精心整理目的意义：水稻是重要的粮食作物之一，其品质优劣是值得人们重视的问题。一个高产水稻品种，往往由于食味差、或营养不丰富，而不受大众的欢迎。因此，在保证高产的同时，还要改善稻米的品质。本实验将测定大米品质的几个重要生化指标，为水稻育种提供理论依据。大米蛋白质含量的测定考马斯亮兰 G250 法一、原理考马斯亮 G250 是一种染料，在游离状态下呈红色，在 465nm 波长处有最大光吸收。它能与蛋白质稳定结合， 结合蛋白质后变为青色， 在 595nm 处有最大吸收， 在一定蛋白质浓度范围内 （0 1000 g/ml），蛋白质 色素结合物在 595nm 波长下的光吸收与蛋白质含量成正比，故可用于蛋白质的定量测定。该法反应迅速，蛋白质与考马斯亮兰 G250 的结合反应能在 2 分钟内达到平衡。结合物在室温下 1 小时内保持稳定， 反应非常灵敏， 可测出微克级蛋白质含量， 是最近新发展起来的一种较理想的蛋白质定量法。二、实验材料、仪器及试剂1仪器：721 型分光光度计离心机50ml 容量瓶 10ml 刻度试管研钵量筒移液管2试剂：（1）牛血清白蛋白（ 1000g/ml）：称取 100.00mg 牛血清白蛋白，溶于 100ml 蒸馏水中，配制成标准蛋白质溶液。（2）考马斯亮兰 G-250 溶液：称取 100ml 考马斯亮兰 G250 ，溶于 50ml90% 乙醇中，加入 85% （W/V ）的磷酸 100ml ，最后用蒸馏水定容到 1000ml ，过滤，常温下可放置 1 个月。（3）0.1mol/LnaOH ：称取 4g 氢氧化纳，用蒸馏水溶解，并定容至1000ml 。3材料：大米粉三、实验方法1标准曲线的制作：取 6 只 10ml 刻度试管，编号，按下表数据配制牛血清白蛋白标准溶液。准确吸取上述各管溶液0.1ml ，对应放于另外 6 支 10ml 刻度试管中，加入 5ml 考马斯亮兰 G-250 溶液，盖塞，将试管中溶液给向倒转混合，放置 2 分钟后，用 10mm 光径的比色杯在 595nm 波长下比色。以光密度值为纵坐标，以蛋白质浓度值为横坐标，制作出标准曲线。精心整理精心整理2样品中蛋白质提取：（1）准确称取稻米粉 0.5 克，放入研钵中，加 2ml0.1mol/LNaOH ，研磨成匀浆，转入到 10ml 离心管中，再用 6ml0.1mol/LNaOH 分三次洗涤研钵，洗液一并转入 10ml 离心管中，用玻棒搅拌，放置 30 分钟，放置过程间断搅动数次。 3500rpm 离心 15 分钟，上清液转入 50ml 容量瓶中，用蒸馏水定容到刻度，摇匀，得碱溶性蛋白。（2）将上述沉淀用70% 乙醇重复提取，操作步骤同上，得醇溶性蛋白。3测定：吸取提取液 0.1ml ，放入 10ml 具塞刻度试管中，加 5ml 考马斯亮兰 G-250 试剂，混匀，放置 2 分钟，用 10mm 光径的比色杯在 595nm 波长下比色（比色空白用 0.1ml 蒸馏水代替提取液与 5ml 考马斯亮兰 G-250 试剂混合），记录 OD 值。然后根据所测 OD595nm 在标准曲线上查出所对应的蛋白质浓度（ C）。四、结果计算：五、注意事项：（1）由于此方法十分灵敏，因此，所用器皿必须清洗干净，取样必须准确，否则会造成很大的误差。（2）定容时蒸馏水要沿着管壁缓慢加入，以免产生大量气泡，造成定容不准确，实验也会出现误差。（3）谷物种子蛋白质主要是谷蛋白和醇溶蛋白，因此，稻米粉蛋白含量应为碱溶性谷蛋白和醇溶性蛋白含量之和。精心整理