样本运送根据全国艾滋病检测技术规范（2009）的要求保存-20以下上送至自治区疾病预防控制中心艾滋病确证中心实验室。九、BED检测方法数据收集、分析和质控由于BED 检测方法是小概率事件，极小的误差都会产生严重偏倚，因此，必须在样本休集、信息收集、数据录入、统计、分析等环节上做好质量控制。 1、样本量BED检测方法估计艾滋病新近发病率应根据各监测目标人群的感染率来确定参考样本量，见下表：感染率5-10%11-20%21-50%参考样本量（人）600-800500-800400-800当监测目标人群感染率未达到5%或超过50%时，不推荐使用BED方法估计新发病率；当监测人群感染率达到5，若监测哨点的样本量不足时，感染率相近地区、集中流行（该人群感染率达到5）时间相差不大（一般不超过2年）的目标人群可以合并进行BED方法检测。2、计算公式BED检测方法估计新近发病率计算公式： R-P I = x 100 R + N(w/365)-T 95%可信区间：95% CI = I+/- 1.96 ( I / SQRT R)注：I发病率（高危人群中每100人年新感染的数量）T调查的总人数PHIV 检测为阳性的总人数NHIV检测为阴性的总人数RBED-CEIA检测为新发感染的总人数w =窗口期（从血清阳转到BED方法能够判为新近感染的最长时间） = BED方法对感染时间超过2w样本的误判率3、收集信息收集的信息有：（1）人口统计学数据：年龄，性别，民族，婚姻，职业，教育程度等；（2）HIV抗体检测情况：既往是否做过HIV检测，第一次确诊阳性时间；（3）艾滋病感染状态：艾滋病相关症状，抗病毒治疗情况，以及进行CD4和病毒载量的检测情况等（见 BED方法检测个案信息调查表附表3）。4、数据分析采用国家艾滋病参比室推荐的BED检测方法估计新近发病率公式计算。其中人口统计学数据、HIV检测历史数据、临床和实验室数据都是用于估计HIV新近发病率密切相关的统计学关键。因此，应该尽可能的采取分层的方式来报告HIV新近发病率。5、数据质控：（1）按要求填写BED方法监测检测统计表附表4。（2）各地区必须指定专人负责数据信息（包括个案数据）的收集、录入和传输。（3）所有收集的数据须经二人核实。十、组织实施管理1、自治区疾病预防控制中心（1）对各市县BED监测工作进行培训和技术指导，督促全区BED监测工作进展。（2）收集各市上送的BED检测待检样本，对样本质量和流行病学资料进行复核，对存在问题及时与各市疾控中心核实，核实无误后按此方案要求进行检测。（3）根据实验室检测结果，结合流行病学资料和病史，进行相应调整后，计算发病率，并将统计分析结果反馈给各市县和各级领导。2、市级疾病预防控制中心（1）对所辖县（区）BED检测工作进行技术指导，督促本市BED监测工作进展。（2） 检查本市各级卫生医疗机构送检的待检样本是否符合要求、流行病学信息是否完整，样本和流行病学资料编号是否匹配，并督促送检机构填写完整的信息，核实样本信息无误后，进行HIV抗体确证实验。（3）通过艾滋病综合防治信息系统核实是否为新报告病例，选择符