. . ACMG遗传变异分类标准与指南1. 术语在描述孟德尔疾病相关的基因变异时，建议使用如下五级术语： 致病性，可能致病性，意义不明确，可能良性， 良性建议所有致病性(包括可能致病)的结论需要注明疾病与相应的遗传模式(如c.1521_1523delCTT(p.Phe508del)，致病性，囊性纤维化，常染色体隐性遗传)。2. 命名基因变异命名依据人类基因组变异协会（the Human GenomeVariation Society, HGVS( s:/.hgvs.org/mutnomen)制定的命名规则，可利用工具提供正确的HGVS命名来描述变异 (mutalyzer.nl)。参考序列应该是完整的，并来源于具有版本号的美国生物技术信息参考序列数据库(.ncbi.nlm.nih.gov/Refseq/)或LRG数据库(.lrg-sequence.org)。基因组坐标应根据标准基因组版本(如hg19)或覆盖整个基因(包括5和3非翻译区以与启动子)的基因组参考序列来界定。当描述编码变异时，应该在报告中使用和提供每个基因的一个参考转录本。该转录本应该是最长的已知转录本或者是最具临床相关性的转录本。协会支持的参考转录本通常可以通过LRG数据库(.lrg-sequence.org)、CDS共识数据库( s:/.ncbi.nlm.nih.gov/CCDS/CcdsBrowse.cgi)、人类基因突变数据库(.hgmd.cf.ac.uk)、ClinVar (.ncbi.nlm.nih.gov/clinvar)或特异基因座数据库来确定。3. 文献与数据库使用当临床实验室需要对某一变异进行分类并出具报告时，可在已有的数据库与发表的文献中寻找到有价值的参考信息。数据库主要包括两大类：（1）人群数据库，适用于获取某变异在大规模人群中发生频率的相关信息；（2）疾病数据库，主要包含病患中发现的变异以与对其致病性的评估。4. 生物信息学计算预测程序可以辅助解读序列变异工具主要分为两类：一类可以预测错义改变是否会毁坏其所产生的蛋白质的功能或结构；另一种可以预测是否影响剪接。在序列解读中，不同软件工具组合的预测结果被视为单一证据而不是相互独立的证据，软件分析结果只是预测，他们在序列变异解读中的应该慎用，不建议仅使用这些预测结果作为唯一证据来源去做临床判断。5. 序列变异解读的拟定标准本指南提供了两套标准: 一是用于对致病或可能致病的变异进行分类(表3)，另一是用于对良性或可能良性的变异进行分类(表4)。致病变异标准可分为非常强(very strong，PVS1)，强(strong，PS14); 中等(moderate，PM16)，或辅助证据(supporting，PP15)。良性变异证据可分为独立(stand-alone，BA1)，强(strong，BS14)，或辅助证据(BP16)。6.线粒体变异线粒体变异的命名法与核基因的标准命名法不同，使用基因名和m.编号(如m.8993TC)和p.编号，而不是标准的c.编号(见命名法)。目前公认的参考序列是人类线粒体DNA修订版剑桥参考序列: 基因库序列NC_012920 gi: 251831106(.mitomap.org/MITOMAP/HumanMitoSeq)。7.药物基因组学相关基因的汇总与其有临床意义的变异可查询药物基因组学知识库(.pharmgkb.org/)。有关细胞色素P450基因家族等位基因与其命名可查询.cypalleles.ki.se/表1 人群数据库，疾病特异性数据库和序列数据库人群数据库Exome Aggregation Consortiumexac.broadinstitute.org/本数据库中的变异信息是通过对61486个独立个体进行全外显子测序获得。同时也是多种特殊疾病和群体遗传学研究中的一部分。库中不包括儿科疾病患者与其相关人群。Exome Variant Serverevs.gs.washington.edu/EVS本数据库中的变异信息是通过对几个欧洲和非洲裔大规模人群的全外显子测序获得。当缺乏变异信息时, 默认该数据已覆盖。1000 Genomes Projectbrowser.1000genomes.org本数据库中的变异信息是通过对26个种群进行低覆盖度的全基因组测序和高覆盖度的靶序列测序获得。本库所提供的信息比Exome Variant Server更具多样性，但也包含有低质量的数据，有些群体中还包含有关联性个体在。dbSNP.ncbi.nlm.nih.gov/snp本数据库由多种来源获得的短片段遗传变异(通常50 bp)信息组成。库中可能缺乏溯源性研究的细节，也可能包含致病性突变在。dbVar.ncbi.nlm.nih.gov/dbvar本数据库由多种来源获得的基因结构变异(通常50 bp)信息组成。疾病数据库ClinVar.ncbi.nlm.nih.gov/clinvar对变异与表型和临床表型之间的关联进行确定的数据库。OMIM.omim.org本数据库所含人类基因和相关遗传背景，同时具有疾病相关基因遗传变异的代表性样本收录与遗传疾病典型相关的样本变异信息。Human Gene Mutation Database.hgmd.org本数据库中的变异注释有文献发表。库部分容需付费订阅。其他特殊数据库Human Genome Variation Society.hgvs.org/dblist/dblist.html本数据库由人类基因组变异协会(HGVS)开发，提供数千种专门针对人群中的特殊变异进行的注释。