.1.2 蛋白质糖基化类型与特点蛋白质的糖基化是一种最常见的蛋白翻译后修饰, 是在糖基转移酶作用下将糖类转移至蛋白质 , 和蛋白质上特殊的氨基酸残基形成糖苷键的过程 。研究表明 ,70%人类蛋白包含一个或多个糖链 ,1%的人类基因组参与了糖链的合成和修饰。哺乳动物中蛋白质的糖基化类型可分为三种:N- 糖基化、 0- 糖基化和 GPI 糖基磷脂酰肌醇锚。大多数糖蛋白质只含有一种糖基化类型, 但是有些蛋白多肽同时连有 N-糖链、 O-糖链或糖氨聚糖。(l) N- 糖基化 : 糖链通过与蛋白质的天冬氨酸的自由 NH2 基共价连接 , 将这种糖基化称为 N-糖基化。 N-连接的糖链合成起始于内质网 (ER), 完成于高尔基体。N-糖链合成的第一步是将一个 14 糖的核心寡聚糖添加到新形成多肽链的特征序列为 Asn-X-Ser/Thr(X 代表任何一种氨基酸 ) 的天冬酰胺 上, 天冬酰胺作为糖链受体。核心寡聚糖是由两分子 N-乙酰葡萄糖胺、九分子甘露糖和三分子葡萄糖依次组成 , 第一位 N-乙酰葡萄糖胺与 ER双脂层膜上的磷酸多萜醇的磷酸基结合 , 当 ER膜上有新多肽合成时 , 整个糖链一起转移。 寡聚糖转移到新生肽以后 , 在 ER 中进一步加工 , 依次切除三分子葡萄糖和一分子甘露糖。 在 ER形成的糖蛋白具有相似的糖链 , 由 Cis 面进入高尔基体后 , 在各膜囊之间的转运过程中 , 原来糖链上的大部分甘露糖被切除 , 但又由多种糖基转移酶依次加上了不同类型的糖分子 , 形成了结构各异的寡糖链。 血浆等体液中蛋白质多发生 N-糖基化 , 因此 N-糖蛋白又称为血浆型糖蛋白。(2) O- 糖基化 : 糖链与蛋白质的 丝氨酸或苏氨酸 的自由 OH 基共价连接。 0-糖基化位点没有保守序列 , 糖链也没有固定的核心结构 , 组成既可是一个单糖 , 也可以是巨大的磺酸化多糖 , 因此与糖基化相比 ,0- 糖基化分析会更加复杂。 0- 连接的糖基化在高尔基体中进行 , 通常第一个连接上去的糖单元是 N-乙酰半乳糖 , 连接的部位为 Ser、 Thr 或 Hyp 的羟基 , 然后逐次将糖残基转移上去形成寡糖链 , 糖1 / 3.的供体同样为核苷糖, 如 UDP-半乳糖。 O-糖蛋白主要存在于黏液和免疫球蛋白等。(3) GPI 糖基磷脂酰肌醇锚 : 是蛋白与细胞膜结合的唯一方式 , 不同于一般的脂类修饰成分 , 其结构极其复杂。许多的受体、分化抗原以及具有一些生物活性的蛋白都被证实通过 GPI 结构与细胞膜结合。 GPI 的核心结构由乙醇胺磷酸盐、三个甘露糖苷、葡糖胺以及纤维醇磷脂组成。 GPI 锚定蛋白的 C 末端是通过乙醇胺磷酸盐桥接于核心聚糖上 , 该结构高度保守 , 另有一个磷脂结构将 GPI 锚连接在细胞膜上。核心聚糖可以被多种侧链所修饰 , 比如乙醇胺锚酸盐基团 , 甘露糖 ,半乳糖 , 唾液酸或者其他糖基。糖基化的结果使不同的蛋白质打上不同的标记 , 改变多肽的构象 , 增加蛋白质的稳定性。糖蛋白的空间结构决定了它可以和那一种 糖基转移酶 结合 , 发生特定的糖基化修饰。在参与糖基化形成的过程中 , 糖基转移酶和糖苷酶 扮演了重要的角色。表 1-1 显示了血清蛋白上 N-糖链合成中重要的糖基转移酶。糖基转移酶是一类负责合成 二糖、寡聚糖和多聚糖的酶 。它们催化核苷酸糖 ( 糖基供体 ) 上的单糖基团 转移到 糖基受体分子上形成糖苷键。 目前己对 多种糖基转移酶 的结构以及编码它们的基因研究清楚 , 并认为糖链的合成没有特定的模板 , 而是通过糖基转移酶将糖基由其供体转移到受体上。尽管如此 , 糖基转移酶具有严格的底物和受体专一性 , 如 a1,6 岩藻糖转移酶 (Fut8) 只催化二磷酸鸟苷 - 岩藻糖，将 L- 岩藻糖残基转移至 N-糖链五糖核心的第一个 N-乙酷葡糖胺上形成 a-1,6 糖苷键。一个寡糖结构可以被一个或几个糖基转移酶识别 , 不同比例的糖基转移酶竞争的结果就形成不同的糖苷键。 糖苷酶是作用于各种糖苷或寡糖使其糖苷键水解的酶的总称 , 又称糖苷水解酶。糖苷酶一般对糖残基的特异性比对糖苷配基的特异性强 , 所以有许多仍未能确定其“真正的天然底物”到底是什么。表 1-1 血清蛋白 N-糖链合成重要糖基转移酶Table 1-1 Glycosyltransferasesthat are importantin the modificationof N-glycans on serum proteins糖基转移酶底物专一性岩藻糖基转移al,2- 岩藻糖基转移al,2 连接到 N- 或 0-糖链末端 Gal 残基酶酶al,3/4- 岩藻糖基转A1,3 或 a1,4 连接到 GlcNAc-Gal 结构 GlcNAc移酶2 / 3.al,6- 岩藻糖基转移al,6 连接到 N- 糖链核心结构第一位GlcNAc酶N-乙酰葡糖氨N-乙酰葡糖氨基转催化 GlcNAc 通过 l-4 连键加到 N- 糖链核心 -甘露基转移酶移酶糖上N-乙酰葡糖氨基转催化在 N- 糖链的三甘露糖核心的al-3 连接甘露糖上移酶 IV形成 GlcNAc- l-4 分支N-乙酰葡糖氨基转催化在 N- 糖链的三甘露糖核心的al-6 连接甘露糖上移酶 V形成 GlNAc- l -6 分支唾液酸转移酶a2,6-唾液酸转移酶以 a2,6 连键将唾液酸转到末端Gal 残基分支上a2,3-唾液酸转移酶以 a2,3 连键将唾液酸转到 Gal 1-3GalNAc 末端 Gal残基上3 / 3