第 6 章 药物的含量测定方法学习目标1. 掌握滴定分析法、紫外-可见分光光度法、高效液相色谱法的应用与计算；2. 理解滴定分析法、紫外-可见分光光度法、高效液相色谱法的、气相色谱法的原理；3. 熟悉紫外-可见分光光度计、高效液相色谱仪的基本结构；4. 了解气相色谱的原理与应用。药物的含量测定方法包括化学分析法和仪器分析法。化学分析法又包括重量分析法和容 量（滴定）分析法；仪器分析法包括紫外-可见分光光度法、红外分光光度法、高效液相色谱 法、气相色谱法、电泳法等。第 1 节 容量分析法容量分析法又称滴定分析法，是化学分析中的重要方法之一，在药物分析中具有重要的 实用价值，占据重要的地位。图 6-1 滴定操作的基本仪器、装置一、概 述滴定分析法，是指使用滴定管将已知准确浓度的试剂溶液，滴加到被测物质的溶液中， 直到所加的试剂与被测组分恰好定量反应完全为止，根据滴定液的浓度和所消耗的体积，计 算出待测组分的含量。滴定中滴加的标准溶液与待测组分恰好反应完全这一点，称为“化学计量点”，而指示剂发生颜色变化的转变点，称为“滴定终点”，实际操作中滴定终点（实际终 点）与化学计量点（理论终点）不可能恰好重合，它们之间往往存在很小的误差，该误差称 为“滴定误差”，滴定误差的大小，取决于滴定反应和指示剂的性能及用量，所以选择适当 的指示剂是滴定分析的重要环节。二、滴定液的配制和标定1. 有关概念：（1）基准物质：指能用于直接配制或标定标准溶液的物质。基准物质应满足条件如下：a. 试剂的组成应与它的化学式完全相符；b. 试剂纯度应足够高，一般大于99.9%以上，杂质含量不影响分析的准确度；c. 试剂性质稳定；d. 试剂按反应式定量进行，应无副反应。（2）滴定度（T）：即每毫升滴定液相当于被测物质的质量（克或毫克）。2. 滴定液（标准溶液）的配制和标定：（1）直接法：准确称取一定量基准物质，溶解后配成一定体积的溶液，根据物质的质量 和体积即可计算出该滴定液的准确浓度。如精制EDTA、KCrO、优级纯AgNO的配制。2 2 7 3（2）间接法：很多物质不能直接用来配制标准溶液，但可将其先配制成一种近似于所需 浓度的溶液，然后用基准物质来标定其准确浓度。如HCl、NaOH、KMnO、Na S O滴定液等。4 2 2 3（3）滴定液的标定：是指根据规定的方法，用基准物质或标准溶液准确测定滴定液浓度 的过程。（4）校正因子（F）：表示滴定液准确浓度与标示浓度的比值。其范围应在1.050.95之 间，超出该范围应加入适当的溶质或溶剂予以调整，并重新标定。案例：0.1mol/L盐酸滴定液的配制与标定1配制方法：取盐酸9.0ml,加水稀释至1000ml，即得。2标定方法：基准物为无水碳酸钠，指示剂为甲基红-溴甲酚绿混合指示液，每1ml的盐酸滴定液（0.1mol/L）相当于5.30mg的无水碳酸钠。如经标定后其真实浓度为0.1012 mol/L，则该滴定液的F值为：一真实浓度 0.1012.卜一丄、亠宀=1.012标示浓度 0.15）标定的注意事项：a. 操作中所用的天平、滴定管、容量瓶和移液管均应校正合格；b. 标定工作应在室温（10C30C ）下进行，并记录标定时的温度；c. 根据滴定液的消耗量选用适宜的滴定管，盛装滴定液前，先用少量滴定液淋洗三次， 盛装滴定液后，应用小烧杯盖住管口；d. 标定中的空白试验，是指在不加供试品或以等量溶剂代替供试液的情况下，按同法滴 定所得的结果；e. 标定工作应由初标者和复标者在相同条件下各做3份平行试验，3份平行试验结果的 相对标准偏差（RSD）不得大于0.1%；初标者的平均值和复标者的平均值的相对标准偏差（RSD） 也不得大于 0.1%；最后结果按初、复标二者的平均值计算，取 4 位有效数字；f. 