深圳上泰生物工程有限公司工艺用水微生物限度检查标准操作规范AM-03-ZL-03（V1.0）修改页版本修订文号修改内容概述修订人生效日期V1.0新增1目的32适用范围33 术语34 参考法规、标准 35职责36内容37相关文件和记录 5创新生物科技改善人类健康第#页，共5页深圳上泰生物工程有限公司工艺用水微生物限度检查标准操作规范AM-03-ZL-03（V1.0）工艺用水微生物限度检查标准操作规程1目的1.1规范体外诊断试剂用纯化水微生物限度检查的操作。2适用范围2.1适用于本公司体外诊断试剂用纯化水的微生物限度检查。3术语3.1无4参考法规、标准4.1中华人民共和国药典（2010版二部）附录XJ微生物限度检查法。5职责5.1质量部QC负责本规程的实施。6内容6.1微生物限度检查环境要求6.1.1微生物限度检查的的操作应在洁净度为10000级局部100级的单向流空气区域内进行，检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染。6.1.2微生物限度检查室应保持洁净，单向流空气区域、工作台面及环境应定期监测洁净度 并应符合规定要求。6.2微生物限度检查用培养基及配制6.2.1细菌检查培养用营养琼脂培养基，霉菌和酵母菌检查培养用玫瑰红钠琼脂培养基。6.2.2按配方采购各组份自行配制培养基应进行培养基灵敏性试验，采购市售已配制好的培养基粉，可向生产厂商索取包含有培养基灵敏性试验的检测合格报告。6.2.3微生物限度检查用培养基配制执行培养基配制标准操作规程。6.3检查方法：采用薄膜过滤法，过滤用滤膜孔径应不大于0.45u m直径应为50mm材质为混合膜。6.4微生物限度检查前的准备6.4.1每次操作前，操作人员应用消毒液擦拭操作台、设备、仪器及其它与无菌操作有关的 设备、器具，开启紫外灯或洁净工作台层流罩30分钟后，关闭紫外灯。6.4.2微生物限度检查所用取样瓶、薄膜过滤器及其滤膜、培养瓶、移液管等用具均应用牛 皮纸或纱布包裹好，经121C高压灭菌20min（湿热蒸汽灭菌）。配制培养基的灭菌，按市售培养 基粉规定的灭菌参数执行。创新生物科技改善人类健康第#页，共5页深圳上泰生物工程有限公司工艺用水微生物限度检查标准操作规范AM-03-ZL-03（V1.0）643取样：取样点位置按生产工艺用水管理制度执行，每一监测点取样量为150mlX2瓶。644通过传递窗将待检样品、微生物限度检查用培养基、已灭菌薄膜过滤器、滤膜以及其 它工具传入微生物限度检查操作室。6.5微生物限度检查操作6.5.1核对检品及取样点名称、批号、封口情况、液体外观等无异常。6.5.2将滤膜装入薄膜过滤器内，薄膜过滤器与真空泵连接好，检查装置完好无松动。6.5.3如需过滤前应用少量 0.9%氯化钠冲洗液过滤以润湿滤膜，使用时应保证滤膜在过滤 前后的完整性，为发挥滤膜的最大过渡效率，应注意保持待检样品溶液及冲洗液覆盖整个滤膜 表面。6.5.4取5ml待检样品直接过滤，过滤后如需冲洗可用PH7.0无菌氯化钠一蛋白胨溶液或其 它适宜冲洗液如0.9%无菌生理盐水适量冲洗滤膜，每张滤膜每次冲冼量一般为100m 1冲冼次数不少于3次，且总冲洗量不得超过1000m1以避免滤膜上的微生物受到损伤。6.5.5过滤完毕，取出滤膜，滤面朝上贴于培养基平板上培养，每种培养基至少制备一张滤 膜。6.5.6如待检样品每1m1含菌量较多时，可取待检样品1ml加PH7.0无菌氯化钠蛋白胨溶液 或其它适宜冲洗液如0.9%无菌生理盐水稀释至适宜稀释级混匀，然后取相当于每张滤膜含Iml待检样品的稀释级供试液进行试验。6.5.7阴性对照试验：取试验用的冲洗液 5m1,照待检样品试验的同样方法滤膜过滤操作， 作为阴性对照，阴性对照不得有菌生长。6.6如若未使用冲洗液，直接取空白滤膜贴于培养基平板上，作为阴性对照，阴性对照不得 有菌生长。6.6.1试验完毕，关闭层流罩或超净工作台，清洁台面及操作室环境。6.7培养和计数6.8营养琼脂培养基在35C 2C培养3天，玫瑰红钠琼脂培养在 25C 2C培养5天。逐 日观察菌落生长情况；点计菌落数。6.9均数报告规则6.10以相当于1ml待检样品的菌落数报告菌数；若滤膜上无菌落生长，以1报告菌数(每张滤膜过滤1ml待检样品)，或1乘以最低稀释倍数的值报告菌数。6.11结果判定6.12依据工艺用水质量标准和检验规程中标准判定。创新生物科技改善人类健康第#页，共5页深圳上泰生物工程有限公司工艺用水微生物限度检查标准操作规范AM-03-ZL-03(V1.0)7相关文件和记录7.1相关文件AM-03-ZL-12培养基配制标准操作规程AM-03-ZL-04工艺用水质量标准和检验规程AM-03-SC-21生产工艺用水管理制度7.2质量记录AM-04-ZL-07工艺用水微生物限度检查记录创新生物科技改善人类健康第#页，共5页