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实验七气相色谱仪原理和使用一、目的要求1、掌握气相色谱仪结构、工作原理和内标法应用。2、熟悉气相色谱仪的操作3、了解气相色谱法在中药分析中的应用。二、基本原理仪器工作原理图样品测定原理牛黄解毒片由牛黄、雄黄、石膏、大黄、黄芩、桔梗、冰片、甘草组成。其中冰片为龙脑和异龙脑的混合物,具挥发性。因此本实验采用GC法,对牛黄解毒片中所含冰片进行测定,并用内标法计算含量。三、仪器与试药1、气相色谱仪GC9800F(上海科创色谱仪器有限公司)、微量进样器。2、水杨酸甲酯、乙醚、醋酸乙酯(AR)。3、冰片对照品(中国药品生物制品检定所)。4、牛黄解毒片(市售品)。四、操作步骤1、讲述仪器结构:N2钢瓶、空气钢瓶、氢气发生器,气体净化器;进样器、橡胶垫片、衬管;柱温箱、毛细管柱、分流管、尾吹管;FID检测器2、讲述仪器操作(详见附录):(1)顺时针打开氮气和空气钢瓶、接通氢气发生器电源。(2)接通仪器电源。(3)设置气化、柱箱、检测器温度,并运行。(4)确定各气体流量。(5)打开FID电源,设置灵敏度和衰减。(6)打开电脑,打开N2000在线,选择通道1,设置方法、信息等。(7)查看基线。(8)点火。(9)待基线稳定后进样。(10)进入N2000离线,查看色谱图和数据。(11)记录所需色谱峰保留时间、峰面积、分离度、塔板数、对称因子等。(12)利用内标法进行样品溶液浓度的计算。(13)柱的老化。(14)关机3、样品分析色谱条件以二甲基聚硅氧烷(SE-30)为固定相;柱温为130C,气化室为200C,载气为N;柱前压0.06MPa;H0.03MPa(20ml/min);空气0.03MPa;尾吹0.03MPa;22FID检测器,控制温度200Co校正因子测定内标溶液配制取水杨酸甲酯0.5g,精密称定,置250ml量瓶中,加乙酸乙酯至刻度,摇匀,作为内标溶液(2mg/ml)。(已备)对照品溶液配制取冰片对照品20mg,精密称定,置10ml量瓶中,加内标溶液至刻度,摇匀,作为对照品溶液(2mg/ml)。(已备)测定校正因子取冰片对照品溶液1口l注入气相色谱仪,测定3次,计算校正因子。测定法取本品6片,去薄膜衣,研细,取0.5g,精密称定,置15ml带塞试管中,加入乙醚10ml,密塞,冰水浴超声提取10min。提取液分两次转移至8ml离心管中,离心(3000rpm,10min),倾出上清液,沉淀用5ml乙醚洗涤1次,离心,合并上清液,扌车干,残渣用内标溶液溶解,移置10ml量瓶中,并稀释至刻度,摇匀,用微孔滤膜(0.45口m)滤过,取续滤液,即得。精密吸取1口l,注入气相色谱仪,测定,按内标法计算含量。(已备)附GC9800F气相色谱仪的操作步骤1、打开载气(N)、空气气瓶,减压至0.3-0.4MPa,开启氢气发生器,确认整个2气路系统不漏气。2、打开仪器电源,从温度控制器面板输入柱箱(130C)、气化室(200C)、检测器温度(200C),然后按“启动”键。3、打开气阀(位于温度控制器右上方),调整载气(N)、空气,氢气的压力和2流速,(实验前均调好,因仪器调钮严重滞后,老师学生一般实验时不要轻易动调钮)。4、打开FID电源,选择FID灵敏度(109Q-2档)和信号衰减(1)5、打开微机开关,调用N2000气相色谱在线分析程序,输入相关的信息(选择通道1、实验信息、方法等),进入数据采集窗口。6、按下“查看基线”按钮(数据采集窗口靠右侧第一个按钮),考察基线是否平稳。7、基线平稳后,检测器温度高于100C后,即可点火(点火口位于温度控制器顶部)。点火后,基流变小,即基线降低。关闭点火开关。8、待基线再次平稳后,按“斜率测试”按钮(数据采集窗口靠右侧第五个按钮),进行斜率检查,进样分析,进样口位于温度控制器顶部。进样的同时,按下“数据采集”按钮(数据采集窗口靠右侧第二个按钮)。9、进入N2000离线,查看色谱图和数据。10、记录所需色谱峰保留时间、峰面积、分离度、塔板数、对称因子等。11、利用内标法进行样品溶液浓度的计算。12、柱的老化:设置柱温200C,恒温20分钟。13、关机顺序:a)关闭氢气阀(熄火)、氢气发生器、空气,重新打开氢气阀(排除剩余氢气)。b)设置柱温50C,待恒温后关机。c)关闭载气。
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