RNAi发卡式载体构建及转化1利用反向遗传学研究基因功能的策略有哪些？2RNAi的分子机制。3RNAi 的生物学意义如何？PCR法克隆目的基因全长1 若克隆某基因全长，在进行引物设计时，有哪些需要特别注意的事项？2 一个PCR循环的步骤？3 PCR反应体系的重要组成？序列测定6.简述Sanger双脱氧链终止法进行DNA序列分析的基本原理，并将下列DNA测序胶片的结果（正向引物测序），从53写出合成链的DNA序列。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质1SDS - PAGE测定蛋白质的分子量的原理是什么？2SDSPAGE是变性条件下的蛋白质电泳，如果进行保持蛋白质天然特性的非变性电泳其与SDS-PAGE有什么主要区别？双向电泳分离蛋白质6.常用的双向电泳，第一向采用技术，根据来分离蛋白质；第二向采用技术，根据来分离蛋白质。免疫印迹检测目的蛋白质的表达1 Western Blotting 检测目的蛋白质表达的原理？Southern杂交2. 探针为什么要进行100 变性处理？4.探针：能够与靶分子特异结合的核酸分子，带有供杂交后检测的合适标记物。5.核酸分子在高于等电点的pH溶液中带电荷，在电场中向极移动。6.核酸电泳时用TAE缓冲液，用MOPS缓冲液（选填：DNA、RNA）。RNA的提取与Northern杂交1RT-PCR反应过程中经常使用哪几种引物？2阐述Northern杂交过程中的主要实验步骤和相关注意事项。3.Northern杂交可以测定总RNA或poly(A)+RNA中特定mRNA分子的（选填：表达丰度、基因拷贝数）。4.名词解释：Northern杂交，探针原位杂交分析1原位杂交、Northern Blot 杂交和RT-PCR均可以检测组织中特定基因的表达，三者有何异同？第十九章 分子生物学常用技术一、 单选题 1. “Sourthern Blotting”指的是 (A) 将DNA转移到膜上，用DNA做探针杂交 (B) 将RNA转移到膜上，用DNA做探针杂交 (C) 将DNA转移到膜上，用蛋白质做探针杂交 (D) 将RNA转移到膜上，用RNA做探针杂交 (E) 将DNA转移到膜上，用RNA做探针杂交 2. 分子杂交试验不能用于 (A) 单链DNA分子之间的杂交 (B) 单链DNA与RNA分子之间的杂交 (C) 抗原与抗体分子之间的结合 (D) 双链DNA与RNA分子之间的杂交 (E) RNA与RNA之间的杂交 3. 探针是经过什么标记的核酸分子 (A) 用放射性同位素标记 (B) 用生物素标记 (C) 用地高辛标记 (D) A、B、C都对 (E) 用抗体标记 4. 下列哪一条在分子印渍技术中不适用 (A) DNA向NC膜转移 (B) 蛋白质向PVDF膜转移 (C) DNA向尼龙膜转移 (D) RNA向NC膜转移 (E) 蛋白质向一号滤纸转移 5. 用于核酸杂交的探针至少应符合下列哪条 (A) 必须是双链DNA (B) 必须是双链RNA (C) 必须是单链DNA (D) 必须是 100bp以上的大分子DNA (E) 必须是蛋白质 6. 核酸斑点杂交试验中可省略的步骤是 (A) 电泳 (B) 核酸样品固定于NC膜 (C) 杂交信号检测 (D) 标记探针 E) 制备样本核酸 7. 免疫印渍技术中不适合应用的步骤是 (A) 聚丙烯酸胺凝胶电泳 (B) 用NC膜或PVDF膜 (C) 靠毛细管作用进行转移 (D) 用同位素标记抗体(E) 用非同位素标记抗体 8. 原位杂交是指 (A) 在NC膜上进行杂交操作 (B) 在组织切片或细胞涂片上进行杂交操作 (C) 直接将核酸点在NC膜上的杂交 (D) 在PVDF膜上进行杂交操作 (E) 在凝胶电泳中进行的杂交 9. 有关DNA链末端终止法的不正确说法是 A) 需要ddNMP (B) 需要ddNTP (C) dNTP：ddNTP的比例要合适 (D) 需要放射性同位素或荧光染料 (E) 需要dNTP 10. 有关DNA序列自动化测定的不正确叙述是 (A) 用荧光代替了同位素标记 (B) 激光扫描分析代替人工读序 (C) 基本原理与手工测序相同 (D) 不再需要引物 (E) 需要与手工序列分析相同的模板 11. 某种遗传性疾病是由一个点突变（无限制性内切酶位点变化）引起，可以 (A) 用DNA单链构象多态性分析突变 (B) 用限制性片段长度多态性分析突变 C) 用 Western Blotting分析突变 (D) 用电泳分析基因组DNA (E) 用电泳分析细胞中的所有蛋白质 12. 免疫印渍技术指的是 (A) 结合在膜上的蛋白质分子与抗体分子结合 B) 结合在膜上的DNA分子与抗体结合 (C) 结合在膜上的RNA分子与抗体结合 (D) 结合在膜上的DNA分子与RNA分子结合 (E) 结合在膜上的免疫分子与DNA的结合 13. 同位素标记探针检测NC膜上的RNA分子(A) 叫做Northern Blotting (B) 叫做Southern Blotting (C) 叫做Western Blotting (D) 蛋白分子杂交 (E) 免疫印渍杂交 14. 