牛结核病提纯结核菌素变态反应试验1. 原理 机体受到结核杆菌刺激时，导致 T 淋巴细胞转变为 淋巴母细胞， 并进而增殖分化为致敏淋巴细胞， 使机体致敏； 以后如再次接触结核菌时（结核菌素），致敏淋巴细胞即释 放出各种淋巴因子，一方面使机体表现特异性的细胞免疫， 而另一方面则发生迟发型变态反应，出现以单核细胞浸润， 以及由于巨噬细胞释出溶酶体酶（水解酶）和淋巴细胞释出 淋巴毒素所引起的组织环死为特征的病理现象。皮内注射提纯结核菌素（PPD于正常动物，不出现显著的局部炎症反应。相反，如果将其注入曾感染结核病而致敏的 动物，便发生迟发型超敏感性应答，在几小时之内注射局部 不出现肉眼的或组织学的变化，但以后血管扩张，通透性增 加，因而出现红斑和水肿，肿胀硬固。组织检查，这种病变 和典型的急性炎症反应不同的是，浸润细胞主要是单核细 胞，即巨噬细胞和淋巴细胞，虽然反应初期也出现短暂的嗜 中性白细胞的积聚。注射后 24-72 小时反应程度最强，以后 逐渐消退。非常严重的反应，在注射局部可发生坏死。2. 器材与试剂 酒精棉、卡尺、 1-2.5ml 注射器、针头、牛型 提纯结核菌素。3. 操作方法3.1 注射部位及术前处理：在颈侧中部上 1/3 处剪毛（或提 前一天剃毛），三个月以内的犊牛，也可在肩胛部进行，直 径约10cm,用卡尺测量术部中央皮皱厚度，作好记录。如术 部有变化时，应另选部位或在对侧进行。3.2 注射剂量： 不论大小牛只， 一律皮内注射 1 万国际单位。 即将牛型提纯结核菌素稀释成每毫升含 1 0万国际单位后， 皮内注射 0.1ml 。如用 2.5ml 注射器，应再加等量注射用水 皮内注射 0.2ml 。冻干菌素稀释后应当天用完。3.3 注射方法：先以 75%酒精消毒术部，然后皮内注入定量 的牛型提纯结核菌素，注射后局部应出现小泡，如注射有疑 问时，应另选 15cm 以外的部位或对侧重作。3.4 注射次数和观察反应： 皮内注射后经 72 小时判定， 仔细 观察局部有无热痛、肿胀等炎性反应，并以卡尺测量皮皱厚 度，作好记录。对疑似反应牛应即在另一侧以同一批菌素同 一剂量进行第二回皮内注射，再经 72 小时后观察反应。如 有可能，对阴性和疑似反应牛，于注射后 96和 120 小时再 分别观察一次，以防个别牛出现较晚的迟发型变态反应。3.5 结果判定：3.5.1 阳性反应：局部有明显的炎性反应。皮厚差等于或大于4mm以上者，其记录符号为（+）。对进出口牛的检疫， 凡皮厚差大于2mm者，均判为阳性。3.5.2 疑似反应：局部炎性反应不明显， 皮厚差在 2.1-3.9mm 间，其记录符号为（）。3.5.3阴性反应：无炎性反应。皮厚差在2mm以下，其记录符号为（ - ）。3.6 凡判为疑似反应的牛只， 于第一次检疫 30天后进行复检， 其结果仍为可疑反应时， 经 30-45 天后再复检， 如仍为疑似， 应判为阳性。附：感染禽型结核菌或副结核菌牛群的诊断方法 如果牛群有感染禽型结核、副结核菌病可疑、或免疫过副结 核苗时，可以应用牛、禽两型提纯结核菌素的比较试验进行 诊断（副结核分枝杆菌与禽结核分枝杆菌有共同抗原）。其 方法和判定如下：1. 注射部位及术前处理：将牛只编号后在同一颈侧的中部选两个注射点，一点在上 1/3 处，一点在下 1/3 处。剪毛（或 提前一天剃毛）直径约10cm,用卡尺测量术部中央皮皱厚度， 作好记录。两个注射点之间的距离不得少于10cm,注射点距离颈项顶端和颈静脉沟也不得少于10cmo如术部皮肤有变化时,选对侧颈部进行。2. 注射剂量：在上1/3处皮内注射禽提纯结核菌素0.1ml （每毫升含 25000 国际单位）,在下 1/3 处皮内注射牛型提纯结 核菌素 0.1ml （每毫升含 10 万国际单位）。不论大小牛只, 注射剂量相同。如用 2.5ml 注射器注射剂量（ 0.1ml ）不易 掌握,应加等量生理盐水或注射用水稀释后皮内注射 0.2ml , 冻干菌素稀释后应当天用完。3. 注射方法： 以 75%酒精消毒术部， 然后皮内注射定量的牛、 禽两种提纯结核菌素，注射后局部应出现小包，如注射有疑 问时，可另选 15cm 以外的部位或对侧颈部重作。4. 观察反应：注射后经 72小时判定（可于 48和96 小时各 进行一次判定） 。详细观察和比较两种菌素炎性反应的程度。 并用卡尺测量其皮厚，分别计算出牛、禽两种菌素皮内变态 反应的皮厚差，然后比较二者之间的皮差（如果增加了 48 和 96 小时的判定时间，即可比较出两种菌素反应消失的快 慢）。5. 判定结果：5.1 牛型提纯结核菌素反应大于禽型提纯结核菌素反应，两者皮差在2mm以上,判为牛型提纯结核菌素皮内变态反应阳 性牛。记录符号为（M+。对已经定性的结核牛群。少数牛 即使牛、禽两型之间的皮差在2mm以下，或牛型提纯结核菌素反应略小于禽型提纯菌素的反应（不超过2mm，也应判定牛结核菌素反应牛（但牛型提纯结核菌素本身反应的皮厚 差应在2mm以上）。5.2 禽型提纯结核菌素反应大于牛型提纯结核菌素的反应， 两者的皮差在2mm以上,判为禽型提纯结核菌素皮内变态反 应阳性牛。其记录符号为（A+）。对已经定性的副结核菌或 禽结核菌感染的牛群，即使禽、牛两型提纯结核菌素之间的反应皮差小于2mm或禽型提纯结核菌素反应略小于牛型提纯 结核菌的反应（不超过 2mm，也应判为禽结核菌素反应牛（但禽型提纯结核菌素本身反应的皮差应在2mn以上）。6. 对进出口牛的检疫，任何一种菌素（牛、禽、副）皮差超过2mm以上（或局部有一定炎性反应），均认为是不合格。