数据库很大一部分是基于Leiden Open Variation Database system建立。Leiden Open VariationDatabase.lovd.nlDECIPHERdecipher.sanger.ac.uk使用Ensemble基因组浏览器，将基因芯片数据和临床表型进行关联，便于临床医生和研究人员使用的细胞分子遗传学数据库。序列数据库NCBI Genome.ncbi.nlm.nih.gov/genome人类全基因组参考序列的来源。RefSeqGene.ncbi.nlm.nih.gov/refseq/rsg医学相关基因参考序列。Locus Reference Genomic (LRG).lrg-sequence.orgMitoMap.mitomap.org/MITOMAP/HumanMitoSeq对“剑桥版-人类线粒体DNA参考序列”进行修订后形成。表2 生物信息分析工具分类名称依据错义预测Consurfconsurftest.tau.ac.il进化保守性FATHMMfathmm.biocompute.org.uk进化保守性MutationAssesmutationassessor.org进化保守性PANTHER.pantherdb.org/tools/csnpScoreForm.jsp进化保守性PhD-SNPsnps.biofold.org/phd-snp/phd-snp.html进化保守性SIFTsift.jcvi.org进化保守性SNP&GOsnps-and-go.biocomp.unibo.it/snps-and-go蛋白结构/功能Align GVGDagvgd.iarc.fr/agvgd_input.php蛋白结构/功能和进化保守性MAPPmendel.stanford.edu/SidowLab/downloads/MAPP/index.html蛋白结构/功能和进化保守性MutationTaster.mutationtaster.org蛋白结构/功能和进化保守性MutPredmutpred.mutdb.org蛋白结构/功能和进化保守性PolyPhen-2genetics.bwh.harvard.edu/pph2蛋白结构/功能和进化保守性PROVEANprovean.jcvi.org/index.php变异序列和蛋白序列同源性之间的相似性比对和测量nsSNPAnalyzersnpanalyzer.uthsc.edu多序列比对和蛋白结构分析Condelbg.upf.edu/fannsdb/综合SIFT、PolyPhen-2和MutationAssessor进行综合预测CADDcadd.gs.washington.edu对于来自模拟变异的等位基因进行不同的注释剪切位点预测GeneSplicer.cbcb.umd.edu/software/GeneSplicer/gene_spl.shtml马尔可夫模型Human Splicing Finder.umd.be/HSF/位置依赖的逻辑MaxEntScangenes.mit.edu/burgelab/maxent/Xmaxentscan_scoreseq.html最大熵原则NetGene2.cbs.dtu.dk/services/NetGene2神经网络NNSplice.fruitfly.org/seq_tools/splice.html神经网络FSPLICE.softberry./berry.phtml?topic=fsplice&group=programs&subgroup=gfind基于权重矩阵模型进行种特异性预测核酸保守性预测GERPmendel.stanford.edu/sidowlab/downloads/gerp/index.html基因组进化速率分析PhastConscompgen.bscb.cornell.edu/phast/保守打分与鉴定保守元件PhyloPcompgen.bscb.cornell.edu/phast/compgen.bscb.cornell.edu/phast/help-pages/phyloP.txt比对和分子进化树：在家系特异或者所有分支中，计算保守或者加速的P值表3 致病变异分级标准致病性证据分类非常强PVS1：当一个疾病的致病机制为功能丧失（LOF）时，无功能变异（无义突变、移码突变、经典1或2的剪接突变、起始密码子变异、单个或多个外显子缺失）注：1. 该基因的LOF是否是导致该疾病的明确致病机制（如GFAP、MYH7）2. 3端末端的功能缺失变异需谨慎解读3.需注意外显子选择性缺失是否影响到蛋白质的完整性4.考虑一个基因存在多种转录本的情况。强PS1：与先前已确定为致病性的变异有相同的氨基酸改变。例如：同一密码子，GC或GT改变均可导致缬氨酸亮氨酸的改变。注意剪切影响的改变。PS2：患者的新发变异，且无家族史（经双亲验证）。 注：仅仅确认父母还不够，还需注意捐卵、代孕、胚胎移植的差错等情况。PS3：体、体外功能实验已明确会导致基因功能受损的变异。 注：功能实验需要验证是有效的，且具有重复性与稳定性。PS4：变异出现在患病群体中的频率显著高于对照群体。注 1：可选择使用相对风险值或者OR值来评估，建议位点OR大于5.0且置信区间不包括1.0的可列入此项。（详细见指南正文）。2：极罕见的变异在病例对照研究可能无统计学