牛血清在细胞培养中的作用与质量规定生物技术已经被世界各国视为一种高技术，在整个科学技术中占据了特殊的明显地位,特别是生命科学的发展更 & +HU 离不生物技术,生命科学的发展备受各国的注重。国内在诸多大学中都设立了生命科学院。现代生物技术一般认D.BP3x为涉及基因工程技术、细胞工程技术、酶工程技术和发酵工程技术，而这些技术的发展几乎都与细胞培养有密切atUU 关系，特别是在医药领域的发展，细胞培养更具有特殊的作用和价值。例如基因工程药物或疫苗在研究生产过程 U(c3I中诸多是通过细胞培养来实现的。基因工程乙肝疫苗诸多是以CHO细胞作为载体；细胞工程中更是离不细胞培养， BjhnL 杂交瘤单克隆抗体,完全是通过细胞培养来实现的，既使是目前飞速发展的基因工程抗体也离不开细胞培养。正 j！m）2a 在倍受注重的基因治疗、体细胞治疗也要通过细胞培养过程才干实现，发酵工程和酶工程有的也与细胞培养密切 %l+q 有关。总之,细胞培养在整个生物技术产业的发展中起到了很核心的核心作用。细胞培养的发展，培养基的质量 egYEV-Da 又是核心，而培养基的重要成分中动物血清对细胞的生长繁殖发挥着重要甚至是难以替代的作用。在动物血清的 rd.%8 应用中牛血清又是最为广泛的，因此牛血清是医药生物技术产品中重要的原材料之一。保证牛血清质量也是增进 ),w 生物制品质量提高的重要环节。 0bDv |5UGj 一、牛血清在细胞培养基中的重要功能 ir 牛血清是细胞培养中用量最大的天然培养基,具有丰富的细胞生长必须的营养成分，具有极为重要的功能。wp%*f K|Aj9Co3.有些状况下结合蛋白质能与有毒金属和热原质结合，起到解毒作用。 7P!GGD , GPG4.是细胞贴壁、铺展在塑料培养基质上所需因子来源。 =&thj V5； n 5.起酸碱度缓冲液作用。 27udrg F: 4 6提供蛋白酶克制剂,使在细胞传代时使剩余胰蛋白酶失活,保护细胞不受伤害。 ffOz YtpJB 二、 牛血清的重要成分 W.$lyo血清是一种很复杂的混合物,其构成成分虽大部分已为人所知，但尚有一部分尚不清晰,并且血清构成及含量常 APXQ随供血动物的性别、年龄、生理条件和营养条件不同而异。 |*R_i4h Qy 1.蛋白质是牛血清中重要成分。除涉及可携带金属离子、脂肪酸和自身是激素类蛋白外重要尚有白蛋白，球蛋白。;UBpy7 纤维粘连素细胞增进细胞附着； nGP!5F 2 巨球蛋白 克制胰蛋白酶的作用;胎牛血清中含胎球蛋白促细胞附着;转铁蛋白 能结合铁离子，减少其毒性W8m_ 和被细胞运用。 8ydcE CY9.多肽:血小板促生长因子能促细胞分裂，是多肽家庭的重要成员之一,是重要的促细胞增殖因子；成纤维细胞 nOZ 3.激素:激素对细胞的作用是多方面的。8jpCi8 胰岛素：增进细胞摄取葡萄糖和氨基酸，与促细胞分裂有关。 J(v1 类胰岛素生长因子:能与细胞体现的胰岛素受体结合,从而有胰岛素同样的作用。uU91nm促生长激素：促细胞增殖效应。 (1|P7氢化可的松：血清中具有定量的该成分，它也许兼有促细胞贴附和增殖作用,但有人证明,血清中的氢化可的松 _I5xp,如细胞密度高时也许有克制细胞的作用和诱导其发生分化。 K $RcN 9$fa/ 4其她成分-m2rZ 氨基酸、葡萄糖、酮酸等对多种营养成分的合成培养基意义不大。与蛋白相结合状态的微量元素对细胞培养故意 ah 义。