配制后的滴定液按药典规定的贮藏条件储存，并在瓶外贴上标签，注明滴定液名称、 标示浓度、真实浓度或F值、配制和标定日期、标定时的温度、配制者、标定者、复标者等;g. 当滴定液标定时间过长（一般不超过3个月）、或标定与使用时的温度超过10C时， 应加温度补偿值或重新进行标定；h. 当滴定液出现浑浊或其他异常情况时，不得使用；倒出剩余的滴定液不得再倒回原瓶, 避免污染。三、滴定的分类 根据滴定反应的方式可分为直接滴定法、间接滴定法；根据反应的类型则分为酸碱滴定、 氧化还原滴定、沉淀滴定、配位滴定、非水滴定等。（一） 按反应方式分类：1. 直接滴定法 用滴定液直接滴定被测物质溶液的方式，是最基本、最常用的滴定方式。 如以盐酸滴定液滴定氢氧化钠溶液等。阿司匹林原料药的含量测定就是采用酸碱直接滴定法。其含量计算公式：含量%= V x F x T % 100%Wx1000做空白试验时，应扣除空白消耗的体积，即含量%= （V - Vo）X F xT x 100%Wx1000式中：V为供试品消耗滴定液的体积（ml ）； V为空白试验消耗滴定液的体积（ml ）；0F为滴定液浓度校正因子；T为滴定度（mg / ml）；W为供试品的重量（g）。2. 间接滴定法 包括剩余滴定法和置换滴定法。适用于反应物为固体，或直接滴定反应 速度较慢、滴定缺乏合适指示剂等类型的反应。剩余滴定法（也称返滴定）是先使被测物质A与一定过量的标准溶液B作用，反应完全1后，再用另一种滴定液B,滴定剩余的标准溶液B,由实际消耗的滴定液B的量，计算被测11物质 A 的含量。 例如：阿司匹林片的含量测定。剩余滴定法的含量计算公式：含量%= （V0 - V）X F X T x 100%Wx1000式中：V为供试品消耗滴定液的体积（ml）； V为空白试验消耗滴定液的体积（ml）；0F为滴定液浓度校正因子；T为滴定度（mg / ml）； W为供试品的重量（g）。置换滴定法是对于不按确定的反应式进行（伴随有副反应）的反应，可以不直接滴定被测 物质，而是先用适当试剂与被测物质反应，使其置换出另一生成物，再用滴定液滴定此生成 物，这种方法称为置换滴定法。（二） 按反应的类型分类：1. 酸碱滴定法（中和法） 是在水溶液中以酸碱中和反应来测定物质含量的方法，可用来 测定酸、碱、弱酸盐、弱碱盐等。2. 配位（络合）滴定法 是以形成稳定配合物的配位反应为基础的滴定分析法。主要用 于金属离子的测定，目前应用最广泛的配位滴定剂是EDTA （乙二胺四醋酸二钠），因此通常 所谓的配位滴定法,主要是指使用EDTA滴定液的滴定法，一般选用金属指示剂指示滴定终点。 如葡萄糖酸钙、硫酸锌的含量测定均采用此法，用铬黑T作指示剂。3. 氧化还原滴定法 是以氧化还原反应为基础的一类滴定法。该法在药物分析中应用非 常广泛，即可直接测定具有氧化性或还原性的物质，又可间接测定不具有氧化性或还原性的 物质。在药品检验中应用最多的有碘量法、铈量法和亚硝酸钠滴定法、溴量法。（1）碘量法：是以碘为氧化剂，或以碘化物为还原剂进行滴定的方法。按照滴定的方式 分为直接碘量法、剩余碘量法和置换碘量法。a. 直接碘量法：是用碘滴定液直接滴定还原性物质的方法。在滴定过程中I被还原为I-,2 该法只能在酸性、中性或弱碱性溶液中进行，一般用淀粉指示剂指示终点，淀粉遇碘变蓝色 反应极其灵敏。也可用碘自身的颜色指示终点，化学计量点后，溶液中稍过量的碘即显黄色 而指示终点。如维生素 C 的含量测定。b. 剩余碘量法：是在供试品（还原性物质）溶液中，先加入定量过量的碘滴定液，待I2 与待测组分反应完全后，再用硫代硫酸钠滴定液滴定剩余的碘，来求出待测组分含量的方法。 滴定时用淀粉作指示剂，在近终点时加入，因为当溶液中有大量碘存在时，碘易吸附在淀粉 表面，影响终点的判断。