用做探针的DNA分子必须 (A) 在杂交前变性 (B) 在杂交前复性 (C) 长于30个核着酸 (D) 短于30个核着酸 (E) 是双链分子 二、填空题 1 只要 DNA 或 RNA 的单链分子之间存在着一定程度的_同源性_ ，就可以在不同的分子间形成_杂合分子_ 。 2 利用_印迹_ 使胶中的生物大分子或大分子的片段_转到膜上_ ，可使之成为固相化分子。 3 存在于 NC 膜上的生物分子可以放到杂交液中，与_探针_ 进行_杂交_ 。 5 Northern blotting 主要用于检测_基因_ 的表达水平以及分析 基因选择性剪接 6 蛋白质的印渍分析，也称为_免疫印迹_ 。7 目前 DNA 序列的手工测定或自动化测定所基于的技术原理为 _ 8 限制性片段长度多态性分析（ RFLP ）是利用_限制性内切酶酶解_ DNA 分子再经_电泳_ 即可检测出突变 DNA 。 9 基因转移技术包括_细胞_ 水平的基因转移，而且可以进行_动物整体_ 水平的转移。 10 在转基因技术中，被导人的目的基因称为_转基因_ ，目的基因的受体动物称为_转基因动物_ 。 11 单链构象多态性分析（ SSCP ）的原理基于 DNA 单链具有_特定构象_ 特点，这种特点的形成取决于_DNA序列_ 。17.RNA干扰过程中三个重要组成元件是 ， ， 和 。18.PCR扩增反应中一个循环的三个步骤依次是 ， ， 和 。19.用于荧光定量PCR标记的Taqman水解探针是在PCR循环中的 延伸 阶段中发光。20 DNA芯片的原理为 ，蛋白质芯片的原理为 。21.常规PCR技术是 对PCR扩增反应的 终产物 进行定性及定量分析；荧光定量PCR技术对PCR扩增反应中 每一循环 的产物进行定量分析。22.PCR反应体系中除了含有Mg2+的缓冲体系外，还要具备 、 和 等四大要素。26.蛋白质双向电泳中的第一向和第二向分别是 和 27. 鉴定生物大分子间的相互作用方法，常用针对蛋白间相互作用的方法 和 ；蛋白，DNA间相互作用的方法为 和 。28常用融合蛋白标签有 和 。三、名词解释题 1 DNA 印迹技术 2 RNA印迹技术 3 蛋白质印迹技术 4 探针（ probe ） 5 基因敲除6 限制性片段长度多态性分析（ RFLP ） 7. DNA 芯片 8.RT-PCR 9.CT值 11.双向电泳12单链多态构象分析（ SSCP ）13.定点诱变技术14.实时定量PCR 15.SiRNA 16.TaqMan探针17.DNA指纹图谱五、问答题 1 核酸分子杂交的主要实验方法有哪些？主要用途是什么？ 2 基因转移和基因剔除技术在医学上可能有哪些用途？ 3 简述 RFLP 和 SSCP 检测基因突变的原理。 4 简述 DNA 末端合成终止法测定 DNA 序列的原理？ 5. PCR的基本原理是什么?用PCR扩增某一基因，必须预先得到什么样的信息?7.简述用RNAi技术减低目的基因表达水平的机理？8.酵母双杂交的原理是什么？9.引物是 PCR 反应体系的四大要素之一， PCR 的许多应用都是通过引物设计来实现的，请问引物设计的一般原则是什么？10.标签融合蛋白沉淀法鉴定蛋白相互作用的方法体系？11.EMSA或gel shift原理是什么？方法体系？12.ChIP的原理及方法体系？基因的表达与调控一 选择题1.在真核基因表达的调控中, _调控元件能促进转录的速率。A 衰减子B 增强子 C 阻遏蛋白D TATA 盒2. I在一个可诱导的操纵元中，基因 A 一直表达 B 一般不表达，直到一个信号分子诱导其表达C一直表达，直到一个信号分子关闭其表达D 从不表达.3.在一个可诱导的操纵元中，能够引起基因表达的调节物质称为A 阻遏蛋白B 辅阻遏蛋白 C 诱导分子D 辅诱导分子4.在大肠杆菌中，能够诱导乳糖操纵元表达的效应分子是 A 异构乳糖B 代谢激活蛋白C cyclic AMPD -半乳糖苷酶.5.在乳糖操纵元中，编码-半乳糖苷酶的基因是A lacA B lacZC lacYD lacO6.当lacY基因发生无义突变时，在大肠杆菌细胞中仍能产生的酶是 A-半乳糖苷酶B透酶C转乙酰酶D上面三个全产生7. 当生长在含有乳糖培养基上的大肠杆菌细胞中出现lacI 的产物时，A 阻遏蛋白将结合lac 操纵基因区B-半乳糖苷酶不会产生 C lac 操纵子基因将开始转录D细胞将不能消化乳糖. 8. 在一个大肠杆菌细胞中，当 lacO 基因发生组成型突变时，操纵元基因A 只在乳糖存在时表达B 在乳糖存在时不表达C 在乳糖不存在时不表达 D无论乳糖存在与否均表达. 9. 在lacI大肠杆菌菌株中，在什么条件下乳糖操纵元是表达的A 只在乳糖存在时B 只在乳糖不存在时 C无论乳糖存在与否均表达.D都不是 10. 乳糖操纵元是A 负调控下的可诱导操纵元B 负调控和正调控共同控制的可阻遏操纵元 C负调控和正调控共同控制的可诱导操纵