资源预览内容
第1页 / 共3页
第2页 / 共3页
第3页 / 共3页
亲,该文档总共3页全部预览完了,如果喜欢就下载吧!
资源描述
大肠菌群测定的操作细则大肠菌群系指一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。该菌 主要来于人畜粪便,故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量,推断食品中有否污染 肠道致病菌的可能。食品中大肠菌群数系以100mL(g)检样内大肠菌群最可能数(MPN)表示。1设备和材料1.1 温箱:361C。1.2冰箱:04C。1.3 恒温水浴:44.50.5C。1.4天平。1.5显微镜。1.6均质器或乳钵。1.7平皿:直径为90mm。1.8试管。1.9吸管。1.10广口瓶或三角烧瓶:容量为500mL。1.11玻璃珠:直径约5mm。1.12载玻片。1.13酒精灯。1.14试管架。2培养基和试剂2.1乳糖胆盐发酵管:按GB 4789.28中4.9规定。2.2伊红美蓝琼脂平板:按GB 4789.28中4.25规定。2.3乳糖发酵管:按GB 4789.28中4.10规定。2.4 EC 肉汤:按 GB 4789.28中4.11 规定。2.5磷酸盐缓冲稀释液:按GB 4789.28中3.22规定。2.6生理盐水。2.7革兰氏染色液:按GB 4789.28中2.2规定。3操作步骤3.1检样稀释3.1.1以无菌操作将检样25mL(或g)放于有225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃 瓶内(瓶内予置适当数量的玻璃珠)或灭菌乳钵内,经充分振摇或研磨做成1:10的均匀稀释液。 固体检样最好用均质器,以8 000-10 000 r/min的速度处理1min,做成1:10的均匀稀释液。3.1.2用1mL灭菌吸管吸取1:10稀释液1mL,注入含有9mL灭菌生理盐水或其他稀释液的试 管内,振摇试管混匀,做成1:100的稀释液。3.1.3另取1mL灭菌吸管,按上条操作依次做10倍递增稀释液,每递增稀释一次,换用1支1mL 灭菌吸管。3.1.4根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计,选择三个稀释度,每个稀释度,接种3 管。3.2乳糖发酵试验将待检样品接种于乳糖胆盐发酵管内,接种量在1mL以上者,用双料乳糖胆盐发酵管,1mL及 1mL以下者,用单料乳糖胆盐发酵管。每一稀释度接种3管,置361 C温箱内,培养242h,如所有乳糖胆盐发酵管都不产气,则可报告为大肠菌群阴性,如有产气者,则按下列程序进行。3.3分离培养将产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板上,置361C温箱内,培养18-24h,然后取出, 观察菌落形态,并做革兰氏染色和证实试验。3.4证实试验在上述平板上,挑取可疑大肠菌群菌落1-2个进行革兰氏染色,同时接种乳糖发酵管,置 361 C温箱内培养242h,观察产气情况。凡乳糖管产气、革兰氏染色为阴性的无芽胞杆菌, 即可报告为大肠菌群阳性。3.5报告根据证实为大肠菌群阳性的管数,查MPN检索表,报告每100mL(g)大肠菌群的MPN值。4 粪大肠菌群(faecal coliform)4.1用接种环将所有产气的乳糖胆盐发酵管培养物 (见3.2条)转种于EC肉汤管内,置 44.50.2C水浴箱内(水浴箱内的水面应高于EC肉汤液面),培养242h,经培养后,如所有EC 肉汤管均不产气,则可报告为阴性;如有产气者,则将所有产气的EC肉汤管分别转种于伊红美 蓝琼脂平板上,置培养18-24h,凡平板上有典型菌落者,则证实为粪大肠菌群阳性。4.2结果报告根据证实为粪大肠菌群的阳性管数,查MPN检索表,报告每100mL(g)粪大肠菌群的MPN值。回答者:datoubobol.-四级2007
网站客服QQ:2055934822
金锄头文库版权所有
经营许可证:蜀ICP备13022795号 | 川公网安备 51140202000112号