G MY0 s 三、牛血清的质量规定vg I_ 随着科学技术的发展和生活水平的不断提高对生物医药产品的质量规定也越来越高,因此对制备工艺中所波及到 mr F9l的多种原材料的质量原则规定也越来越高，特别是对用于细胞培养基中的重要天然成分牛血清的质量规定也vO 不断提高。牛血清涉及胎牛血清、新生牛血清和成牛血清。 +brAxmJh.A（M （一)、WHO发布的用动物细胞体外培养生产生物制品规程中的规定: wUAN |d;D1. 牛血清必须来自有文献证明无牛海绵状脑病的牛群或国家。并应具有合适的监测系统。 ti= Fn ;1u. J9有些国家还规定牛血清来自未用过反刍动物蛋白饲料的牛群。;we md73证明所用牛血清中不含对所生产疫苗病毒的克制物。 b3M )2OSr)4.血清要通过滤膜过滤除菌，保证无菌。,;?8y DY)Iihl 5.无细菌、霉菌、支原体和病毒的污染,有些国家规定无细菌噬菌体污染。 ?1 =?+ 6.对细胞有良好的支持繁殖作用。67z-X *Xe:YS （二）、国内在对牛血清的质量中国生物制品重要原辅料质控原则中提出比较严格的原则规定。包 :P%=括蛋白质含量,细菌、真菌、支原体、牛病毒、大肠杆菌噬菌体、细菌内毒素，支持细胞增殖检查。:e#!C% Ov ：E （三）、美国对牛血清的质量规定:Gibo 和Sima二家重要的美国牛血清供应商的牛血清都已进入到国内市场, ( pg.nm 她们对其质量原则规定都极为严格，从血清来源到产品质量均有明确规定。|EvGTYtBlGQ!Iz 1)血清来源:可从世界各国收集胎牛血清，但是必须符合她的质量原则和美国农业部进口规定。地方当局还不*qjs97 q (?zX oH）血清的制备：-p0 M a.超低gG胎牛血清：通过亲和层析工艺清除胎牛血清中的球蛋白，使FB 球蛋白含量减到最低，一般IgG5u/l,生物学活性不变。 EWugdz Ace)(:ludv .血清透析:用11400分子量的透析膜在0.15 NCl中透析直到使葡萄糖含量7A 分别在需氧和厌氧条件下进行，有的还需要在支原体琼脂培养皿上传4次,Hoest荧光素染色检查那些培养法 gHd: O：无法检出的支原体如猪鼻支原体等。 WdGSsD OR+T 病毒检查: M*x&=牛兰舌病毒 ovinue tngue zxvrHYi 牛腺病毒Bovine dnovrs DW：ibc牛细小病毒Boine Parvovis $Rv*# 牛病毒性腹泄病毒BoineVira Diahearus$ap f狂犬病病毒 Rabes g:OJZ 呼肠弧病毒 Revi m 牛呼吸道合胞病毒 BRS fLT副流感病毒型 Paranfluena/i t-/_o ?检查措施:mi已证明无外源因子污染的牛细胞培养物，在细胞生长液中加15%待测血清,连传3代共21天。阴性对照细胞培养液 |L$uCQ 中加1已知无病毒污染的牛血清,与实验组同条件下进行。在观测期内注意细胞形态变化或细胞病变。在观测 aw(81: 期内第4天待检样品和对照样品用原则病毒检测措施检查。 i1SO,N dI C 如待检细胞培养物经胰酶消化后分种到个含盖玻片的容器内。阴性对照样品按同样措施。再将牛腹泄病毒、牛细 )ip : 小病毒、牛腺病毒、狂犬病毒和呼肠弧病毒分别加入待检培养物盖玻片容器内作为阳性对照，再培养7天，用荧光 ?ts 抗体技术进行检查。g0 Q_bJ8ya：g )内毒素检测 =Mq%+用鲎试剂检查。l0xI +=tSy9( 4）细菌噬菌体检查q-）n9 bG 重要检查.Ci（300 or-1)噬菌体。 SDV%& dUIe:&5)激素含量测定 ：2h_MUAw 每批FS对某些激素含量都要进行测定,