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紫外吸收法测定蛋白质含量(一)目的学会用紫外吸收法测定蛋白质含量的方法。(二)仪器751型分光光度计(三)原理大多数蛋白质由于有酷氨酸和色氨酸的存在,白质含量的测定。但是核酸在280nm也有吸收,warburg等测定了酵母烯醇酶和酵母核酸在消除核酸存在的影响,可以求得有核酸存在时蛋白质的浓度。该方法是以酵母烯酶蛋白和酵母核酸为标准建立计算公式,也不同,因而光吸收也不尽相同,这就会带来误差。在紫外光280nm有吸收高峰,可以进行蛋干扰测定,不过核酸的最大吸收峰在260nm,280nm和260nm时A的比值,然后通过计算而不同蛋白质的氨基酸组成(四)方法步骤1叮待测样品溶液置于光径1cm的石英比色杯中,于751型分光光度计波长280nm和260nm,分别读取A和A,用蒸馏水(缓冲溶液或盐溶液,视样品溶液而定)为比色空白280260对照。2根据下列公式计算样品中的蛋白质含量。蛋白质含量(mg/ml)=1.55A0.76A280260(五)实验报告计算所测材料蛋白质的含量。(六)思考题1、这里介绍了几种测定蛋白质含量的方法,它们所根据的原理是什么?2、试比较测定蛋白质含量的几种方法的优缺点。
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