如复方对乙酰氨基酚片中咖啡因的含量测定。c. 置换碘量法：如硫代硫酸钠滴定液的标定即采用该法，以重铬酸钾为基准物，加入碘 化钾置换出定量的碘，碘再用硫代硫酸钠滴定液滴定。案例：复方对乙酰氨基酚片中咖啡因的含量测定精密称取本品的细粉适量（约相当于咖啡因50mg）,加稀硫酸5ml，振摇数分钟 使咖啡因溶解，滤过，滤液置50ml量瓶中，滤器与滤渣用水洗涤3次，每次5ml，洗 液并入量瓶中，精密加入碘液（0.05mol/L） 25ml,用水稀释至刻度，摇匀，在约25C 避光放置15分钟，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液25ml，用硫代硫酸钠滴定液 （0.05mol/L）滴定，至近终点时，加淀粉指示液2ml，继续滴定至蓝色消失，并将滴 定结果用空白试验校正，即得。每1ml的碘滴定液（0.05mol/L）相当于5.305mg的 咖啡因（CH NO H0）。8 10 4 22含量测定结果的计算公式为：50 （V - V） x C x 5.305 x x W标示百分含量= 丄一一5 x 100%0.1 x W x标示量式中：V为空白试验时消耗硫代硫酸钠滴定液的体积（ml）;0V为样品测定时消耗硫代硫酸钠滴定液的体积（ml）;C为硫代硫酸钠滴定液的浓度（mol/L）;W为样品的称量（g）;丽为平均片重（克/片）。（2）铈量法：也称硫酸铈法，是以硫酸铈Ce （SO）作为滴定液，在酸性条件下测定还42原性物质的滴定方法。采用邻二氮菲作指示剂，化学计量点后，Fe2+被氧化成Fe3+，生成邻二 氮菲铁，由红色转变为淡蓝色而指示终点。铈量法由于不受制剂中淀粉、糖类的干扰，因此特别适合片剂、糖浆剂等制剂的测定。中国药典2005年版采用铈量法测定的药物有：硫酸亚铁片及硫酸亚铁缓释片、葡萄糖酸 亚铁及其制剂、富马酸亚铁及其制剂等。案例：硫酸亚铁片的含量测定取本品10片，置200ml量瓶中，加稀硫酸60ml与新沸过的冷水适量，振摇使硫酸 亚铁溶解，用新沸过的冷水稀释至刻度，摇匀，用干燥滤纸迅速滤过，精密量取续滤液 30ml，加邻二氮菲指示液数滴，立即用硫酸铈滴定液（0.1mol/L）滴定。每1ml的硫酸 铈湔定液（0.1mol/L）相当于27.80mg的FeS07H 0。（使用新沸过的冷水溶解样品是42为了避免水中的0氧化Fe2+而干扰测定。）2含量测定结果的计算公式为：30 x 10 x标示量标示百分含量%= V X 2780x F严10-3 x 100%其中：V为消耗硫酸铈滴定液的体积（ml）;CF为浓度换算因数，F=，其中C为硫酸铈滴定液的实际浓度（mol/L）。0.1（3）亚硝酸钠滴定法：是利用亚硝酸钠滴定液在盐酸溶液中与具有芳伯氨基的化合物发 生重氮化反应，定量生成重氮盐，根据消耗亚硝酸钠的量来计算药物含量的方法。如盐酸普 鲁卡因的含量测定。滴定条件：a. 过量盐酸：加快反应速度，重氮盐在酸性条件下稳定，防止偶氮化合物形成；b. 室温（10C30C）条件：温度过高使亚硝酸逸失，过低反应速度太慢；c. 滴定时一般需加入KBr作为催化剂，加快重氮化反应速度；d. 滴定方式：开始时滴定管尖端插入液面下，在搅拌下迅速加入，避免亚硝酸损失； 近终点时滴定管提出液面，淋洗、缓慢滴定；e. 终点指示法：永停滴定法或外指示剂法；（4）溴量法：以溴的氧化作用和溴代作用为基础，配制溴酸钾和溴化钾混和溶液进行分 析测定。在酸性溶液中生成的溴与被测物反应完成后，加入KI与剩余Br作用，用硫代硫酸2钠滴定生成的碘。主要用来测定能和Br发生溴代反应或能被溴氧化的药物含量。如司可巴比2妥钠的含量测定、盐酸去甲肾上腺素的含量测定等。常用的滴定液有Na SO滴定液和Br滴